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DOI: 10.3791/58149-v
Kyle Taruc1, Charles Yin1, Daniel G. Wootton2,3, Bryan Heit1
1Department of Microbiology and Immunology and the Center for Human Immunology,University of Western Ontario, 2Institute of Infection and Global Health,University of Liverpool, 3Department of Respiratory Research,Aintree University Hospital NHS Foundation Trust
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a fluorescence microscopy protocol for quantifying efferocytosis, the process of phagocytic removal of apoptotic cells. The method allows for the assessment of efferocytic signaling pathways and provides clear quantification of apoptotic cell uptake.
Efferocytosis, la eliminación fagocítica de células apoptóticas, es necesaria para mantener la homeostasis y es facilitada por receptores y vías de señalización que permiten el reconocimiento, la inmersión y la internalización de células apoptóticas. Adjunto, presentamos un protocolo de microscopía de fluorescencia para la cuantificación de efferocytosis y la actividad de vías de señalización de efferocytic.
Este método se puede utilizar para responder a preguntas clave en el campo de la eferrocitosis, como el papel de las moléculas de señalización en la mediación de la absorción de células apoptóticas. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona una cuantificación clara de la captación de células apoptóticas, incluida la captación parcial o fragmentada de células apoptóticas, lo que no siempre es evidente con otros métodos. Aunque este método puede proporcionar información sobre la eferocitosis de las células inmunitarias, también se puede aplicar a otros tipos de células, como las células epiteliales o cancerosas.
Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la dificultad de optimizar los ajustes de adquisición del microscopio. Después de preparar los macrófagos humanos y las células Jurkat apoptóticas, use un hemocitómetro para contar las células apoptóticas. A continuación, transfiera una cantidad suficiente de células apoptóticas a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros.
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