Inducción quirúrgica simple de pérdida auditiva conductiva con verificación mediante la visualización del otoscopio y la respuesta de golpe de golpe conductual en Rata
26 de octubre de 2019
Aquí, presentamos un protocolo para establecer una inducción de pérdida auditiva conductiva replicable a través de la punción quirúrgica de la membrana timpánica y la verificación por visualización del otoscopio y evaluación del comportamiento por golpe de aplauso.
El objetivo general de este estudio es establecer una inducción fiable de la pérdida auditiva a través de la punción quirúrgica de la membrana timpánica y la verificación por visualización del otoscopio y evaluación del comportamiento por el sobresalto del clap. El propósito de nuestra práctica es desarrollar un modelo para los trastornos conductores auditivos humanos. Demostramos en el procedimiento quirúrgico práctico de pérdida auditiva conductiva, que es una simplificación en la eliminación del malleus, el método para verificar la pérdida auditiva conductiva por visualización del otoscopio, y un simple sobreso de aplausos conductuales, que validan que se ha producido una pérdida auditiva conductiva.
La principal ventaja del procedimiento que describimos son los procedimientos no invasivos, la verificación de la pérdida auditiva conductiva por otoscopio y la validación por inicio de aplausos. El presente estudio y los procedimientos fueron aprobados por el comité de ética de la investigación animal y la Universidad de la Ciudad de Hong Kong, la Universidad de Hong Kong y el Departamento de Salud de la Región Administrativa Especial de Hong Kong. Para el presente protocolo, elegimos ratas, pero usted puede elegir cualquier roedor.
Pesar los animales para asegurar la anestesia adecuada para la inyección IP. Para la anestesia, es importante que los animales tengan la dosis adecuada. Recoge a tu rata junto al escrúpulo.
Asegúrese de que la dosis correcta de ketamina y xilazina para la inyección ip, e inyección. Asegúrese de realizar un pellizco en los dedo del dedo del año para verificar que no haya sensación de dolor. Para la configuración quirúrgica consiste en su rata anestesiada, los microscisores y su otoscopio.
Limpie minuciosamente el área quirúrgica con etanol. Coloque la cortina quirúrgica en el banco limpio. Posteriormente introduzca sus tijeras, otoscopio y rata.
El tamaño de sus tijeras dependerá del tamaño de su roedor. Bajo otoscopio, visualice el oído izquierdo y derecho de la rata para asegurar una membrana timpánica saludable. Agarre la hélice y extienda el canal auditivo externo para oscurecer y ennegredarse.
Aquí introducirá los microscisores. Introducir los microescisores en el centro del canal auditivo, prestando mucha atención a no cortar el tejido. Escuchar el sonido pop, a continuación, girar para asegurar el desplazamiento del malleus.
La confirmación de una cirugía de pérdida auditiva conductiva exitosa, debe hacerse con un otoscopio. Evalúe cada oído de rata antes y después de la cirugía con un otoscopio con un espéculo de diámetro pequeño. Cuando se visualiza con un otoscopio, se deben estudiar las diferencias entre una membrana timpánica normal y una membrana timpánica perforada.
Aquí, la membrana timpánica normal a la izquierda tiene la cabeza del malleus en su lugar y es drásticamente diferente de la membrana timpánica perforada a la derecha. La membrana timpánica perforada, después de la cirugía de pérdida auditiva conductiva, tiene el malleus desplazado y el pars tensa roto con el umbo del malleus y la cabeza completamente falta. Cuidado postoperatorio para roedores.
Coloque el roedor en la jaula del hogar debajo de una lámpara caliente e inyecte con agentes antibacterianos y glucosa. Corroborar la pérdida auditiva conectiva con el sobresóltela del aplauso conductual. La rata CHL se coloca junto a una rata normal en dos jaulas adyacentes.
Estos se colocan en una habitación silenciosa. Párese a medio metro de distancia y aplauda en duraciones igualmente espaciadas un número específico de veces. Aquí, elegimos cinco.
Aquí, nuestros resultados de comportamiento representativos. Tenga en cuenta que la rata en la parte inferior no salta al sonido de aplausos fuertes. La rata en la parte superior de la pantalla se asusta por estos sonidos de aplausos fuertes.
Por favor, estudie el antes y después de la diferencia de aplausos para estas dos ratas. No inducir la pérdida auditiva conductiva. Una falta de inducir la pérdida auditiva conductiva podría ser causada por sangrado en uno o ambos oídos.
Y en este caso, el roedor debe ser eutanasiado. Esto indicaría que las tijeras no hicieron contacto con la membrana timpánica. Un sonido sin estallido durante el procedimiento.
Un sonido sin estallido indicaría que el procedimiento de pérdida auditiva conductiva era pobre y no estaba limpio. Un sonido sin estallido significaría que sus microscisores no hicieron contacto directo con la membrana timpánica. Visualización del otoscopio.
Si, al visualizar por otoscopio, la membrana timpánica parece normal, esto indicaría que no se ha producido ningún CHL. Una respuesta a la fuerte prueba de sonido de aplausos. Esto indicaría que no se ha producido chL y que el roedor no tiene pérdida auditiva conductiva.
Esto ocurriría cuando una rata salta o es sorprendido por un fuerte sonido de aplauso. La principal ventaja del procedimiento que describimos son los procedimientos no invasivos, la verificación de la pérdida auditiva conductiva por otoscopio y la validación por inicio de aplausos. Después de hacer lo práctico, puede inducir la pérdida auditiva conductiva en un modelo de roedores y explorar las manifestaciones conductuales y psicofísicas de este trastorno auditivo.
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Descripción general
El estudio establece un protocolo confiable para inducir pérdida auditiva conductiva en roedores mediante punción quirúrgica de la membrana timpánica. Mediante la visualización con otoscopio y evaluaciones conductuales, el método verifica la inducción de la pérdida auditiva, proporcionando un modelo para explorar trastornos conductivos humanos.
Componentes Principales del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Investigación sobre pérdida auditiva
- Modelos animales
Antecedentes
- La pérdida auditiva conductiva puede afectar significativamente el procesamiento auditivo.
- Los modelos existentes pueden carecer de fiabilidad para inducir y verificar la pérdida auditiva.
- El estudio tiene como objetivo crear un enfoque quirúrgico estandarizado para lograr una mejor reproducibilidad.
Objetivo del estudio
- Desarrollar un método consistente para inducir pérdida auditiva conductiva en roedores.
- Facilitar futuras investigaciones sobre las implicaciones conductuales y fisiológicas de la pérdida auditiva conductiva.
Métodos Utilizados
- La plataforma principal incluye técnicas quirúrgicas y verificación postoperatoria mediante pruebas conductuales.
- El modelo biológico utilizado son ratas, que se someten a una punción de la membrana timpánica.
- Los pasos clave incluyen anestesia, ejecución quirúrgica y evaluación postoperatoria.
- La verificación de la hipoacusia conductiva implica un examen otoscópico y la respuesta conductual al sonido.
Resultados principales
- La inducción exitosa de la hipoacusia conductiva se confirma mediante observaciones otoscópicas y respuestas conductuales al aplauso.
- Las diferencias en el estado de la membrana timpánica antes y después de la cirugía ilustran la eficacia del procedimiento.
- Las evaluaciones conductuales revelan variaciones significativas en las respuestas entre los sujetos con hipoacusia inducida y los sujetos normales.
Conclusiones
- Este estudio proporciona un método viable para investigar trastornos de la hipoacusia conductiva en modelos animales.
- El protocolo permite examinar los cambios conductuales asociados con la disfunción auditiva.
- Las implicaciones incluyen una comprensión más profunda de los mecanismos detrás de la pérdida auditiva conductiva y su impacto en los comportamientos auditivos.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
Los modelos fiables en roedores de pérdida auditiva conductiva (CHL) son esenciales para reducir los riesgos en la descubrimiento temprano de dianas auditivas y para evaluar las consecuencias conductuales y neuronales del deterioro auditivo. Este protocolo permite la inducción y verificación reproducible de la CHL, apoyando la investigación traslacional y el desarrollo de modelos preclínicos para las vías de trastornos auditivos. El enfoque facilita la evaluación estandarizada de intervenciones para la pérdida auditiva y estudios mecanicistas en sistemas relevantes para la enfermedad.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite la inducción controlada de LCH para la interrogación basada en hipótesis de las vías auditivas.
- Apoya la validación funcional de objetivos al vincular la ruptura de la membrana timpánica con resultados conductuales.
- Facilita la reducción de riesgos mecanicistas al proporcionar un modelo claro para estudios de déficit auditivo.
Desarrollo de Cribado y Ensayos
- Proporciona un sistema validado para el desarrollo de ensayos conductuales y otoscópicos en la investigación auditiva.
- Asegura la reproducibilidad y estandarización de la inducción de la PSC para flujos de trabajo de cribado posteriores.
- Permite la evaluación cuantitativa de la función auditiva mediante métricas de la respuesta de sobresalto.
Investigación Translacional y Preclínica
- Se alinea con modelos relevantes para la enfermedad en la evaluación preclínica de terapias auditivas.
- Facilita la continuidad desde el descubrimiento hasta la validación preclínica al permitir la medición de resultados conductuales y neuronales.
- Reduce el riesgo de traslación al modelar déficits auditivos conductivos similares a los humanos en roedores.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
Este protocolo de inducción y verificación de CHL se sitúa en la intersección entre el descubrimiento temprano y el desarrollo de modelos preclínicos, permitiendo pruebas de hipótesis robustas y la preparación de ensayos para carteras de investigación auditiva.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis nulas mediante el aislamiento del efecto de la ruptura de la membrana timpánica en la función auditiva.
- Detección: Proporciona lecturas estandarizadas de comportamiento y otoscópicas para la validación de ensayos y la evaluación de compuestos.
- Análisis: Ofrece mediciones cuantitativas de variables dependientes mediante la respuesta de sobresalto y la puntuación otoscópica.
- Investigación Traducional: Conecta las fases de descubrimiento y preclínica mediante la modelización de fenotipos de pérdida auditiva clínicamente relevantes.
- Reutilización Empresarial: Ofrece un modelo flexible y reproducible adaptable a diversos programas de investigación auditiva.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en la validación de objetivos auditivos y en estudios mecanicistas.
- Valor operativo: Estandariza la inducción y verificación de la HCS, mejorando la reproducibilidad y escalabilidad.
- Valor estratégico: Permite tomar decisiones informadas de avanzar/no avanzar en candidatos terapéuticos auditivos al proporcionar datos preclínicos sólidos.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo de programas para la pérdida auditiva mediante resultados fiables del modelo.
Consideraciones de Implementación
- Requiere competencia quirúrgica y familiaridad con el examen otoscópico en roedores.
- Necesita acceso a anestesia, instrumentos quirúrgicos e infraestructura para pruebas conductuales.
- Exige la estandarización entre equipos de los procedimientos de inducción y verificación para lograr reproducibilidad.
- Adaptable a diversas especies de roedores, considerando las diferencias anatómicas.
- Las limitaciones incluyen una curva de aprendizaje para la técnica quirúrgica y la posible variabilidad en el éxito de la inducción.
