Name: Homochronic trasplante de precursores de interneurona en cerebros de ratón Postnatal temprana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Aprende a realizar trasplantes homocrónicos de precursores de interneurona en cerebros de ratón postnatal para estudiar la neurociencia del desarrollo. Este método permite analizar cómo el entorno influye en la maduración neuronal.

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Esta investigación fue apoyada por los institutos nacionales de salud (K99MH104595) y el programa de investigación intramuros del NICHD para T.J.P. Agradecemos a ERGE Fishell, en cuyo laboratorio fue establecido originalmente este enfoque.

<ol><li>Bozzi, Y., Casarosa, S., Caleo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epilepsy+as+a+neurodevelopmental+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Epilepsy as a neurodevelopmental disorder.</a> Front Psychiatry. 3 (19), (2012).</li>
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<li>Larimer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caudal+Ganglionic+Eminence+Precursor+Transplants+Disperse+and+Integrate+as+Lineage-Specific+Interneurons+but+Do+Not+Induce+Cortical+Plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Caudal Ganglionic Eminence Precursor Transplants Disperse and Integrate as Lineage-Specific Interneurons but Do Not Induce Cortical Plasticity.</a> Cell Rep. 16 (5), 1391-1404 (2016).</li>
<li>Martinez-Cerdeno, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+MGE+precursor+cells+grafted+into+adult+rat+striatum+integrate+and+ameliorate+motor+symptoms+in+6-OHDA-lesioned+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Embryonic MGE precursor cells grafted into adult rat striatum integrate and ameliorate motor symptoms in 6-OHDA-lesioned rats.</a> Cell Stem Cell. 6 (3), 238-250 (2010).</li>
<li>Quattrocolo, G., Fishell, G., Petros, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Transplantations+Reveal+Environmental+Influences+on+Interneuron+Diversity+and+Maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Transplantations Reveal Environmental Influences on Interneuron Diversity and Maturation.</a> Cell Rep. 21 (3), 721-731 (2017).</li>
<li>Xu, Q., Tam, M., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+Nkx2.1-lineage+cells+in+the+mouse+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Fate mapping Nkx2.1-lineage cells in the mouse telencephalon.</a> J Comp Neurol. 506 (1), 16-29 (2008).</li>
<li>Thompson, L., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival%2C+differentiation%2C+and+connectivity+of+ventral+mesencephalic+dopamine+neurons+following+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Survival, differentiation, and connectivity of ventral mesencephalic dopamine neurons following transplantation.</a> Prog Brain Res. 200, 61-95 (2012).</li>
<li>Liang, Y., Agren, L., Lyczek, A., Walczak, P., Bulte, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+progenitor+cell+survival+in+mouse+brain+can+be+improved+by+co-transplantation+of+helper+cells+expressing+bFGF+under+doxycycline+control%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neural progenitor cell survival in mouse brain can be improved by co-transplantation of helper cells expressing bFGF under doxycycline control.</a> Exp Neurol. 247, 73-79 (2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Un aspecto fundamental de este protocolo es maximizar la supervivencia de las células. Asegurar que el tejido y las células siempre están en sACSF de carboxygenated de hielo frío es necesario para promover la supervivencia celular. Esto requiere una disección eficiente y una estrategia de disociación para reducir al mínimo la longitud de tiempo que pasan de las células en solución diferentes y fuera del entorno del cerebro. Dependiendo del número de regiones del cerebro disecado y trasplantados, puede ser beneficioso ten...

Función cortical adecuada requiere un equilibrio entre las neuronas excitatory de la proyección e inhibitorios interneurons de GABAérgico, una población muy heterogénea con morfologías distintas, propiedades electrofisiológicas, conectividad y neuroquímicos marcadores. Función de interneuronas (y subgrupos específicos interneurona) y desarrollo anormal se ha relacionado con la Patobiología de trastornos psiquiátricos como la esquizofrenia, autismo y epilepsia1,2,3. Además, muchos genes implicados en estos trastornos cerebrales se enriquecen fuertemente en interneuronas joven4. Por lo tanto, una mayor comprensión de los mecanismos que regulan la maduración y la determinación del destino de interneurona es necesario para comprender el desarrollo normal y las posibles etiologías de numerosas enfermedades del cerebro.
Interneuronas de forebrain nacen principalmente de dos estructuras embrionarias transitorias, las eminencias ganglionares mediales y caudales (MGE y CGE, respectivamente). Estas células postmitotic (precursores de la interneurona) luego pasar por una fase prolongada migración tangencial para dispersar en el telencéfalo donde se integran en una gran variedad de circuitos. Interneurons MGE derivados consisten en tres subgrupos en gran parte no superpuestos, neuroquímicamente definidos: fast spiking interneurons parvalbúmina (PV+), no-fast spiking interneuronas de la somatostatina (SST+) y tarde clavando neuronal nítrico interneuronas de sintasa (nNOS+) de óxido que constituyen las células hippocampal de neurogliaform y hiedra. Numerosos laboratorios han identificado varios mecanismos dentro de la MGE que regulan las decisiones de destino inicial en PV+ o SST + interneurons, incluyendo gradientes espaciales de morfógenos, fecha de nacimiento de los precursores de la interneurona y el modo de división neurogénica 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10. se ha propuesto que interneuronas distinguen inicialmente en 'cardenal clases' y luego progresivamente maduran hasta convertirse en 'clases definitivas' al interactuar con su medio ambiente11. La evidencia reciente indica que algunos subtipos de interneurona maduro pueden ser genéticamente cableado como estas células se convierten en postmitotic en las eminencias ganglionares, indicando que programas genéticos intrínsecos definidos principios pueden desempeñar un papel más grande que antes apreciada12,13. Sin embargo, la cuestión clave de cómo los programas genéticos intrínsecos interactúan con señales ambientales a la diferenciación de la unidad en subtipos distintos interneurona sigue siendo en gran parte inexplorada.
Numerosos estudios han trasplantado células embrionarias MGE directamente en una variedad de regiones del cerebro, con los resultados del consenso que injertaron células maduras y liberan GABA para inhibir generalmente los circuitos endógeno local14,15, 16,17,18,19. Estos prometedores observaciones han generado un interés significativo en el uso de células pluripotentes inducidas humanas (hIPSC)-derivado de interneuronas para tratar una variedad de enfermedades del cerebro. Sin embargo, muy pocos de estos estudios determinar si estas células injertadas maduran en los tipos esperados de interneuronas maduras, un componente esencial cuando uno piensa en enfoques traslacionales.
Para abordar cómo el entorno influye interneurona diferenciación y maduración, una estrategia fue ideada para trasplante precursores inmaduros interneurona en nuevos entornos de cerebro para examinar si interneuronas injertados adoptan características del anfitrión medio ambiente o conservar características de las donantes medio ambiente20. MGE trasplantes no son adecuados para abordar esta cuestión porque el MGE contiene una población mixta de células de proyección de GABAérgico que dispersan a lo largo de numerosas regiones de cerebro21e interneurona. Sin saber donde estas células MGE habría emigrado, uno puede no evaluar completamente cómo estos trasplantes son afectadas por el entorno del cerebro. Por cosecha de precursores del mesencéfalo en los puntos de tiempo postnatales tempranos, este problema es burlado por la obtención de células inmaduras que han completado su migración y alcanzaron su objetivo región del cerebro pero tienen mínima interacción con el medio ambiente. Al centrarse en las características específicas de interneuronas que se expresan diferencialmente entre regiones distintas del cerebro, entonces uno puede determinar cómo el entorno de host cambia propiedades interneurona. El enfoque general que se describe en este Protocolo debería ser aplicable a cualquier investigador que quiere examinar las neuronas jóvenes cómo comportarse cuando desafió en un nuevo entorno.

<table><tbody><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Sigma</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sodio monobásico</td><td>Sigma</td><td>S0751</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de calcio</td><td>Sigma</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio</td><td>Sigma</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>Sigma</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Sigma</td><td>S7903</td><td></td></tr><tr><td>Matrices cerebrales</td><td>Roboz</td><td>SA-2165</td><td>Solo se necesita si se cosecha cuerpo estriado</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont de punta fina</td><td>Roboz</td><td>RS-4978</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de microdisección</td><td>Roboz</td><td>RS-5940</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de afeitar</td><td>ThermoFisher</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas Pasteur</td><td>ThermoFisher</td><td>1367820C</td><td></td></tr><tr><td>Nanoject III</td><td>Drummond</td><td>3-000-207</td><td></td></tr><tr><td>Manipulador manual con soporte</td><td>World Precision Instruments&nbsp;</td><td>M3301R/M10</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de plástico de fondo redondo de 5 ml</td><td>ThermoFisher</td><td>149591A</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 60 mm</td><td>ThermoFisher</td><td>12556001</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 100 mm</td><td>ThermoFisher</td><td>12565100</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma</td><td>10165921001</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>16140063</td><td></td></tr><tr><td>Filtros DNasa I</td><td>Sigma</td><td>4716728001</td><td></td></tr><tr><td>Celltrics 50um</td><td>Sysmex</td><td>04-0042327</td><td></td></tr><tr><td>Azul tripano</td><td>ThermoFisher</td><td>15-250-061</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitómetro</td><td>ThermoFisher</td><td>02-671-6</td><td></td></tr></tbody></table>

homochronic trasplante de precursores de interneurona en cerebros de ratón postnatal temprana

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

Maduración y la determinación de destino neuronal requiere una interacción intrincada entre señales ambientales y programas genéticos. Sin embargo, desenmarañar los papeles de intrínseca vs extrínsecos mecanismos que regulan este proceso de diferenciación es un enigma para los neurobiólogos del desarrollo. Este problema se magnifica por interneuronas GABAérgicas, una población celular muy heterogénea que nace de las estructuras embrionarias transitorias y se someten a una prolongada fase migratoria para dispersar en el telencéfalo. Para explorar cómo diferentes cerebro entornos afectan interneurona suerte y maduración, desarrollamos un protocolo para recolección de precursores de fluorescencia etiquetada interneurona inmaduros de regiones específicas del cerebro de ratones recién nacidos (P0-P2). A esta edad, la migración de interneurona es casi completa y estas células residen en sus entornos descanso finales con relativamente poca integración sináptica. Siguiendo la colección de unicelular mediante citometría de flujo, estos precursores de la interneurona se trasplantan en P0 P2 cachorros postnatales de tipo salvaje. Realizando ambos homotópicas (por ejemplo, corteza a corteza) o heterotópico (por ejemplo, corteza a hipocampo) trasplantes, uno puede evaluación cómo desafiante interneuronas inmaduros en los nuevos entornos del cerebro afecta a su destino, la maduración y la integración del circuito. Cerebro puede ser cosechado en ratones adultos y ensayaron con una amplia variedad de análisis posthoc de las células injertadas, incluyendo inmunohistoquímica, electrofisiológicos y transcripcional de perfiles. Este planteamiento general proporciona a los investigadores con una estrategia de análisis cómo distintos ambientes de cerebro pueden influir en numerosos aspectos del desarrollo de la neurona e identificar si características neuronales específicas son conducidas principalmente por programas genéticos de cableado o señales ambientales.

Este protocolo muestra cómo cosechar las regiones específicas del cerebro de cerebro postnatal temprano (figura 1-2), recoger dissociations unicelular de los precursores de la interneurona y transplante de estas células en varias regiones del cerebro en ingenuo WT cachorros postnatales (figura 3). Para el análisis posthoc, cerebros que recibieron injertos de interneurona precursor fueron cosechados entre P30-35 p...

Desafiando las neuronas jóvenes en nuevas regiones del cerebro puede revelar penetraciones importantes en cómo el entorno esculpe maduración y destino neuronal. Este protocolo describe un procedimiento para cosechar precursores interneurona de regiones específicas del cerebro y transplantarlas o homotopically o heterotopically en el cerebro de crías de postnatales.

Homochronic trasplante de precursores de interneurona en cerebros de ratón Postnatal temprana

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...

El objetivo general de este procedimiento es recolectar precursores de interneuronas de distintas regiones del cerebro en cachorros de ratón postnatales y trasplantar estas células en receptores de la misma edad para evaluar cómo los cambios ambientales influyen en el destino y la maduración de las interneuronas. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia del desarrollo sobre cómo interactúan los programas genéticos intrínsecos y las señales ambientales para esculpir el destino de las células neuronales. La principal ventaja de esta técnica es que las alteraciones en el destino y la maduración de los precursores de las interneuronas pueden analizarse después de su transferencia adoptiva a un nuevo entorno cerebral.La demostración visual de los pasos de recolección e injerto de células es fundamental porque pequeños errores en la técnica pueden conducir a experimentos de trasplante ineficientes y fallidos. Para comenzar, coloque una hoja de afeitar a través del lóbulo frontal anterior del cerebro de un cachorro posnatal y hojas de afeitar adicionales en las ranuras justo después de la primera hoja de afeitar para generar dos cortes de 0,5 milímetros. Transfiera las rodajas estriadas a una placa de Petri con sacarosa burbujeante, líquido cefalorraquídeo artificial o sACSF, y coloque el tejido cerebral restante en una placa de Petri con sACSF en hielo.Coloque las rodajas bajo un microscopio de disección y use pinzas para pellizcar el cuerpo estriado de ambos hemisferios, colocando los trozos estriados en un tubo de 50 mililitros de sACSF sobre hielo a medida que se cosechan. Si el cerebro se extrajo de un ratón indicador fluorescente, use la microscopía de fluorescencia para distinguir la señal estriada del tomate td de la señal fluorescente más fuerte del globo pálido. Para extirpar el hipocampo, use fórceps para hemiseccionar el cerebro a lo largo de la línea media y coloque un hemisferio debajo de un microscopio de disección con la superficie medial hacia arriba.Use fórceps para extirpar el tejido cerebral ventral e identifique el hipocampo en forma de salchicha que abarca el acceso anteroposterior a lo largo del lado dorsal y ventricular de la corteza. Inserte las puntas de las pinzas delante del hipocampo anterior y avance las pinzas hacia atrás mientras pellizca a lo largo del borde cortical del hipocampo para separar suavemente el hipocampo de la corteza. Coloque el tejido aislado en un tubo de 50 mililitros de sACSF sobre hielo y repita la recolección del hipocampo para el hemisferio contralateral.A continuación, coloque la corteza hemiseccionada con el lado medial hacia abajo y utilice las pinzas para extraer las partes más dorsal, ventral, anterior y posterior de la corteza. Transfiera el cuadrado restante de la corteza medial a un tubo de 50 mililitros de sACSF en hielo. Después de extraer el cerebro, sujete el lado ventral del cerebro a través del cerebelo y la corteza anterior o los bulbos olfativos.Con pinzas curvas, separe suavemente la corteza posterior del hipocampo subyacente y otros tejidos en cada hemisferio. Y pela la corteza dorsal hacia adelante para exponer las estructuras subyacentes. Use fórceps para pellizcar el hipocampo en un hemisferio en la línea media y extirpe el hipocampo despegándolo lateralmente del cerebro.Coloque el hipocampo en un tubo de 50 mililitros de sACSF en hielo y recoja el hipocampo contralateral de la misma manera. A continuación, raspe suavemente los bordes del cuerpo estriado para aflojarlo del tejido circundante. Pellizque suavemente por debajo del cuerpo estriado para extraer el tejido estriado.Después de recolectar la corteza de ambos hemisferios, como se demostró anteriormente, transfiera el cuerpo estriado bajo un endoscopio de disección fluorescente. Use fórceps para extraer cualquier tejido globo pálido de color rojo brillante de cada cuerpo estriado. Cuando se hayan extraído todos los tejidos, transfiera el tejido a un tubo de fondo redondo de cinco milímetros y reemplace el sACSF en cada tubo de recolección con dos mililitros de solución de pronase-sACSF recién preparada para una incubación de 20 minutos a temperatura ambiente con movimientos ocasionales.Al final de la incubación, reemplace cuidadosamente la pronasa-sACSF con uno o dos mililitros de solución de reconstitución y disocie mecánicamente los tejidos con tubos Pasteur pulidos al fuego. Cuando el tejido esté turbio y no se vean trozos de tejido, cuele la solución celular a través de un filtro de 50 micras en nuevos tubos de fondo redondo de cinco mililitros para eliminar cualquier grupo de células antes de la clasificación celular activada por fluorescencia. Después de recibir las células de la citometría de flujo, transfiera las suspensiones celulares a tubos cónicos de 1,5 mililitros para la centrifugación.Después de la centrifugación, aspire todos menos los últimos 20 microlitros de sobrenadante de cada tubo y reconstituya los gránulos para contar. Si es necesario, diluya la solución celular con sACSF a una concentración de una a tres veces 10 a la quinta. Cargue una micropipeta de punta fina con aceite mineral.Conecte la micropipeta a un inyector de nanolitros y asegure el aparato de inyección de nanolitros a un manipulador conectado a una base magnética. Mientras se anestesia a la primera cría con hielo, pipetee la solución celular varias veces para garantizar una distribución celular homogénea. Expulse el aceite mineral y llene completamente la pipeta con la suspensión unicelular.Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies, coloque al cachorro sobre una cubierta de placa de Petri con la cabeza apoyada en masilla adhesiva, de modo que la parte superior de la cabeza sea relativamente plana. Cubra la cabeza con un trozo de cinta de laboratorio con un agujero de diamante, tirando de la cinta enseñada hasta que la piel esté estirada para que la cabeza esté firmemente asegurada y lambda sea visible a través del orificio. Mueva el cachorro asegurado debajo del inyector de nanolitros y baje la micropipeta para que la punta quede directamente sobre lambda.Observe las coordenadas X, Y en el manipulador y ajuste las perillas del manipulador hasta que la micropipeta esté colocada en las coordenadas apropiadas a lo largo de los ejes medial, lateral y anteroposterior de la cabeza. Baje la micropipeta hasta que la punta cree una pequeña concavidad en la piel y gire la perilla del manipulador del eje z con firmeza pero suavidad para conducir la micropipeta a través de la piel y el cráneo hasta el cerebro. Retraiga ligeramente la micropipeta hasta que la punta quede rodeada por un cono de piel con forma de tienda de campaña.Y vea las coordenadas a lo largo del eje z. A continuación, baje la micropipeta a la profundidad experimental adecuada e inyecte las células. Espere 15 segundos después de que se hayan entregado las células antes de retraer la micropipeta y repita la inyección en una segunda ubicación si lo desea.Coloque al cachorro en una almohadilla térmica y monitoree hasta que se logre la recuperación completa antes de transferirlo de regreso a la jaula de inicio. Las células injertadas migran a través de las regiones cerebrales objetivo con tasas variables de supervivencia celular que van desde docenas hasta varios miles. Las células injertadas se localizan dentro de las regiones apropiadas y muchas células muestran morfologías interneuronales y marcadores neuroquímicos interneuronales bien caracterizados.Las células del donante sobreviven y maduran incluso cuando se injertan en nuevos entornos con trasplantes heterotópicos. El análisis electrofisiológico de las células injertadas revela propiedades fisiológicas similares a las de los adultos y distintos patrones de disparo, representativos de subtipos de interneuronas bien definidos, lo que sugiere que las interneuronas injertadas son capaces de madurar adecuadamente en el entorno del huésped. Las células trasplantadas también muestran corrientes postsinápticas excitatorias espontáneas.El registro de las células piramidales adyacentes a las interneuronas trasplantadas que expresan canalrodopsina-2 revela corrientes GABAérgicas postsinápticas que son evocadas por la luz azul en estas células piramidales endógenas. Al intentar este procedimiento, es importante mantener las células en hielo y triturarlas suavemente con una pipeta Pasteur para minimizar la muerte celular. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la secuenciación de células individuales, en las células injertadas para definir de manera más completa cómo los cambios ambientales afectan al transcriptoma de una célula.Después de ver este video, debería poder aislar los precursores de las neuronas interneuronas de diferentes regiones del cerebro de las crías recién nacidas y trasplantar estas células a varias regiones del cerebro de las crías posnatales de la misma edad.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Fuente: Weber, R. Z., et al. Trasplante intracerebral y seguimiento de bioluminiscencia in vivo de células progenitoras neurales humanas en el cerebro del ratón. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el trasplante estereotáxico de células progenitoras neurales humanas modificadas genéticamente en el cerebro del ratón. Los investigadores inyectan NPC que expresan luciferasa y proteínas fluorescentes, lo que permite imágenes de bioluminiscencia in vivo y microscopía de fluorescencia post-mortem...

Trasplante de células progenitoras neurales humanas en el cerebro del ratón

Este video presenta un método para generar precursores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón. El protocolo consiste en cultivar las células madre en medios que contienen inhibidores específicos de moléculas pequeñas, que facilitan la proliferación y la agregación de células madre en cuerpos embrioides (EB). Posteriormente, las EBs se disocian con enzimas y se colocan en pocillos de placa de cultivo recubiertos con proteínas de adhesión para promover su...

Generación de precursores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón

Fuente: Quattrocolo, G., et al. Trasplante homocrónico de precursores de interneuronas en cerebros de ratón posnatales tempranos. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el trasplante de células precursoras de interneuronas en el cerebro de ratón neonatal utilizando un enfoque homotópico o heterotópico. El procedimiento consiste en asegurar un cachorro receptor anestesiado, identificar la región del cerebro objetivo e inyectar una suspensión de células precursoras derivadas de un cachorro...

Trasplante de células precursoras de interneuronas en el cerebro de un cachorro de ratón

Fuente: Gonzalez-Ramos, A., et. al., Trasplante de neuronas GABAérgicas derivadas de células madre humanas en el hipocampo de ratón posnatal temprano para mitigar los trastornos del neurodesarrollo. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la inyección estereotáxica de células precursoras de interneuronas derivadas de humanos en el hipocampo de un cachorro de ratón modificado genéticamente con interneuronas inhibitorias reducidas, con el objetivo de restaurar el equilibrio...

Trasplante de células precursoras de interneuronas derivadas de humanos en el hipocampo de la cría de ratón

Fuente: Denaxa, M., el al., Trasplante de progenitores interneuronales corticales modificados quimiogenéticamente en cerebros de ratón posnatales tempranos. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el procedimiento para inyectar un vector plásmido que lleva el gen de interés en progenitores interneuronales en un corte de cerebro embrionario, seguido de electroporación para la entrada de plásmidos y la expresión génica. Estos progenitores modificados se pueden usar más tarde para tratar...

Transferencia de genes asistida por electroporación integrada en agarosa en progenitores de interneuronas corticales de ratón

Este protocolo describe un método para generar progenitores interneurona cortical y poste-mitotic interneurona precursores de células madre embrionarias del ratón usando un método modificado de cuerpo para monocapa embryoid. Estos progenitores/precursores puede ser usado en vitro fluorescencia ordenados y trasplantado en neocortex neonatal para el estudio de determinación de destino o utilizado en aplicaciones terapéuticas.

Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona

Basado en la ingeniería lentiviral in vitro de precursores neuronales, su co-trasplante en cerebros de tipo salvaje y evaluación morfométrica emparejada de derivados de "prueba" y "control", este método permite el modelado preciso del control genético in vivo del neocortical morfología de las neuronas de una manera simple y asequible.

Trasplante Intraventricular de Precursores Neuronales Deingidos para Estudios de Neuroarquitectura In Vivo

Aquí presentamos un protocolo, diseñado para utilizar herramientas quimiogenéticas para manipular la actividad de los progenitores interneuronales corticales trasplantados a la corteza de los primeros ratones postnatales.

Trasplante de progenitores interneuronas corticales de ingeniería química en cerebros de ratón postnatal temprano

El trasplante de neuronas GABAérgicas derivadas de células madre pluripotentes humanas generadas por la programación neuronal podría ser un posible enfoque de tratamiento para los trastornos del desarrollo neurológico. Este protocolo describe la generación y el trasplante de precursores neuronales GABAérgicos derivados de células madre humanas en los cerebros de ratones neonatos, lo que permite la investigación a largo plazo de las neuronas injertadas y la evaluación de su potencial terapéutico.

Trasplante de neuronas GABAérgicas derivadas de células madre humanas en el hipocampo de ratón postnatal temprano para mitigar los trastornos del desarrollo neurológico

Mosaico de Análisis de la función de genes en el desarrollo postnatal del cerebro del ratón mediante el uso de virus basada en la recombinación Cre

Aprende a realizar trasplantes homocrónicos de precursores de interneurona en cerebros de ratón postnatal para estudiar la neurociencia del desarrollo. Este método permite analizar cómo el entorno influye en la maduración neuronal.

Homochronic trasplante de precursores de interneurona en cerebros de ratón Postnatal temprana

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