Medición de los niveles de ejercicio de Drosophila melanogaster utilizando la rotación ejercicio cuantificación sistema (requisitos)

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología del ejercicio, como por ejemplo cómo difiere la respuesta al ejercicio en animales de diferentes edades y qué vías genéticas controlan la respuesta al ejercicio. La principal ventaja de esta técnica es que permite a los investigadores, por primera vez, medir la actividad de las moscas que realizan ejercicio inducido por rotación en tiempo real. Louis Patrick Watanabe, un estudiante graduado de mi laboratorio, demostrará el procedimiento.

Antes del experimento planeado, establezca cruces de moscas macho y hembra para que cada progenie controlada pueda ser recolectada para el experimento. Para comenzar, cargue ocho tubos de muestras de vidrio con 10 moscas de prueba anestesiadas por vial. Un grupo experimental estándar consta de 10 viales de 10 moscas de cada sexo.

Para cargar los viales en el REQS, inserte el vial en una ranura del monitor de actividad desde la parte frontal. Luego, coloque la segunda tapa en el vial y centre el vial, moviendo la junta tórica según sea necesario. Aloje el REQS en una incubadora para condiciones ambientales controladas.

Permita que los animales se recuperen de la anestesia durante una hora en esta incubadora antes de continuar. Para ensayos de más de ocho horas, se pueden utilizar viales que contengan alimentos que estén muy firmemente unidos a un extremo del tubo. Después del período de aclimatación, encienda el dispositivo para iniciar las rotaciones.

Ajuste la velocidad a la velocidad deseada, como cuatro RPM. Ningún tubo debe entrar en contacto con la superficie inferior si están colocados correctamente. Para un ensayo típico, basta con iniciar el software y registrar la actividad durante el tiempo deseado, por ejemplo, durante dos horas cuando se utilizan viales sin alimentos.

Al iniciarse, el software guarda automáticamente los datos en un archivo de texto. En el software, una luz de conexión verde indica que el software está recopilando datos. La frecuencia de grabación se puede ajustar en la pestaña Preferencias.

Normalmente, se utilizan intervalos de cinco minutos. Durante el ensayo, no abra la incubadora, ya que los animales son muy sensibles a cualquier perturbación y es probable que respondan con una mayor actividad. Al final del ensayo, finalice la recopilación de datos cerrando el software, luego apague el REQS e inspeccione los tubos.

Tome nota de cualquier muerte que haya ocurrido durante el régimen de ejercicios. En general, cuatro RPM durante dos horas no son letales para las cepas sanas. Finalmente, descargue los viales anestesiando las moscas con dióxido de carbono.

El fichero de datos puede ser analizado con cualquier paquete estadístico. Si hay puntos de tiempo en los que se registra una puntuación de actividad de cero para todas las posiciones, entonces hubo un corte en la conexión durante estos puntos de tiempo. Si se producen cortes, estabilice las conexiones que conducen a la toma telefónica giratoria con cinta adhesiva.

Se ensayaron cuatro líneas de Drosophila genéticamente distintas con el REQS utilizando el protocolo descrito. Cada grupo estaba compuesto por 100 moscas divididas en 10 viales. La actividad promedio se calculó en intervalos de cinco minutos durante el ensayo de dos horas, realizado a cuatro RPM.

La actividad media de ejercicio entre los cuatro genotipos fue significativamente diferente, sin embargo, no se encontraron diferencias significativas entre las moscas macho virgen y las hembras vírgenes, por lo que sus datos se presentan juntos en este análisis. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la genética del ejercicio exploraran varias respuestas al ejercicio en Drosophila melanogaster y hayan estudiado el impacto del ejercicio en el comportamiento y la fisiología de los animales. Siguiendo este procedimiento, se pueden utilizar otros métodos, como el análisis de la composición corporal, las pruebas de esfuerzo y las pruebas de aptitud física para responder preguntas adicionales sobre los impactos de los tratamientos de ejercicio en los animales.