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JoVE Journal Biology
Multi-color Localization Microscopy of Single Membrane Proteins in Organelles of Live Mammalian Cells

Microscopía de localización de varios colores solo de proteínas de membrana en organelos de células mamíferas vivas

Full Text
9,132 Views
11:06 min
June 30, 2018

DOI: 10.3791/57690-v

Timo Appelhans1, Felix R.M. Beinlich1, Christian P. Richter1, Rainer Kurre2, Karin B. Busch1,3

1School of Biology,University of Osnabrück, 2Center of Cellular Nanoanalytics, Integrated Bioimaging Facility,University of Osnabrück, 3Department of Biology,WWU Münster

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aquí, presentamos un protocolo para la localización de varios color de proteínas de membrana único en organelos de células vivas. Para colocar fluoróforos, se usan proteínas auto etiquetadas. Proteínas, situadas en compartimientos diferentes membranas de la mismo orgánulo, se pueden localizar con una precisión de ~ 18 nm.

Esta técnica puede responder a preguntas clave en los procesos de regulación, como el papel que juegan la dinámica y la organización de las proteínas en la adaptación funcional. La principal ventaja de esta técnica es que se puede realizar en células vivas, revelando así la dinámica de las proteínas a nivel de una sola molécula. Aunque este método se implementó originalmente para proporcionar información sobre la organización espacio-temporal de las proteínas de la membrana mitocondrial, también se puede aplicar a otros orgánulos y otras proteínas de la membrana.

La demostración de la técnica estará a cargo de Timo Appelhans, un estudiante de posgrado de mi laboratorio. Después de transfectar y preparar las muestras de células y el microscopio de acuerdo con el protocolo de texto, monte la muestra preparada con perlas fluorescentes en el portamuestras entre el anillo de PTFE y el anillo de goma roja. Encienda el microscopio, todos los componentes de hardware y todo el software necesario para la microscopía.

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Solo biología número 136 seguimiento microscopía de superresolución de dos colores localización de molécula única tintes del rhodamine mitocondrias dinámica de proteínas de membrana la molécula en vivo la proyección de imagen de la célula

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