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Immunology and Infection
Cuantificación de Efferocytosis por microscopía de fluorescencia unicelular
Cuantificación de Efferocytosis por microscopía de fluorescencia unicelular
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Cuantificación de Efferocytosis por microscopía de fluorescencia unicelular

Full Text
13,598 Views
06:15 min
August 18, 2018

DOI: 10.3791/58149-v

Kyle Taruc1, Charles Yin1, Daniel G. Wootton2,3, Bryan Heit1

1Department of Microbiology and Immunology and the Center for Human Immunology,University of Western Ontario, 2Institute of Infection and Global Health,University of Liverpool, 3Department of Respiratory Research,Aintree University Hospital NHS Foundation Trust

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a fluorescence microscopy protocol for quantifying efferocytosis, the process of phagocytic removal of apoptotic cells. The method allows for the assessment of efferocytic signaling pathways and provides clear quantification of apoptotic cell uptake.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Immunology

Background

  • Efferocytosis is crucial for maintaining cellular homeostasis.
  • It involves the recognition and internalization of apoptotic cells by phagocytes.
  • Understanding the mechanisms of efferocytosis can provide insights into various diseases.
  • This method can be applied to different cell types, including immune and cancer cells.

Purpose of Study

  • To quantify the uptake of apoptotic cells by immune cells.
  • To investigate the role of signaling molecules in efferocytosis.
  • To provide a reliable method for studying efferocytosis in various cell types.

Methods Used

  • Preparation of human macrophages and apoptotic Jurkat cells.
  • Counting apoptotic cells using a hemocytometer.
  • Fluorescence microscopy for visualization and quantification.
  • Optimization of microscope acquisition settings for accurate results.

Main Results

  • The method allows for clear quantification of apoptotic cell uptake.
  • Partial or piecemeal uptake of apoptotic cells can be assessed.
  • Insights into efferocytosis mechanisms can be gained through this approach.
  • The technique is applicable to various cell types beyond immune cells.

Conclusions

  • This fluorescence microscopy protocol enhances the understanding of efferocytosis.
  • It provides a valuable tool for researchers studying cell death and clearance.
  • Future applications may extend to other fields of research involving cell interactions.

Frequently Asked Questions

What is efferocytosis?
Efferocytosis is the process by which phagocytic cells remove apoptotic cells to maintain homeostasis.
Why is quantifying efferocytosis important?
Quantifying efferocytosis helps understand the mechanisms of cell clearance and its implications in various diseases.
What types of cells can this method be applied to?
This method can be applied to immune cells, epithelial cells, and cancer cells.
What are the challenges in using this method?
Optimizing microscope acquisition settings can be difficult for individuals new to this method.
What advantage does this method have over others?
It provides clear quantification of apoptotic cell uptake, including partial uptake, which may not be visible with other methods.
How are apoptotic cells prepared for this method?
Apoptotic cells are prepared by using human macrophages and Jurkat cells, followed by counting with a hemocytometer.

Efferocytosis, la eliminación fagocítica de células apoptóticas, es necesaria para mantener la homeostasis y es facilitada por receptores y vías de señalización que permiten el reconocimiento, la inmersión y la internalización de células apoptóticas. Adjunto, presentamos un protocolo de microscopía de fluorescencia para la cuantificación de efferocytosis y la actividad de vías de señalización de efferocytic.

Este método se puede utilizar para responder a preguntas clave en el campo de la eferrocitosis, como el papel de las moléculas de señalización en la mediación de la absorción de células apoptóticas. La principal ventaja de esta técnica es que proporciona una cuantificación clara de la captación de células apoptóticas, incluida la captación parcial o fragmentada de células apoptóticas, lo que no siempre es evidente con otros métodos. Aunque este método puede proporcionar información sobre la eferocitosis de las células inmunitarias, también se puede aplicar a otros tipos de células, como las células epiteliales o cancerosas.

Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la dificultad de optimizar los ajustes de adquisición del microscopio. Después de preparar los macrófagos humanos y las células Jurkat apoptóticas, use un hemocitómetro para contar las células apoptóticas. A continuación, transfiera una cantidad suficiente de células apoptóticas a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros.

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Inmunología e infección número 138 Efferocytosis fagocitosis apoptosis microscopia fagocitos macrófagos

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