Espectrometría de masa de hoja aerosol: Una técnica rápida ionización ambiental evaluar directamente los metabolitos de los tejidos vegetales

La pulverización de hojas MS es un método rápido para el análisis cualitativo y semicuantitativo de tejidos vegetales intactos que tiene una amplia variedad de aplicaciones. La principal ventaja de esta técnica es que el tejido vegetal se puede analizar directamente sin necesidad de preparar la muestra. Aunque este método proporciona buenos conocimientos sobre los alcaloides mesembrinados de Sceletium, también se puede utilizar para el análisis de otras especies de plantas y productos químicos exógenos como los pesticidas.

Las personas nuevas en este método pueden encontrarlo desafiante porque es necesario optimizar el protocolo para cada especie de planta, tipo de tejido y compuesto de interés. Utilice una fuente de nano pulverización modificada para la pulverización de hojas MS.As no se necesitan componentes fluidos para la pulverización de hojas MS, modifique la fuente eliminando la sonda de cromatografía líquida de la fuente. El cable de espectrometría de masas por pulverización de hojas que aplicará voltaje al tejido vegetal tiene un pin que se ha soldado al cable en un extremo y una abrazadera que se ha soldado en el otro extremo.

Si el sistema ha estado en uso recientemente, deje que se enfríe al tacto antes de eliminar cualquier fuente alternativa en el cono de barrido. A continuación, coloque la fuente MS de spray de hojas nano spray. Por último, cree un archivo de ajuste y un archivo de método como se describe en el protocolo de texto.

Siempre use guantes y no use tejido vegetal que haya sido manipulado con las manos desnudas. De lo contrario, los iones contaminantes como el polietilenglicol dominarán los espectros. Lleve los tejidos vegetales para el análisis a la misma sala que el sistema de espectrometría de masas para permitir un muestreo rápido.

Para el tejido vegetal que no tiene una punta puntiaguda natural, use una hoja de afeitar en un portaobjetos de vidrio para cortar una punta cónica. Corta las hojas de Sceletium tortuosum a las 10 semanas después de la germinación en tiras finas, cada una con un extremo cónico para formar una punta. Use pinzas para seleccionar suavemente el tejido vegetal en el extremo que se sujetará.

Sosteniendo el tejido con pinzas, transfiéralo con cuidado a la pinza. Ajuste el brazo flexible y el alambre con la abrazadera para colocar el tejido en línea con la entrada de MS. Consulte el texto para conocer la distancia óptima desde la entrada de iones para cada espectrómetro de masas específico.

Si los primeros intentos producen una intensidad de señal baja, el tejido vegetal puede acercarse a la entrada de iones. Cargue el archivo de método. Asigne un nombre al archivo de datos y establezca la ubicación de almacenamiento del archivo.

A continuación, encienda el sistema MS haciendo clic en reproducir y haga clic en iniciar para comenzar a adquirir datos. Aplique un disolvente con una pipeta con una punta de carga de gel para maximizar la distancia entre el alto voltaje y las manos del usuario para su protección. Adquiera datos mientras la señal persista o hasta que se hayan recopilado los espectros adecuados, generalmente de 30 a 60 segundos.

Detenga la adquisición de datos y detenga el sistema MS. Después de la adquisición, retire el pañuelo y lave la pinza con metanol al 100% en una toallita sin pelusa. Abra el archivo de datos e inspeccione visualmente el cronograma de masa máxima base.

Compruebe que la intensidad de la señal sea de aproximadamente 10 millones a 500 millones. Cree un nuevo archivo de método con una lista de inclusión de M sobre Z con cuatro decimales. Haga clic en listas globales e inclusión.

En propiedades de PRM, seleccione la energía de fragmentación y otros parámetros de MS en tándem. Para obtener los datos de MS en tándem para los alcaloides de mesembrina, fragmente los iones a 276,1583 M sobre Z, 290,1742 M sobre Z y 292,1897 M sobre Z a una energía de colisión normalizada de 35. A continuación, cargue el archivo de método MS en tándem y un archivo de datos con nombre.

Encienda el sistema MS y comience a adquirir datos agregando un solvente si es necesario. Cuando se hayan recogido los espectros adecuados, normalmente después de 30 a 60 segundos, se detenga la adquisición. Realice el análisis de datos como se describe en el protocolo de texto.

Se muestran los resultados representativos del perfil metabólico de Sceletium tortuosum por MS de pulverización foliar e ionización positiva con el recuadro que muestra 260 a 295 M durante Z.In este estudio, se detectaron un total de nueve alcaloides de mesembrina por MS de pulverización foliar y se realizaron identificaciones puditivas. El cronograma de masa de recuento total de iones MS de pulverización de hojas representa un experimento exitoso de MS de pulverización de hojas en el que se mantuvo una señal estable durante toda la duración de la adquisición. Para cada pico, el número superior es el tiempo en minutos y el número inferior es el M sobre Z. Los espectros de masas en tándem se recogieron en ionización positiva hecha a partir de una hoja cortada de Sceletium tortuosum con pulverización de hojas MS. Las identificaciones positivas de los alcaloides se realizaron a partir de la fragmentación precisa de la masa y la masa para los isómeros de mesembrina M y mesembrena M, mesembrina y mesembrina M dihidro.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo usar el MS en aerosol de hojas para detectar metabolitos de plantas. La pulverización foliar MS se ha utilizado para detectar compuestos endógenos, así como compuestos exógenos como los pesticidas.