Caracterización de las respuestas de isotipo de inmunoglobulina dependiente del timo y timo-independiente en ratones usando el análisis enzima-ligado del inmunosorbente

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la inmunología sobre las respuestas de anticuerpos dependientes e independientes inducidas por la inmunización con antígenos, así como la activación de las células B y las reacciones del centro germinal. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona mediciones fiables y cuantitativas de la respuesta del isotipo Ig con una comparación directa de la activación de las células B y la inmunidad humoral en ratones. Para la inmunización con polisacáridos TNP, cargue una jeringa de insulina de mililitros por ratón con 100 microlitros de solución de antígeno recién preparada e inserte la aguja en el cuadrante inferior derecho de cada animal en un ángulo de aproximadamente 30 grados para evitar la inyección en el órgano inferior.

Cuando todos los ratones hayan sido inyectados, devuelva a los animales a sus jaulas para que los alojen en una instalación específica libre de patógenos. En los puntos de tiempo experimentales apropiados, se recogen de 150 a 200 microlitros de sangre de cada animal inmunizado mediante sangrado retroorbitario y se permite que las muestras se coagulen a temperatura ambiente durante una o dos horas. Al final de la incubación, centrifugar las muestras de sangre coaguladas y transferir el suero transparente de la parte superior de cada coágulo de sangre a un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitros.