Name: Evaluar la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz de Host-microbio In Vitro Gut (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Aprende a evaluar interacciones hospedador-microbio intestinal usando un modelo in vitro con comunidad bacteriana sintética. Este método permite estudiar invasión de patógenos y viabilidad de probióticos.

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Los autores reconocen con gratitud el apoyo financiero de la Fundación de investigación de Flandes a Marta Calatayud Arroyo (FWO postdoctoral fellowship-12N2815N). Emma Hernandez-Sanabria es una beca posdoctoral apoyada por Flandes innovación y emprendimiento (Agentschap voor innovadores puerta Wetenschap en Technologie, IWT).

<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+estimates+for+the+number+of+human+and+bacteria+cells+in+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Revised estimates for the number of human and bacteria cells in the body.</a> PLoS Biology. 14, e1002533(2016).</li>
<li>Kelly, D., King, T., Aminov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+microbial+colonization+of+the+gut+in+early+life+to+the+development+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research-Fundamental+and+Molecular+Mechanisms+of+Mutagenesis%22%5BJournal%5D)">Importance of microbial colonization of the gut in early life to the development of immunity.</a> Mutation Research-Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. , 58-69 (2007).</li>
<li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+normal+bacterial+flora+of+the+oral+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Defining the normal bacterial flora of the oral cavity.</a> Journal of Clinical Microbiology. 43, 5721-5732 (2005).</li>
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<li>Slomka, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+stimulation+of+commensal+oral+bacteria+suppresses+pathogens%3A+the+prebiotic+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Periodontology%22%5BJournal%5D)">Nutritional stimulation of commensal oral bacteria suppresses pathogens: the prebiotic concept.</a> Journal of Clinical Periodontology. 44, 344-352 (2017).</li>
<li>Hernandez-Sanabria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+increased+respiratory+activity+of+selected+oral+bacteria+may+explain+competitive+and+collaborative+interactions+in+the+oral+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+and+Infection+Microbiology%22%5BJournal%5D)">In vitro increased respiratory activity of selected oral bacteria may explain competitive and collaborative interactions in the oral microbiome.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 235(2017).</li>
<li>Alvarez, G., Gonzalez, M., Isabal, S., Blanc, V., Leon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+to+quantify+live+and+dead+cells+in+multi-species+oral+biofilm+by+real-time+PCR+with+propidium+monoazide%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Method to quantify live and dead cells in multi-species oral biofilm by real-time PCR with propidium monoazide.</a> AMB Express. 3, (2013).</li>
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<li>Hernandez-Sanabria, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+particular+bacterial+PCR-denaturing+gradient+gel+electrophoresis+patterns+with+bovine+ruminal+fermentation+parameters+and+feed+efficiency+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Correlation of particular bacterial PCR-denaturing gradient gel electrophoresis patterns with bovine ruminal fermentation parameters and feed efficiency traits.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76, 6338-6350 (2010).</li>
<li>Masters, J. R., Stacey, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+medium+and+passaging+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Changing medium and passaging cell lines.</a> Nature Protocols. 2, 2276-2284 (2007).</li>
<li>Calatayud, M., Velez, D., Devesa, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+inorganic+arsenic+in+intestinal+epithelial+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of inorganic arsenic in intestinal epithelial cell lines.</a> Chemical Research in Toxicology. 25, 2402-2411 (2012).</li>
<li>Minekus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardised+static+in+vitro+digestion+method+suitable+for+food+-+an+international+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Food+%26+Function%22%5BJournal%5D)">A standardised static in vitro digestion method suitable for food - an international consensus.</a> Food & Function. 5, 1113-1124 (2014).</li>
<li>Berney, M., Hammes, F., Bosshard, F., Weilenmann, H. U., Egli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+and+interpretation+of+bacterial+viability+by+using+the+LIVE%2FDEAD+BacLight+kit+in+combination+with+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Assessment and interpretation of bacterial viability by using the LIVE/DEAD BacLight kit in combination with flow cytometry.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73, 3283-3290 (2007).</li>
<li>Props, R., Monsieurs, P., Mysara, M., Clement, L., Boon, N. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/2041-210X.12607">Measuring the biodiversity of microbial communities by flow cytometry.</a> Methods in Ecology and Evolution. 7, 1376-1385 (2016).</li>
<li>Yamashita, Y., Takeshita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oral+microbiome+and+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">The oral microbiome and human health.</a> Journal of Oral Science. 59, 201-206 (2017).</li>
<li>Wade, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oral+microbiome+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">The oral microbiome in health and disease.</a> Pharmacological Research. 69, 137-143 (2013).</li>
<li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+resource+for+cell+line+authentication%2C+annotation+and+quality+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A resource for cell line authentication, annotation and quality control.</a> Nature. 520, 307(2015).</li>
<li>Pelaseyed, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mucus+and+mucins+of+the+goblet+cells+and+enterocytes+provide+the+first+defense+line+of+the+gastrointestinal+tract+and+interact+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The mucus and mucins of the goblet cells and enterocytes provide the first defense line of the gastrointestinal tract and interact with the immune system.</a> Immunological Reviews. 260, 8-20 (2014).</li>
<li>Bengoa, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simulated+gastrointestinal+conditions+increase+adhesion+ability+of+Lactobacillus+paracasei+strains+isolated+from+kefir+to+Caco-2+cells+and+mucin%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Simulated gastrointestinal conditions increase adhesion ability of Lactobacillus paracasei strains isolated from kefir to Caco-2 cells and mucin.</a> Food Research International. 103, 462-467 (2018).</li>
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<li>Laparra, J. M., Sanz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+in+vitro+models+to+study+bacterial+adhesion+to+the+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Comparison of in vitro models to study bacterial adhesion to the intestinal epithelium.</a> Letters in Applied Microbiology. 49, 695-701 (2009).</li>
<li>Gagnon, M., Berner, A. Z., Chervet, N., Chassard, C., Lacroix, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Caco-2%2C+HT-29+and+the+mucus-secreting+HT29-MTX+intestinal+cell+models+to+investigate+Salmonella+adhesion+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Caco-2, HT-29 and the mucus-secreting HT29-MTX intestinal cell models to investigate Salmonella adhesion and invasion.</a> Journal of Microbiological Methods. 94, 274-279 (2013).</li>
<li>Großkopf, T., Soyer, O. S. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1369527414000198">Synthetic microbial communities.</a> Current Opinion in Microbiology. 18, 72-77 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar

El microbioma oral es un elemento clave en la salud humana reportada recientemente por varios autores20,21. Los resultados anteriores sugieren que la ingestión de saliva, que contiene grandes cargas de bacterias puede influir en el ecosistema microbiano del intestino, que es uno de los sitios principales para oscurecimiento inmunológico. La combinación de un modelo de digestión gastrointestinal superior estático con la interfaz de anfitrión, representado por las ...

Los seres humanos conviven con las bacterias, que están presentes en el mismo número que las células humanas1. Por lo tanto, es de crucial importante obtener un conocimiento integral del microbioma humano. La cavidad bucal es un entorno único en que se divide en varios hábitats más pequeño, así que contiene una gran variedad de bacterias y biofilms en los diferentes lugares. Ser un ecosistema abierto, algunas especies en la boca pueden ser visitantes transitorios. Sin embargo, ciertos microorganismos colonicen pronto después de nacimiento y forma organizan de biofilms2. Estas se encuentran en la superficie de los dientes por encima de la grieta gingival, la grieta subgingival, lengüeta, superficies de la mucosa y prótesis dentales y rellenos3. Las bacterias también pueden estar presentes como flóculos y células planctónicas en el lumen del conducto del diente, entremezcladas con tejido pulpar necrótico o suspendidas en una fase fluida.
Existe una activo, continua interferencia entre las células del huésped y la microbiota residente4. Las bacterias se comunican dentro de y entre especies, y sólo una pequeña proporción de los colonizadores naturales puede adherirse a los tejidos, mientras que otras bacterias se conecte a estos colonizadores primarios. Por ejemplo, Unión célula-célula entre microorganismos es clave para la integración de colonizadores secundarios en biofilms orales y construcción de redes complejas de interacción de las células microbianas de4. Alrededor del 70% de agregados bacterianos en una muestra de saliva se forman por Porphyromonas SP., Streptococcus SP., Prevotella SP, Veillonella SP. y no identificado Bacteroidetes. F. nucleatum es un colonizador intermedio en la biopelícula subgingival y agregados con los colonizadores finales p. gingivalis, T. denticola y Tannerella forsythia, que están implicados en la periodontitis5. Además, Streptococcus mitis ocupa hábitats de mucosa y dentales, mientras que S. sanguinis y S. gordonii prefieren colonizar los dientes3. Así, S. sanguinis está presente en incisivos inferiores y caninos, mientras que el Actinomyces naeslundii se ha encontrado en dientes anteriores superiores6.
Además, lo indígenas microbioma juega un papel en el mantenimiento de la salud2. Microbiota residente participa en la educación inmune y en la prevención de la expansión de patógenos. Esta resistencia a la colonización se produce porque las bacterias nativas pueden ser mejor adaptado en la fijación a las superficies y más eficiente en metabolizar los nutrientes disponibles para el crecimiento. Aunque cepas probióticas sobreviven el paso gastrointestinal y permanecen activas, la persistencia de las bacterias autóctonas que se ingiere desde una ubicación superior del tracto gastrointestinal no se ha descrito completamente. Por lo tanto, sometimos a una comunidad artificial, representante del ecosistema oral, a las condiciones del tránsito gastrointestinal simulada. Viabilidad de las células bacterianas se evaluó mediante un modelo multicompartment que se asemeja al epitelio intestinal. Simuladores de tripa actual ofrecen reproducibilidad adecuada en términos de análisis de la comunidad microbiana luminal7. Sin embargo, adherencia bacteriana e interacción microbio host son por separado dirigidas, como la combinación de líneas celulares con comunidades microbianas es un reto8. Por el contrario, presentamos un marco que proporciona la explicación mecanicista potencial de colonización exitosa eventos registrados en la interfaz de la tripa. De hecho, este modelo puede conjuntamente utilizar con un modelo estático de la tripa para evaluar el impacto de las comunidades microbianas en señalización de superficie de host.

<table><tbody><tr><td><fuertes>CEPAS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aggregatibacter actinomycetemcomitans </td><td>American Type Culture</td><td>Collection ATCC 43718</td><td></td></tr><tr><td>Fusobacterium nucleatum </td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 10953</td><td></td></tr><tr><td>Porphyromonas gingivalis </td><td>American Type Culture Colección</td><td>ATCC 33277</td><td></td></tr><tr><td>Prevotella intermedia </td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 25611</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus mutans </td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 25175</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus sobrinus </td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 33478</td><td></td></tr><tr><td>Actinomyces viscosa </td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 15987</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus salivarius&nbsp; TOVE-R</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus mitis </td><td>American Colección de cultivos</td><td>tipo ATCC 49456</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus sanguinis </td><td>BCCM/LMG Colección de bacterias</td><td>LMG 14657</td><td></td></tr><tr><td>Veillonella parvula </td><td>Instituto Leibniz DSMZ-Colección Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares DSM</td><td>2007</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus gordonii </td><td>Colección de Cultivos Tipo Americanos</td><td>ATCC 49818</td><td></td></tr><tr><td><LÍNEAS >CELULARES FUERTES</células ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caco-2</td><td>fuertes Colección Europea de Cultivos Celulares Autentificados</td><td>86010202</td><td></td></tr><tr><td>células HT29-MTX</td><td>Colección Europea de Cultivos Celulares Autentificados</td><td>12040401</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>REACTIVOS Y CONSUMIBLES</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brain Caldo de infusión de corazón (BHI)</td><td>Oxoid</td><td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>Agar Sangre 2</td><td>Oxoid</td><td>CM0055</td><td>Medio Agar Sangre</td></tr><tr><td>Menadione</td><td>Sigma</td><td>M9429</td><td></td></tr><tr><td>Hemin</td><td>Sigma</td><td>H9039</td><td></td></tr><tr><td>5% sangre de caballo estéril desfibrilada</td><td>E& O Laboratories</td> <td>Ltd,P030</td><td></td></tr><tr><td>InnuPREP PCRpure Kit</td><td>Analytik Jena</td><td>845-KS-5010250</td><td>Kit de purificación de PCR</td></tr><tr><td>Big Dye</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td>4337454 Dye para secuenciación ABI</td></tr><tr><td>Prism BigDye Terminator v3.1 kit de secuenciación de ciclo</td><td>Applied Biosystems</td><td>4337456</td><td></td></tr><tr><td>SYBR&nbsp; Green I</td><td>Invitrogen</td><td>S7585</td><td></td></tr><tr><td>Iduro de propidio</td><td>Invitrogen</td><td>P1304MP</td><td></td></tr><tr><td>T25 matraces de cultivo sin recubrimiento, tratados con cultivo celular, ventilados, estériles</td><td>VWR</td><td>734-2311</td><td></td></tr><tr><td>Solución de tripsina-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3924-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Solución de Trypan Blue 0,4%, líquido, filtrado estéril</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td></td></tr><tr><td>Medios de cultivo celular DMEM, con tecnologías GlutaMAX y Pyruvate</td><td>Life</td><td>31966-047</td><td></td></tr><tr><td>Insertos de cultivo celular de membrana de poliéster Corning Transwell</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3450-24EA</td><td></td></tr><tr><td>Mucina de estómago porcino Tipo II&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino inactivado</td><td>Greiner Bio One</td><td>758093</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicótico (100X)</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100 para biología molecular</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS sin calcio, magnesio</td><td>Gibco</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Pierce LDH Kit de ensayo de citotoxicidad</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88953</td><td></td></tr><tr><td>Corning HTS Transwell-24 pozo, tamaño de poro 0,4 y micro; m</td><td>Corning Costar Corp</td><td>3450</td><td></td></tr><tr><td>Agua libre de nucleasas</td><td>Electroforesis Serva</td><td>28539010</td><td></td></tr><tr><td>EQUIPMENT</td>Neubauer cámara de <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>conteo mejorada</td><td>Carl Roth</td><td>T729.1</td><td></td></tr><tr><td>BD Accuri C6 Citómetro de flujo</td><td>BD Biosciences</td><td>653118</td><td></td></tr><tr><td>PowerLyzer 24 Homogeneizador</td><td>MoBio</td><td>13155</td><td></td></tr><tr><td>T100 Termociclador</td><td>BioRad</td><td>186-1096</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de descarga</td><td>a</td> <td>medida-InnOva</td> 4080 Incubadora Agitador New <td></td></tr><tr><td></td><td>Brunswick Scientific</td><td>8261-30-1007</td><td>Agitador para incubadora</td></tr><tr><td>Memmert CO2</td><td>Memmert GmbH & Co.</td><td>ICO150med</td><td></td></tr><tr><td>Millicell ERS (Sistema de Resistencia Eléctrica)</td><td>EMD Millipore, Merck KGaA</td><td>MERS00002</td><td></td></tr><tr><td>Millipore Milli-Q academic, sistema de agua ultra pura</td><td>Millipore, Merck KGaA-Shaker</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>(ROCKER 3D basic)</td><td>IKA</td><td>4000000</td><td>Shaker para 6.10</td></tr></tbody></table>

evaluar la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz de host-microbio in vitro gut

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

La interacción entre huésped y microbiota ha sido reconocida desde hace mucho y ampliamente descrito. La boca es similar a otras secciones del tracto gastrointestinal, como microbiota residente se produce y evita la colonización por bacterias exógenas. De hecho, más de 600 especies de bacterias se encuentran en la cavidad bucal, y una sola persona puede llevar alrededor de 100 diferentes en cualquier momento. Bacterias orales poseen la capacidad de adherirse a los diferentes nichos en el ecosistema oral, integrándose así dentro de las comunidades microbianas residente y que favorece crecimiento y supervivencia. Sin embargo, se ha propuesto el flujo de bacterias en el intestino durante la ingestión de perturbar el equilibrio de la microbiota intestinal. De hecho, la administración oral de p. gingivalis cambió de puesto la composición bacteriana en la microflora ileal. Utilizamos una comunidad sintético como una representación simplificada del ecosistema oral natural, a la supervivencia y viabilidad de bacterias orales sometidos a condiciones de tránsito gastrointestinal simulada. Catorce especies fueron seleccionadas sometidas a en vitro salival, gástrica y procesos de la digestión intestinal y presentó a un modelo de multicompartment de la célula que contiene las células Caco-2 y HT29-MTX para simular el epitelio de la mucosa intestinal. Este modelo sirve para desentrañar el impacto de bacterias ingeridas en células que participan en la circulación enterohepática. Utilizando las comunidades sintéticas permite la capacidad de control y reproducibilidad. Por lo tanto, esta metodología puede ser adaptada para evaluar viabilidad del patógeno y la subsecuentes inflamación asociados cambios, capacidad de colonización de las mezclas de probióticos, y en última instancia, bacteriana potencial impacto en la circulación presistémica.

Este protocolo conduce a la generación de un modelo adecuado para elucidar la supervivencia y viabilidad de bacterias orales sometidos a condiciones de tránsito gastrointestinal simulada. Las cuentas de las células intactas de cepas individuales es de aproximadamente 108 células antes de mL-1 la creación de la comunidad sintético, mientras que el multiespecífico microcosmos contenido sobre el 90% de células viables durante el establecimiento de la comunidad ( <strong...

Interacciones de host-microbio intestinal fueron evaluadas usando un nuevo enfoque que combina una comunidad oral sintético, en vitro la digestión gastrointestinal y un modelo del epitelio del intestino delgado. Presentamos un método que puede ser adaptado para evaluar invasión celular de patógenos y biofilms multiespecies, o incluso para probar la supervivencia de las formulaciones probióticas.

Evaluar la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz de Host-microbio In Vitro Gut

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Este modelo es el siguiente paso en el establecimiento de microdirecciones del huésped para el tracto digestivo superior. Está permitiendo abordar cuestiones de investigación mecanicistas y ofrece muchas oportunidades para la industria alimentaria, farmacéutica y nutracéutica, así como para la toxicología. La principal ventaja de esta técnica es que combina un modelo del sistema gastrointestinal con la microinterfaz del huésped, incluyendo una comunidad microbiana compleja.Es muy aplicable y también es muy flexible. Esta metodología puede adoptarse utilizando otros tipos de células para evaluar la viabilidad del patógeno y la información posterior. Los cambios también se pueden utilizar para ayudar a la capacidad de colonización de las mezclas de probióticos y, en última instancia, al efecto potencial de las bacterias en la circulación sistémica.Para comenzar, autoclave el medio y luego agregue cinco microgramos por mililitro de hemen y un microgramo por mililitro de menadiona. Dispense nueve mililitros del medio en tubos Hungate y cierre los tubos con un tapón de goma y una tapa de aluminio. A continuación, enjuague los tubos con una mezcla de 90% de nitrógeno y 10% de dióxido de

assessing-viability-synthetic-bacterial-consortium-on-vitro-gut-host

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

El diseño de un operón que codifica sintético tanto el aparato secretor y los monómeros estructurales de fibras curli se describe. La sobreproducción de estos amiloides y polímeros adherentes permite una ganancia apreciable de adhesión de...

Ingeniería bacterias adherentes mediante la creación de un único operón sintético curli

Fuente: Arroyo, M. C., et al. Evaluación de la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz intestino-microbio in vitro . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra la evaluación de la viabilidad de una comunidad microbiana oral sintética durante la digestión simulada oral, gástrica e intestinal. La supervivencia bacteriana se cuantifica tras cada fase, lo que revela un declive progresivo debido al estrés digestivo.

Exponer una comunidad bacteriana oral sintética a fases simuladas de digestión

Fuente: Calatayud Arroyo, M., et al. Evaluación de la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz intestino-microbio in vitro. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra un modelo intestino-microbio in vitro para estudiar la viabilidad bacteriana. Se incuba un cocultivo de células Caco-2 y HT29-MTX con bacterias pretratadas bajo condiciones digestivas simuladas. Se evalúa la integridad de la barrera epitelial utilizando resistencia eléctrica transepitelial, y se recogen...

Modelo intestinal in vitro para evaluar la adhesión bacteriana e internalización

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

En este video, describimos la metodología para establecer un sistema de cultivo de órganos intestinales ex vivo para estudiar las interacciones entre fragmentos de tejido intestinal de ratón y bacterias intestinales específicas. El dispositivo consta de dos pares de puertos de entrada-salida, el primero que conecta la luz del tejido intestinal y suministra la suspensión bacteriana específica en él, y el segundo que suministra continuamente medios a los pocillos del dispositivo para mantener la...

Un sistema de cultivo de órganos intestinales ex vivo para estudiar las interacciones entre el huésped y la microbiota

Se describe un protocolo in vitro de co-cultivo microbioma intestinal y vellosidades intestinales durante un periodo prolongado utilizando un sistema de microphysiological gut-on-a-chip humano.

Co-cultivo de estar con microbioma intestinal humana microconstruidos Villi en una Gut-on-a-Chip dispositivo de microfluidos

Aquí, presentamos un protocolo para el cultivo de la microbiota intestinal de la Colón in vitro, utilizando una serie de biorreactores que simulan las condiciones fisiológicas del tracto gastro intestinal.

La aplicación Advanced In Vitro cultivo tecnología para estudiar la Microbiota del intestino humano

Este protocolo describe un sistema in vitro de fermentación de cultivo por lotes de microbiota fecal humana, utilizando inulina (un prebiótico bien conocido y uno de los moduladores de microbiota más ampliamente estudiados) para demostrar el uso de este sistema en la estimación de efectos específicos de sobre la composición de la microbiota fecal y las actividades metabólicas.

Un modelo de cultivo por lotes In Vitro para estimar los efectos de los regímenes intervencionistas en la microbiota fecal humana

Aquí se describe un protocolo para investigar las interacciones entre los endobióticos y la microbiota intestinal humana utilizando sistemas de fermentación por lotes in vitro.

Análisis de interacciones entre endobióticos y microbiota de tripa humana utilizando sistemas de fermentación de bañoin in vitro

Este artículo presenta un método único para analizar las interacciones huésped-microbioma utilizando un nuevo sistema de cultivo de órganos intestinales para experimentos ex vivo.

Un sistema de cultivo de órganos intestinales intestinales para analizar las interacciones huésped-microbiota

Este protocolo detalla el ensamblaje de matrices de mini-biorreactores que se utilizarán para el cultivo de flujo continuo de comunidades fecales complejas en condiciones anaeróbicas. También discutimos los métodos de ensamblaje, inoculación y muestreo de los reactores para su posterior análisis.

Conjunto de biorreactor para el cultivo continuo de comunidades fecales complejas

Aprende a evaluar interacciones hospedador-microbio intestinal usando un modelo in vitro con comunidad bacteriana sintética. Este método permite estudiar invasión de patógenos y viabilidad de probióticos.

Evaluar la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz de Host-microbio In Vitro Gut

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