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DOI: 10.3791/57690-v
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Aquí, presentamos un protocolo para la localización de varios color de proteínas de membrana único en organelos de células vivas. Para colocar fluoróforos, se usan proteínas auto etiquetadas. Proteínas, situadas en compartimientos diferentes membranas de la mismo orgánulo, se pueden localizar con una precisión de ~ 18 nm.
Esta técnica puede responder a preguntas clave en los procesos de regulación, como el papel que juegan la dinámica y la organización de las proteínas en la adaptación funcional. La principal ventaja de esta técnica es que se puede realizar en células vivas, revelando así la dinámica de las proteínas a nivel de una sola molécula. Aunque este método se implementó originalmente para proporcionar información sobre la organización espacio-temporal de las proteínas de la membrana mitocondrial, también se puede aplicar a otros orgánulos y otras proteínas de la membrana.
La demostración de la técnica estará a cargo de Timo Appelhans, un estudiante de posgrado de mi laboratorio. Después de transfectar y preparar las muestras de células y el microscopio de acuerdo con el protocolo de texto, monte la muestra preparada con perlas fluorescentes en el portamuestras entre el anillo de PTFE y el anillo de goma roja. Encienda el microscopio, todos los componentes de hardware y todo el software necesario para la microscopía.
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