Name: La prueba de infección de planta: Spray y mediada por la herida la inoculación con el patógeno de planta Magnaporthe Grisea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Aprende a realizar ensayos de infección en plantas mediante inoculación por aspersión y herida con Magnaporthe grisea. Este protocolo permite el cribado rápido y a gran escala de patotipos fúngicos en cultivos como arroz y cebada.

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Este trabajo fue apoyado por el proyecto especial de investigación científica de la Universidad de agricultura de Beijing (YQ201603) y el proyecto científico de la Comisión de Educación de Beijing (KM201610020005).

1. aerosol de inoculación con una suspensión de conidios de M. grisea
<ol><li>
Cultura fungicida para M.grisea
	<ol>
<li>Preparar el medio de cultivo agar (OTA) de avena tomate cepas fúngicas.</li>
		<li>Pesan 30-50 g de harina de avena, añadir a 800 mL de agua destilada/desionizada (ddH2O) y hervir la mezcla durante 30 minutos en la olla eléctrica.</li>
		<li>Filtrar el jugo de avena hervida en el vaso a través de un trozo de Gasa.</li>
		<li>Agregar 150 mL de jugo de tomate y 20 g de agar para el filtrado en el vaso de precipitados y agregar ddH2O hasta 1.000 mL.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparación de materiales experimentales
	<ol>
<li>Empapar unas 50 semillas de cultivares de arroz (Oryza sativa) Lijiangxintuan-heigu (LTH) en Dec2O para 3 d o remoje unas 50 semillas de cebada (Hordeum vulgare cv oro promesa) ddH2O aproximadamente 1 d.</li>
		<li>Envolver las semillas de arroz o cebada en una gasa húmeda y germinar en papel de filtro humedecido en cerca de 30 platos de Petri con un diámetro de 10 cm x 10 cm a 28 ° C. El tiempo de germinación de semilla de arroz es alrededor de 2-3 d, el tiempo de germinación de semilla de cebada es alrededor d 2. La humedad relativa en el invernadero es aproximadamente 70%.</li>
		<li>Planta las plantas de semillero del arroz o de cebada en macetas utilizando encapsulamiento suelo esterilizado y el riego y luego cubrirlas con una capa de aislante de vermiculita.</li>
		<li>Coloque las plantas en un invernadero adecuado o crecimiento gabinete a 25 ° C por aproximadamente 1 ~ 2 semanas.</li>
		<li>Cortar 3 capas de papel de filtro en los círculos con tijera quirúrgica estéril (cada círculo debe tener un diámetro de 8 cm) y colocar sobre placas de plástico estériles de 100 mm.</li>
		<li>Añadir ddH2O a cada plato para remojar el papel de filtro.</li>
		<li>Asegúrese de que el papel de filtro esté completamente húmedo pero sin agua adicional.</li>
		<li>Eliminar cualquier exceso de agua con una bomba de vacío.</li>
		<li>Coloque 2 mondadientes estériles en la placa de cultivo para el arroz/cebada hojas; espacio los escarbadientes ~ 2-3 cm de separación.</li>
		<li>Recoger las hojas del arroz 2 semanas después de la siembra las semillas o tomar las hojas de la cebada 7 d después de la siembra de las semillas.</li>
		<li>Con 4 a 6 hojas plántulas de arroz/cebada, corte la parte inferior del tallo en ~ 5 cm de la tapa y recoger las hojas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Protocolo de inoculación de aerosol
	<ol>
<li>La cultura la cepa fúngica en las placas de la OTA en una incubadora termostática (25 ° C) d ~ 4.</li>
		<li>Añadir 2 mL de ddH2O usando un 0.5 - pipeta de 5 mL en cada placa de 4 días de edad.</li>
		<li>Con un asa de inoculación, raspar el micelio de la cepa de tipo salvaje de M. grisea y la cepa mutante en restos de micelio.</li>
		<li>Recoger los restos de micelio y transferirlo a una placa nueva de OTA. Tomar la ruina del micelio y el golpe seco en la mesa de trabajo limpia.</li>
		<li>Cubra la placa con 3 capas de gasa para asegurar la humedad necesaria para el crecimiento de los conidios en un invernadero a 25 ° C en el día (14 h) y a 23 ° C en la noche (10 h) durante 24-48 h.</li>
		<li>Añadir 2 mL de ddH2O a cada plato y raspar suavemente los conidios con torundas de algodón estériles, seguidas de una filtración a través de 2 capas de papel de lente. Tenga cuidado de no rayar la superficie del medio de cultivo.</li>
		<li>Transferir la suspensión de conidios en un nuevo tubo de 50 mL con una pipeta de 100-1.000 μl.</li>
		<li>Centrifugar durante 5 minutos a un mínimo de 5.000 x g a 25 ° C.</li>
		<li>Quite el sobrenadante y resuspender el precipitado para dar 2 x 104 conidios por mL en un 0,025% (v/v) solución de Tween-20. La solución de Tween-20 es generalmente alrededor 10-20 mL.</li>
		<li>Verter la suspensión de esporas en un rociador de mano.</li>
		<li>Esterilización aproximadamente 10 mL de la suspensión conidial en las hojas de arroz de las plántulas de 2 semanas de edad arroz o cebada hojas de plántulas de cebada 7 días de edad e incúbelos a 25 ° C en una cámara oscura, húmeda de ~ 24 h. aerosol las plantas control con 0,025% (v/v) solución de Tween-20.</li>
		<li>Transferir las hojas en otra cámara húmeda bajo luz fluorescente a 25 ° C para un fotoperíodo de 12 h.</li>
		<li>Registrar los síntomas de la enfermedad a los 5 días después de la inoculación. Examinar las hojas de arroz enfermas/cebada ~ 6 cm de longitud. La evaluación estándar está según el sistema de puntuación para la resistencia de la explosión del Instituto Internacional de investigación de arroz (IRRI). Los detalles del sistema de puntuación para la resistencia de la explosión se muestran en la tabla 1.</li>
		<li>Fotografiar las hojas para evaluar la infección de las cepas probadas. La infección fue determinada por el número de lesiones por 3,6 cm2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. herida de inoculación con cubos de micelio o gotas de la suspensión Conidial de M. grisea
<ol><li>Utilizando una aguja anatómica, rasque tres heridas largo 2-3 cm en las venas principales de las hojas de arroz/cebada individual; Tenga cuidado de no para penetrar en las hojas.</li>
	<li>Poner las hojas raspadas en palillos de dientes y un 0,02% (v/v) solución de Tween-20 en las hojas para formar una capa de gotitas de aerosol.</li>
	<li>Cortar un enchufe micelial de 0,5 x 0,5 cm para cada cepa de M. grisea (cepas del tipo salvaje, mutante, complemento y otras cepas de prueba) de una placa OTA.</li>
	<li>Poner los tapones miceliales o gotas de 25 μl de la suspensión conidial en los heridos deja e incubar las hojas a 25 ° C en cámara húmeda durante 3-8 días.</li>
	<li>Examinar las lesiones en inoculación tras 5-7 días. El método de examen es el mismo como lo fue para el método de inoculación del aerosol (ver paso 1.3.13).</li>
	<li>Examinar las hojas de arroz enfermas/cebada ~ 6 cm de longitud y fotografiarlos para evaluar la infección de las cepas probadas. La infección fue determinada por el número de lesiones por 3,6 cm2.</li>
</ol>

<ol><li>Li, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+natural+allele+of+a+transcription+factor+in+rice+confers+broad-spectrum+blast+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance.</a> Cell. 170 (1), 114-126 (2017).</li>
<li>Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+pathogenicity+gene+is+required+in+the+rice+blast+fungus+to+suppress+the+basal+defenses+of+the+host%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">A novel pathogenicity gene is required in the rice blast fungus to suppress the basal defenses of the host.</a> PLoS Pathogens. 5 (4), 1000401(2009).</li>
<li>Jia, Y., Valent, B., Lee, F. N. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS.2003.87.2.129">Determination of host responses to Magnaporthe grisea.on detached rice leaves using a spot inoculation method.</a> Plant Disease. 87 (2), 129-133 (2003).</li>
<li>Ebbole, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnaporthe+as+a+model+for+understanding+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Magnaporthe as a model for understanding host-pathogen interactions.</a> Annual Review of Phytopathology. 45, 437-456 (2007).</li>
<li>Hamer, J. E., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection-related+development+in+the+rice+blast+fungus+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Infection-related development in the rice blast fungus Magnaporthe grisea.</a> Current Opinion in Microbiology. 1 (6), 693-697 (1998).</li>
<li>Howard, R. J., Valent, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+and+entering%3A+host+penetration+by+the+fungal+rice+blast+pathogen+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Breaking and entering: host penetration by the fungal rice blast pathogen Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 50, 491-512 (1996).</li>
<li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Glycosylation+of+Effector+Proteins+by+an+%CE%B1-1%2C3-+Mannosyltransferase+Is+Required+for+the+Rice+Blast+Fungus+to+Evade+Host+Innate+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">N-Glycosylation of Effector Proteins by an α-1,3- Mannosyltransferase Is Required for the Rice Blast Fungus to Evade Host Innate Immunity.</a> The Plant Cell. 26 (3), 1360-1376 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M.ARG1%2C+MoARG5%2C6+and+MoARG7+involved+in+arginine+biosynthesis+are+essential+for+growth%2C+conidiogenesis%2C+sexual+reproduction%2C+and+pathogenicity+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiological+Research%22%5BJournal%5D)">M.ARG1, MoARG5,6 and MoARG7 involved in arginine biosynthesis are essential for growth, conidiogenesis, sexual reproduction, and pathogenicity in Magnaporthe oryzae.</a> Microbiological Research. 180, 11-22 (2015).</li>
<li>Du, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serine%2Fthreonine-protein+phosphatase+PP2A+catalytic+subunit+is+essential+for+asexual+development+and+plant+infection+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Genetics%22%5BJournal%5D)">A serine/threonine-protein phosphatase PP2A catalytic subunit is essential for asexual development and plant infection in Magnaporthe oryzae.</a> Current Genetics. 59 (1-2), 33-41 (2013).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+protein+com1+is+required+for+normal+conidium+morphology+and+full+virulence+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant-Microbe+Interactions%22%5BJournal%5D)">A novel protein com1 is required for normal conidium morphology and full virulence in Magnaporthe oryzae.</a> Molecular Plant-Microbe Interactions. 23 (1), 112-123 (2010).</li>
<li>Cao, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ash1-like+protein+MoKMT2H+null+mutant+is+delayed+for+conidium+germination+and+pathogenesis+in+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">An ash1-like protein MoKMT2H null mutant is delayed for conidium germination and pathogenesis in Magnaporthe oryzae.</a> BioMed Research International. 2016, 1575430(2016).</li>
<li>Bryan, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+difference+distinguishes+resistant+and+susceptible+alleles+of+the+rice+blast+resistance+gene+Pi-ta%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">A single amino acid difference distinguishes resistant and susceptible alleles of the rice blast resistance gene Pi-ta.</a> The Plant Cell. 12 (11), 2033-2045 (2000).</li>
<li>Zhou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+pathology%3A+a+life+and+death+struggle+in+rice+blast+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Plant pathology: a life and death struggle in rice blast disease.</a> Current Biology. 26 (18), 843-845 (2016).</li>
<li>Guo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MoGrr1%2C+a+novel+F-box+protein%2C+is+involved+in+conidiogenesis+and+cell+wall+integrity+and+is+critical+for+the+full+virulence+of+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">MoGrr1, a novel F-box protein, is involved in conidiogenesis and cell wall integrity and is critical for the full virulence of Magnaporthe oryzae.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 99 (19), 8075-8088 (2015).</li>
<li>Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+trail+of+a+cereal+killer%3A+Exploring+the+biology+of+Magnaporthe+grisea%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">On the trail of a cereal killer: Exploring the biology of Magnaporthe grisea.</a> Annual Review of Microbiology. 57, 177-202 (2009).</li>
<li>Wilson, R. A., Talbot, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Under+pressure%3A+investigating+the+biology+of+plant+infection+by+Magnaporthe+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae.</a> Nature Reviews Microbiology. 7, 185-195 (2009).</li>
<li>Jia, Y. L., Lee, F. N., McClung, A. <a target="_blank" href="https://apsjournals.apsnet.org/doi/10.1094/PDIS-93-6-0639">Determination of Resistance Spectra of the Pi-ta and Pi-k Genes to U.S. Races of Magnaporthe oryzae Causing Rice Blast in a Recombinant Inbred Line Population.</a> Plant Disease. 93, 639-644 (2009).</li>
<li>Peng, Y. L., Shishiyama, J. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/b88-107?journalCode=cjb1#.WvnHgogvzIU">Temporal sequence of cytological events in rice leaves infected with Pyricularia oryzae.</a> Canadian Journal of Botany. 66 (4), 730-735 (1988).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Genes de resistencia a la enfermedad de planta juegan un papel esencial en la prevención de infecciones por patógenos, incluyendo hongos patógenos1,12. Ráfaga del arroz se ha utilizado como modelo para comprender la naturaleza de las estructuras de población de patógeno y a la identificación de genes de resistencia de planta4. Por lo tanto, es necesario examinar el genotipo de resistencia a la enfermedad y avirulencia genotipos de las prin...

Ráfaga del arroz, causada por M. grisea, es una de las más graves enfermedades de variedades de arroz en todo el mundo1,2. El proceso por el cual M. grisea infecta plantas hospederas incluye una producción de conidios y accesorio de la superficie, una germinación de conidias y formación de apresorio, una formación de la peg de penetración y diferenciación de la hifa infecciosas, y una enfermedad 3. todas estas etapas son comunes en muchos otros hongos patógenos de plantas, y, de hecho, un bloqueo de cualquier sola etapa previene la infección de plantas hospederas. Debido a su importancia económica y maleabilidad genética, M. grisea surgió como un organismo modelo para estudiar los mecanismos de la planta-hongo patógeno interacciones1,4. Por lo tanto, estudiar las bases moleculares de estas etapas de desarrollo de M. grisea ayudarán a dilucidar los mecanismos moleculares subyacentes la patogenicidad de hongos y la identificación de genes diana de candidato para la proyección y diseño de la novela fungicidas5.
Informes recientes sobre la infección de M. grisea se han centrado en los mecanismos moleculares de las etapas de la penetración, sobre todo la conidiation, la formación de apresorio, las clavijas de la penetración y el crecimiento infeccioso3, 6. por lo tanto, es esencial desarrollar un protocolo detallado para probar infección de M. grisea . Adjunto, presentamos un método detallado para una prueba de infección que utiliza análisis de infección mediada por el aerosol con una suspensión conidial y la inoculación de heridas con tapones miceliales de M. grisea. En este informe, el protocolo se centra en el cultivo de cepas, la preparación de la solución conidiation para la fumigación y la micelial mediada por el enchufe de la inoculación de plantas con M. grisea. Estos pasos se describen en detalle más adelante y una vista esquemática que muestra el flujo de trabajo del método y una lesión típica se muestran en las figuras 1 y 2, respectivamente.

<table><tbody><tr><td>Papel de filtro</td><td>de la marca GE Healthcare (Suecia) &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>10311387</tr><tr><td>tubo de 50 ml</td><td>CORNING(Amercia)</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf(Amercia)</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>Plato de cultivo</td><td>Thermofisher(Amercia)</td><td>150326</td><td></td></tr><tr><td>pipeta de 0,5-5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; </td><td></td>4920000105</tr><tr><td>Pipeta de 100-1000 uL</td><td>Eppendorf</td><td>4920000083</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de vacío</td><td>Leybold</td><td>D25B</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de disección</td><td>FST</td><td>26000-35</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>MEMMERT</td><td>PYX313</td><td></td></tr><tr><td>Anillo de inoculación</td><td>Greiner Bio One</td><td>731175</td><td></td></tr></tbody></table>

la prueba de infección de planta: spray y mediada por la herida la inoculación con el patógeno de planta magnaporthe grisea

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Las plantas poseen un potente sistema para defenderse de posibles amenazas por hongos patógenos. Plantas agrícola importantes, sin embargo, las medidas actuales para combatir estos patógenos han demostrado ser demasiado conservadoras, y por lo tanto, no suficientemente eficaz y puede potencialmente riesgos ambientales. Por lo tanto, es extremadamente necesario identificar los factores de resistencia del hospedante para ayudar a controlar enfermedades de las plantas naturalmente a través de la identificación de germoplasma resistente, el aislamiento y caracterización de genes de resistencia y la reproducción molecular de cultivares resistentes. En este sentido, es necesario establecer un método de inoculación precisa, rápida y a gran escala para criar y desarrollar los genes de resistencia de la planta. El arroz explosión patógeno hongo Magnaporthe grisea causas enfermedad severa síntomas y pérdidas de rendimiento. Recientemente, M. grisea ha emergido como un organismo modelo para estudiar los mecanismos de las interacciones planta-hongo patógeno. Por lo tanto, se presenta el desarrollo de un método de prueba de virulencia de planta que es específico para M. grisea. Este método proporciona para spray de inoculación con una suspensión conidial e hirió a inoculación con cubos de micelio o gotas de la suspensión conidial. El paso clave del método de inoculación hiriente para hojas de arroz separado es hacer heridas en las hojas de la planta, que evita cualquier interferencia causada por resistencia a la penetración host. Este spray/hiriendo a protocolo contribuye a la proyección rápida, precisa y en gran escala de los patotipos de aislamientos de M. grisea . Este integrado y método de infección sistemática planta servirá como un excelente punto de partida para obtener una perspectiva amplia de temas en Fitopatología.

El flujo de trabajo para la técnica se muestra en la figura 1. Los ensayos de infección de la planta fueron realizados en 14 días de edad susceptibles de arroz (o. sativa cv CO-39) o las hojas de cebada de 7 días de edad susceptible (H. vulgare cv oro promesa)7,8,9. Para comprobar una infección en las hojas de arroz, una suspensión conidial (1.0 x 1...

Aquí, presentamos un protocolo para prueba de virulencia de la planta con el patógeno de la planta grisea de Magnaporthe. Este informe contribuirá a la proyección a gran escala de los patotipos de aislamientos de hongos y servir como un excelente punto de partida para la comprensión de los mecanismos resistentes de las plantas durante la reproducción molecular.

La prueba de infección de planta: Spray y mediada por la herida la inoculación con el patógeno de planta Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Este video puede ayudar a instruir métodos clave en el campo de la infección de plantas, como la inoculación libre y deseada mediada con el patógeno de plantas Magnaporthe grisea. La principal ventaja de esta técnica es que el protocolo de fumigación y herida contribuye a la detección rápida, precisa y a gran escala de los patotipos de los hongos aislados. Las implicaciones de esta técnica se relacionan con el estudio de la fisiología para combatir los patógenos de las plantas, ya que es muy importante para la prevención y el control de enfermedades de las plantas a gran escala.Este método puede proporcionar información sobre el mecanismo de conservación de la patogenia en los hongos. También se puede aplicar a las principales variedades de plantas agrícolas como el arroz o la cebada. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque es difícil raspar suavemente los conidios con los hisopos de algodón estériles.La demostración de este método es crítica, ya que es difícil una colección de heridas de raspado sin penetrar en las hojas, ya que es difícil desprender hojas de arroz o cebada. Para empezar, pesa de 30 a 50 gramos de avena. Agrega la avena a 800

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Investigación

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Entorno

Una célula de la muerte de ensayo basado en la PTI en plantas de Nicotiana benthamiana se describe.

Ensayo para asociados a patógenos patrón molecular (PAMP)-Accionados Inmunidad (PTI) en las plantas

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

Este video muestra una técnica para establecer la infección por el hongo patógeno Magnaporthe grisea en las hojas de la planta de arroz. La suspensión de conidios fúngicos se rocía en secciones de hoja de arroz y la progresión de la enfermedad se evalúa mediante la puntuación de la formación de lesiones necróticas.

Una técnica de inoculación por aspersión para establecer una infección fúngica en las hojas de la planta de arroz

Este video demuestra el establecimiento de la infección de la hoja de la planta de arroz a través de la inoculación hiriente con micelio de Magnaporthe grisea. El tubo germinativo derivado de las esporas de hongos penetra en la capa epidérmica, lo que provoca una infección del tejido y lesiones en las hojas. Este método ayuda a la detección de patotipos y mejora la comprensión de la resistencia de las plantas para el mejoramiento molecular.

Establecimiento de la infección de la hoja de la planta de arroz a través de la inoculación de hongos a través de heridas

Este protocolo se muestran dos métodos de inoculación para introducir el hongo...

Establecimiento de hongos entomopatógenos como endófitos: Hacia Control Biológico Endofítico

Se describe el uso de un método de inyección con aguja para inocular plantas de maíz y teosinto con el patógeno biotrófico Ustilago maydis.  El método de inoculación por inyección de agujas facilita la entrega controlada del patógeno fúngico entre las hojas de la planta donde el patógeno entra en la planta a través de la formación de appresoria. Este método es altamente eficiente, permitiendo inoculaciones reproducibles con U. maydis.

Un método rápido y eficiente para evaluar la patogenicidad de Ustilago maydis en las líneas de maíz y teosinte

La cuantificación del crecimiento de patógenos es una poderosa herramienta para caracterizar diversas respuestas inmunitarias de Arabidopsis thaliana (en adelante: Arabidopsis). El método descrito aquí presenta un ensayo optimizado de infiltración de jeringas para cuantificar la Pseudomonas syringae pv. Maculicola ES4326 crecimiento en hojas adultas de Arabidopsis.

Ensayo de infiltración bacteriana de la hoja por Fine Caracterización de las respuestas de defensa de la planta utilizando el<em&gt; Thaliana-Pseudomonas syringae Arabidopsis</em&gt; Patosistema

Presentamos un protocolo para construir un sistema simple de distribución de esporas que consiste en una caja de inoculación con una malla de ~ 50 μm y una cámara de plástico transparente. Esto se puede utilizar para inocular uniformemente las plantas con esporas de mildiú polvoriento, lo que permite una evaluación precisa y reproducible de los fenotipos de enfermedades de las plantas en estudio.

Un método de inoculación fácil y flexible para evaluar con precisión los fenotipos de infección por mildiú polvoriento de Arabidopsis y otras plantas

Pinchar la cabeza basal de la planta de pimienta negra es un método breve y que ahorra tiempo para dañarla. Aquí, proporcionamos pasos detallados con un video para infectar plantas de pimienta negra.

Un método de inoculación eficaz para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra

Este protocolo presenta un resumen detallado de las estrategias para inocular las raíces de las plantas con microbios transmitidos por el suelo. Ejemplificado para los hongos Verticillium longisporum y Verticillium dahliae, se describen tres sistemas diferentes de infección radicular. Se destacan las aplicaciones potenciales y los posibles análisis posteriores, y se discuten las ventajas o desventajas para cada sistema.

Estrategias de inoculación para infectar las raíces de las plantas con microorganismos transmitidos por el suelo

En este manuscrito se detalla un protocolo de inoculación optimizado que utiliza vainas de hojas de maíz desprendidas para estudios citológicos, fisiológicos y moleculares reproducibles de las interacciones del maíz con los patógenos fúngicos de las plantas. Las vainas de las hojas facilitan la observación en tiempo real de las interacciones celulares entre la planta viva y el hongo en tejidos no fijados.

Vainas de maíz desprendidas para la obtención de imágenes de células vivas de la infección por patógenos fúngicos foliares del maíz

Aprende a realizar ensayos de infección en plantas mediante inoculación por aspersión y herida con Magnaporthe grisea. Este protocolo permite el cribado rápido y a gran escala de patotipos fúngicos en cultivos como arroz y cebada.

La prueba de infección de planta: Spray y mediada por la herida la inoculación con el patógeno de planta Magnaporthe Grisea

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