Name: Crecimiento anaerobio y mantenimiento de líneas de células de mamífero (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprende el cultivo anaerobio prolongado de líneas celulares mamíferas hasta 17 días. Este método permite estudiar la fisiología celular en ambientes hipóxicos y aplicaciones en terapia oncológica personalizada.

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Los autores agradecen a la oficina de investigación de la Universidad de Midwestern y programas patrocinados por su apoyo.

1. preparar los medios para el cultivo anaerobio de varias líneas celulares mamíferos
<ol><li>
Hacer el medio PS-74656 completo para una anoxia de la célula cultura25.
	<ol>
<li>Asegúrese de la solución stock de nitrito estéril (5 M; 100 x) disolviendo 17,25 g de nitrito en 50 mL de agua destilada desionizada y filtrar para esterilizarlo.</li>
		<li>Agregar 0,5 mL de la solución madre de nitrito por cada 50 mL de glucosa baja DMEM (1 g/L de glucosa) con 110 mg/L de L-glutamina, 584 mg/L piruvato de sodio y 10% suero bovino fetal (FBS; inactivado con calor). Nota: El uso de FBS concentraciones superiores a 10% son tóxicos. De nota, una línea celular de cáncer probada tenía baja tolerancia a los medios de comunicación con nitrito (MDA-MB-231, línea de células de cáncer de mama) y, por lo tanto, se cultivaba en la ausencia de nitritos. Además, aunque medio PS-74656 apoyó el crecimiento de todas las líneas celulares que fueron probados (n = 9), ciertas líneas celulares (p. ej., células Vero) exhibieron altas concentraciones de células y una mayor viabilidad en PS-74656 con glucosa alta (4,5 g/L) DMEM 25.</li>
		<li>Colocar 20 mL de medio en un tubo de centrífuga cónico de 50 mL estéril. No apriete el tapón. debe ser holgada.</li>
		<li>De gas el medio colocando el tubo en una campana de vacío en un ángulo aproximado de 45 °, para maximizar el área de superficie mediano.</li>
		<li>Aplicar un vacío usando una bomba de vacío, o su equivalente, a temperatura ambiente. Mantener el vacío hasta que las burbujas ya no se observan (24 – 48 h).</li>
		<li>Retire el tubo del frasco y cerrar inmediatamente la tapa, sellado el tubo para minimizar la introducción de aire en el medio.</li>
		<li>Coloque el tubo en la cámara comercial de anaerobia.</li>
		<li>Afloje el tapón del tubo y deje que el ambiente en el tubo se equilibren con la de la mezcla de gas anaerobio en la cámara durante al menos 24 h. Nota: El medio debe permanecer en la cámara hasta que se agote. Para acelerar el proceso, al ras del tubo por lo menos 3 veces con la mezcla de gas anóxico con una pipeta de transferencia estéril llenan de gas anóxico, que consiste en H2, CO2y N2.
</li>
		<li>Degas todos los tubos (10 – 15 min) colocados en la cámara anaerobia descrita antes de sellar el tubo y colocar en la cámara. Antes de su uso, lavarlo con la mezcla de gas anaerobio utilizando pipetas de transferencia de 1.5-2 mL o pipetas que han sido volcadas con anoxia de gas por lo menos 3 x.</li>
		<li>Mientras que en la cámara anaerobia, saque 100 μl de medio a un tubo de microcentrífuga estéril desgasificado y prueba para el oxígeno disuelto mediante una sonda de oxígeno dentro de la cámara. Nota: El electrodo de oxígeno está calibrado por antes protocolo del fabricante. Las lecturas de los medios de la mezcla de gas anaerobio debidamente desgasificada y equilibrado son 0. PRECAUCIÓN: Si las lecturas están por encima de 0,3 ppm de oxígeno, continúan incubar los medios de comunicación en la cámara anaerobia ya que se requiere más tiempo para equilibrar el medio.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anoxia cultivo de varias líneas celulares mamíferos
<ol><li>
Día designado -1
	<ol>
<li>Cultivar células (37 ° C, 5% CO2) en un matraz T150 a 90% de confluencia para el control de cultivo anóxico y normoxic prever un número suficiente de células de tres placas de 24 pocillos (confluencia del 80%). Nota: Para este estudio, se utilizaron células HeLa 229 y Vero. Este protocolo también fue probado y demostrado ser eficaz para el crecimiento y el mantenimiento de siete otras célula líneas25.</li>
		<li>Retire el medio del frasco por la aspiración y lavar con 10 mL de HBSS.</li>
		<li>Reemplazar el medio con 5 mL de tripsina. Agitar el matraz hasta que las células separan visualmente de plástico. Aspirar la mayor parte de la tripsina, entonces golpee el frasco para desalojar las células adherentes. Añadir 10-15 mL de glucosa alta DMEM (4,5 g/L de glucosa, 110 mg/L de L-glutamina, 10% FBS, 50 μg/mL de gentamicina) inactivación de la tripsina.</li>
		<li>Triturate las células usando una pipeta de 25 mL hasta que todos grupos de células se interrumpen.</li>
		<li>Contar las células y determinar la viabilidad mediante hemocitómetro estándar y el método de exclusión de colorante azul de trypan o el equivalente automatizado.</li>
		<li>Suspender las células en la glucosa alta DMEM como se mencionó anteriormente a una densidad celular de 2.24 x 105 células/mL.</li>
		<li>Añadir 1 mL de la suspensión de células en los pocillos de una placa de cultivo de tejidos de 24 pocillos (2.24 x 105 células/pozo; 80% confluencia). 1 placa para el cultivo anóxico y otro para una cultura normoxic del control de la semilla.</li>
		<li>Incube las células a 37 ° C en condiciones de normoxic (5% CO2) durante 24 h. Nota: Las células se pueden platear en varias placas amplias. Sin embargo, sembrar las células para el crecimiento anóxico en frascos corre el riesgo de la introducción de oxígeno en el sistema, a no ser que es cuidado para purgar completamente el gas atmosférico.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Designado día 0
	<ol>
<li>Después de 24 h de incubación normoxic, coloque las placas de crecimiento anóxico en la cámara anaerobia (una cámara anaeróbica comercial; Figura 1).</li>
		<li>Cambiar inmediatamente el medio sin antibióticos-gaseados 74656 PS medio que ha sido aclimatada durante 24 horas a la cámara anaerobia. Colocar la placa en un recipiente con una toalla húmeda y ligeramente cierre para mantener la humedad. Nota: Las placas de crecimiento normoxic se tratan idénticamente con la excepción de que todos los tratamientos se realizan bajo las condiciones atmosféricas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Designado día 1
	<ol>
<li>1 día de la incubación anaeróbica comienza después de 24 h de incubación en la cámara anaerobia comercial que contiene la mezcla de gas anaerobio estándar de 80% N2, 10% H2y 10% CO2.</li>
		<li>Incube las células durante varios períodos de tiempo.</li>
		<li>Monitorear el medio anaerobio para el cambio de color con el tiempo. Nota: Un cambio de color de rojo naranja a magenta señala el momento de cambiar el medio. Esto puede tomar hasta 2 semanas para ocurrir. Un cambio de color en el medio de rojo-naranja a amarillo indica la presencia de una contaminación bacteriana.</li>
		<li>Cuando el medio cambia de rojo a magenta, eliminar las células runagate por aspiración.</li>
		<li>Lugar los medios de comunicación pasó aspirado con las células runagate desgasificada y anaerobia gas había equilibrado los tubos del microfuge, cerrar los tubos mientras se asegura que el sello es seguro y luego centrifugarles (326 g, a temperatura ambiente durante 10 min). Reemplace inmediatamente los medios aspirados en el pozo con 1 mL de nuevo medio PS-74656 desgasificada.</li>
		<li>Coloque el tubo de microcentrífuga con células sedimentados en la cámara anaeróbica antes de abrirlo. Aspire el medio gastado y sustituirla por medio de PS-74656 desgasificada fresco para un volumen total de 1 ml en el tubo de microcentrífuga.</li>
		<li>Retomar las células del tubo de un pozo en la placa de cultivo de tejido de 24 pocillos.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. evaluación de la diferenciación fenotípica de la célula por microscopio de las células cultivadas anaeróbicamente
<ol><li>
Mientras que en la cámara anaerobia, colocar la placa en una caja resellable con la mezcla de gas anaerobio y cerrar el cuadro. Nota: El cuadro debe contener una toalla de papel húmeda para proporcionar humedad y evitar que la placa se seque. Para microscopia, bolsas de sándwich funcionan mejor ya que son delgadas.<ol>
<li>Para observar las células bajo el microscopio, totalmente selle la bolsa y retire de la cámara.</li>
		<li>Cuidadosamente estirar la bolsa de plástico sobre la placa, examinar las células utilizando un microscopio invertido de contraste de fase con el accesorio de cámara y tomar microfotografías con diferentes aumentos.</li>
		<li>Devolver la placa en la bolsa sellada a la cámara y continuar la incubación como se describe en el paso 2.3.3.</li>
		<li>Para analizar por separado las células runagate en suspensión, siga los pasos descritos en el paso 2.3.5. Nota: Estas células pueden utilizarse para pruebas aeróbicas o pueden ser devuelto a la cámara de anaerobia para la prueba de esta población específica.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este método representa la primera vez de células de mamífero que fueron cultivadas durante largos períodos de tiempo en ausencia de oxígeno. Basado en observaciones actuales, el crecimiento anóxico capacidad a través de una vía no fermentante parece ser universal entre las células mamíferas líneas28, donde el crecimiento anaerobio dio lugar a la divergencia de fenotipo. Esto se observó para todas las líneas celulares probadas. Con el cultivo anaeróbico, aumentando la proporción de las cél...

Las células de tumores sólidos, nichos de células madre y los recubren las superficies de la mucosa existen en ambientes que experimentan niveles de reducción de oxígeno, como anoxia1,2,3,4. En Estados fisiológicos normales, oxigenación varía más allá de hipoxia anoxia (ausencia completa de oxígeno)5,6. La realización que el oxígeno atmosférico afecta la replicación de células de mamífero y ese crecimiento de la célula en vitro puede ser optimizado en condiciones de oxígeno empobrecido se reportó en la década de 1970. Richter et al. 7 demostró que 1 – 3% de los niveles de oxígeno (hipoxia) mayor eficiencia chapado en comparación con el oxígeno atmosférico (20%). La vida de la célula diploide humana se extiende también en la cultura hipóxico condiciones8.
In vivo, se producen condiciones hipóxicas cuando tiendas de oxígeno empobrecido (por ejemplo, durante el ejercicio intenso), en donde se conecta la producción de ATP en el músculo esquelético de respiración aerobia, fermentación (respiración anaerobia) con la producto final ácido láctico9. Patológico, en los tumores cancerosos, el interior del tumor masa es hipóxico a anoxia debido a la pobre vascularización10. El efecto de la perfusión limitada en interiores de tumor es validado independientemente por interiores de tumor colonizados por anaerobios obliga1. Mecánico, supervivencia de la célula del tumor en hipoxia se piensa que es únicamente dependiente de la expresión del gene de alfa 1 del factor inducible por la hipoxia (HIF1-alfa), que es la respuesta espontánea inicial a hipoxia4,11 , 12. HIF1-alfa es inducida bajo condiciones hipóxicas por proteínas de choque térmico que se unen HIF1-alfa promotor y alza la transcripción génica del12. Estas proteínas de choque térmico se creen que ayuda en la inducción de los diferentes fenotipos en el microambiente hipóxico del tumor. Estos fenotipos muestran un incremento en la expresión de los transportadores de glucosa de la membrana celular y la tasa de glucólisis (efecto Warburg)13. El resultado es un interruptor de la fosforilación oxidativa mitocondrial de lactato fermentación.
Supervivencia anóxica también puede utilizar alternativas a la glucosa para apoyar la supervivencia fenómeno14,15. El mejor ejemplo mamífero estudiado es la rata topo, que puede sobrevivir durante casi 20 minutos sin oxígeno a través de una vía basada en fructosa glucolisis fermentación del14. Una adaptación alternativa ocurre en ciertos pescados (por ejemplo, carpa [Carassius SP.], que puede sobrevivir mucho más de largo periodos de tiempo mediante glucólisis con etanol como subproducto terminal)15. En ambos casos, la fermentación impulsa el metabolismo lo que permite la supervivencia en ausencia de oxígeno. La hipótesis actual para la supervivencia poste-anóxica es que tanto tiempo como HIF1-alfa se activa durante la hipoxia, la respiración mitocondrial, sin la necesidad de oxígeno, ocurre bajo condiciones anaeróbicas16. Además, se postula que el uso de una vía fermentativa de supervivencia hipóxica/anóxica mejora supervivencia del tumor ya que las células de evitar el estrés oxidativo que podría para ser perjudicial para la supervivencia celular del17. Este postulado es apoyado por un estudio reciente que muestra que en los cardiomiocitos, la hipoxia reduce el estrés oxidativo que se colocan en el tumor de la célula17.
Hasta la fecha, la naturaleza esencial de una vía fermentativa para la supervivencia de células de mamífero anóxico ha sido inculcada en la literatura, debido, en gran parte, a la incapacidad de las células mamíferas de la cultura en la ausencia completa de oxígeno durante más de 3 días. Sin embargo, una alternativa a la glucólisis para la supervivencia anaerobia ocurre en las bacterias. En ciertas bacterias, nitrógeno o sulfato (entre otros compuestos) puede servir como aceptores de electrones terminal para el sistema de la citocromo oxidasa en ausencia de oxígeno18. Aunque la evolución de bacterias y eucariota ocurrió paralelamente desde divergentes desde el último antepasado común universal, se estima que las mitocondrias fueron proporcionando energía a las células de 1,542 millones años antes de la oxigenación de los océanos19 . Puesto que los investigadores han demostrado que la mitocondria aislada puede producir ATP en ausencia de oxígeno, con nitrito como aceptor terminal de electrones, es razonable asumir que las células podrían funcionar durante períodos de tiempo más de 3 días en ausencia de oxígeno 20 , 21 , 22 , 23. la metodología descrita en este estudio tiene una utilidad para el crecimiento de células de mamífero anaerobio de numerosas líneas celulares.

<table><tbody><tr><td>Cámara anaeróbica Whitney A35</td><td>Don Whitley Scientific&nbsp;</td><td>Microbiology International</td><td>La capacidad de quitar la parte frontal de la cámara hace que sea fácil colocar los instrumentos en el interior sin preocuparse por pasarlos a través de los portales.</td></tr><tr><td>Incubadora <>2</td><td>Fisher Scientific</td><td>3531</td><td></td></tr><tr><td>Campana de cultivo de tejidos</td><td>Labconco</td><td>DO55735</td><td></td></tr><tr><td>pipeta auxiliar</td><td></td><td>Drummond 4-000-100</td><td></td></tr><tr><td>pipetas de transferencia estériles</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-358867</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cónicos estériles de 50 cc</td><td>DOT</td><td>451-PG</td><td></td></tr><tr><td>tarro</td> <td>de vacíoNalgene 111410862889</td><td>BTA-Mall 5311-0250</td><td></td></tr><tr><td>DMEM glucosa alta (4,5 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>DMEM glucosa baja (1 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>VWR</td><td>1500-500</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>VWR</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>tripsina</td><td>VWR</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>gentamicina</td><td>Gibco</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>pipetas estériles</td><td>CellTreat</td><td>229210B, 229205B</td><td></td></tr><tr><td>Matraz para cultivo de tejidos (T75 o T150)</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-200263, sc-200264</td><td></td></tr><tr><td>Placas tratadas para cultivo de tejidos de 24 pocillos</td><td>DOT</td><td>667124</td><td></td></tr><tr><td>Glad Bolsas para sándwiches</td><td>Ziplock Microscopio</td> de fase invertida <td>Ziploc Costco</td><td></td></tr><tr><td>(10, 20 objetivos de 40x con cámara mont)</td><td>Nikon Eclipse</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>azul tripán</td><td>Invitrogen</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>hemocitómetro</td><td>Invitrogen</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Contador de células automatizado Countess</td><td>Life Technologies</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>pipetas de microtitulación Rainin</td><td>Mettler Toledo</td><td>Pipeta Rainin Classic PR-100</td><td></td></tr><tr><td>puntas de microtitulación</td><td>Santa Cruz Biotecnología</td><td>sc-213233 & sc-201717&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Estante para tubos de ensayo (tubos de 50 cc)</td><td>The Lab Depot</td><td>HS29050A</td><td></td></tr><tr><td>nitrito de sodio</td><td>Sigma</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/237213?lang=en&region=US</td><td></td></tr><tr><td>cajas transparentes con tapa</td><td>Rosti Mepal</td><td>Toallas de papel de goma criada</td><td></td></tr><tr><td></td><td>rascador</td> de células interno <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>CellTreat</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Etanol</td> al 70% Tubos <td></td><td></td></tr> de microcentrífuga <tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>estériles</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-200273</td><td></td></tr><tr><td>bolsas de riesgo biológico con soporte (de escritorio)</td>Guantes de nitrilo <td>de HS10320</td><td></td> <td>Heathrow Scientific</td></tr><tr><td></td><td>Electrodo</td><td></td> de oxígeno VWR 89428 <td></td></tr><tr><td></td><td>Medidor de pH eDAQ</td><td>EPO354</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jenway</td><td>3510</td><td></td></tr><tr><td>pH papel/ pHydrion</td><td>Sigma Aldich</td><td>Z111813</td><td></td></tr></tbody></table>

crecimiento anaerobio y mantenimiento de líneas de células de mamífero

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

Más superficies de la mucosa junto con los puntos medios en tumores y nichos de células madre son las zonas geográficas del cuerpo que son anóxicas. Estudios previos muestran que la incubación en normoxic (5% CO2 en aire) o hipóxica condiciones (niveles bajos de oxígeno) seguido de un resultados de incubación anóxico (ausencia de oxígeno libre) en la viabilidad limitada (2-3 días). Se desarrolló una metodología novedosa que permite un cultivo celular anóxico (de al menos 17 días, el tiempo máximo de prueba). El aspecto más crítico de esta metodología es asegurar que no hay oxígeno se introduce en el sistema. Esto se obtiene por la desgasificación de los medios de comunicación y por lavado de tubos, platos, matraces y pipetas con una mezcla de gas anaerobio (H2, CO2, N2) seguido por permitir que los materiales a que se equilibren al ambiente anóxico (sin oxígeno) antes de su uso. Debe tener cuidado adicional al adquirir fotomicrografías a garantizar que las micrografías obtenidas no contienen artefactos. En ausencia de oxígeno, morfología de la célula se altera significativamente. Se observan dos morfotipos diferentes para todas las células cultivadas anaeróbicamente. La capacidad de crecer y mantener las células de mamíferas en ausencia de oxígeno puede aplicarse al análisis de la fisiología celular, interacciones de naturaleza polimicrobiana y la caracterización de vías biosintéticas para desarrollo de medicamentos nuevos de cáncer.

La fuerza de este protocolo radica en su apoyo, la longevidad y el crecimiento de múltiples líneas celulares y en el reconocimiento de que hay una alteración profunda y divergencia en la morfología celular del25. El elemento más crítico de este estudio es la transferencia y el mantenimiento de las células bajo anaerobiosis estricta. Esto requiere una cámara anaeróbica organizado para maximizar el protocolo (figura 1) y la garantía de q...

Aquí, describimos un nuevo método que permite el cultivo anaerobio a largo plazo de las líneas celulares establecidas. El tiempo máximo de supervivencia que fue probado es de 17 días. Este método es adecuado para las pruebas de agentes citotóxicos y explorar la fisiología de la anoxically replicación de las células.

Crecimiento anaerobio y mantenimiento de líneas de células de mamífero

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...

Este método se puede utilizar para caracterizar la fisiología de las células anóxicas y ayudar a responder preguntas clave sobre las interacciones huésped-patógeno, la diferenciación de las células madre y la metástasis de las células cancerosas y la susceptibilidad terapéutica. Este es el primer protocolo descrito que permite el cultivo anóxico a largo plazo de células de mamíferos. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia oncológica dirigida y personalizada y la terapia rejuvenecedora porque, debido a la toxicidad del oxígeno, varios tipos de células prefieren entornos con poco oxígeno para el crecimiento.Aunque este método puede proporcionar información sobre la respiración anaeróbica y el metabolismo de las células, también se puede aplicar a otros sistemas, como el cultivo de células madre. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque se debe tener mucho cuidado para evitar la contaminación por oxígeno. La demostración física de este método es fundamental, ya que el cuidado necesario para excluir la contaminación por oxígeno no es intuitivo.Para empezar, añadir 0,5 mililitros de solución madre de nitrito a DMEM bajo en g

anaerobic-growth-and-maintenance-of-mammalian-cell-lines

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Una modificación en 3-D in vitro sistema se presenta en el que las características del crecimiento de varias líneas de células tumorales en la membrana basal reconstituida se correlacionan con el comportamiento inactivo o proliferativa de las células tumorales en un sitio secundario...

Un In Vitro Sistema para el Estudio de latencia del tumor y el salto hacia el crecimiento metastásico

Se presenta una descripción de cómo calibrar Transferencia Förster Resonance Energy sensores biológicos integrados (FIBS) en el perfil metabólico situ. Los FIBS se pueden utilizar para medir los niveles intracelulares de metabolitos de forma no invasiva ayudando en el desarrollo de modelos metabólicos y cribado de alto rendimiento de las condiciones de bioprocesos.

FIBS habilitadas no invasiva perfiles metabólicos

Aquí se presenta un protocolo para propagar células Homalodisca vitripennis y HoCV-1 in vitro. Se retiró el medio de HoCV-1 cultivos positivos y ARN extraído cada 24 h durante 168 horas. Supervivencia celular se cuantificó mediante tinción con azul de tripano. Partículas virales enteras fueron extraídos después de la infección. ARN extraído se cuantificó por QRT-PCR.

Propagación de<em&gt; Homalodisca coagulata virus-01</em&gt; A través de<em&gt; Homalodisca vitripennis</em&gt; Cultivo Celular

Utilizando un biorreactor neumático, demostramos el montaje, el funcionamiento y el rendimiento de este sistema de biorreactor de un solo uso para el crecimiento de células de mamíferos.

El cultivo de células de mamífero utilizando un solo uso Sistema Neumático biorreactor

La regulación de nutrientes mediante la alimentación ajustada al crecimiento continuo mejora las tasas de crecimiento de los esferoides de células de mamíferos en comparación con la alimentación intermitente por lotes para cultivos en biorreactores de suspensión agitada.  Este estudio demuestra los métodos necesarios para establecer cultivos alimentados con tasa ajustada simple.

Nutriente Reglamento mediante la alimentación continua de expansión a gran escala de células de mamífero en esferoides

Las líneas celulares cultivadas primarias o establecidas se utilizan comúnmente para abordar las cuestiones biológicas y mecanicistas fundamentales como un enfoque inicial antes de usar modelos animales. Este protocolo describe cómo preparar extractos celulares enteros y fracciones subcelulares para estudios de zinc (Zn) y otros oligoelementos con espectroscopía de absorbancia atómica.

Espectroscopía de absorbancia atómica para medir las agrupaciones intracelulares de zinc en células de mamífero

Aquí, describimos la implementación e interpretación de los resultados de un ensayo cuantitativo de autorenovación de la mamismo in vitro.

Cuantificación de la auto-renovación en las culturas de la maméfera de la muriña

El músculo esquelético comprende múltiples tipos de células, incluidas las células madre residentes, cada una con una contribución especial a la homeostasis y regeneración muscular. Aquí, se describe el cultivo 2D de células madre musculares y el nicho de células musculares en un entorno ex vivo que conserva muchas de las características fisiológicas, in vivo y ambientales.

Cultivo masivo no fraccionado de músculo esquelético de ratón para recapitular la quiescencia de nicho y de células madre

Este protocolo presenta un método para fabricar un chip microfluídico de doble capa y analizar el crecimiento microbiano bajo rápidas oscilaciones de oxígeno. El rendimiento del dispositivo se validó mediante la detección de oxígeno en canales de fluidos y el cultivo microbiano.

Creación de oscilaciones rápidas de oxígeno en el análisis de crecimiento microbiano de una sola célula utilizando un dispositivo microfluídico de doble capa

Presentamos un protocolo para el dispositivo de cultivo continuo milifluido (MCCD), que permite el cultivo de poblaciones bacterianas bajo condiciones constantes de bajas concentraciones de nutrientes (hasta cientos de concentraciones nanomolares) o fluctuaciones temporales de nutrientes en una escala temporal de tiempo.

Un dispositivo milifluido de cultivo continuo para el estudio de Escherichia coli bajo condiciones de nutrientes bajos y fluctuantes

Aprende el cultivo anaerobio prolongado de líneas celulares mamíferas hasta 17 días. Este método permite estudiar la fisiología celular en ambientes hipóxicos y aplicaciones en terapia oncológica personalizada.

Crecimiento anaerobio y mantenimiento de líneas de células de mamífero

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