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DOI: 10.3791/58176-v
Weikun Xiao1, Arshia Ehsanipour1, Alireza Sohrabi1, Stephanie K. Seidlits2
1Department of Bioengineering,University of California, Los Angeles, 2Department of Bioengineering, Jonsson Comprehensive Cancer Center, Broad Stem Cell Research Center, Brain Research Institute,University of California, Los Angeles
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí, presentamos un protocolo para el cultivo tridimensional de células de glioblastoma derivados del paciente dentro de biomateriales ortogonalmente ajustables diseñados para imitar la matriz del cerebro. Este enfoque proporciona una en vitro, plataforma experimental que mantiene muchas características de en vivo células de glioblastoma normalmente perdidas en cultura.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre los tumores de glioblastoma y cómo la matriz extracelular puede facilitar la resistencia al tratamiento. Esta técnica permite la construcción modular de plataformas de cultivo celular 3D adaptables que se pueden utilizar para cultivar células de glioblastoma derivadas de pacientes en un entorno que se aproxima mejor al cerebro nativo. Para comenzar, coloque moldes limpios y secos de caucho de silicona en cada pocillo de una placa de 12 pocillos tratada con cultivo de tejidos y use el extremo romo limpio de una punta de pipeta para adherir los moldes al fondo de la placa.
Después de verificar el sellado entre los moldes y los fondos de los pocillos, recoja las gliomasferas disociadas de un cultivo celular de glioblastoma por centrifugación y vuelva a suspender el pellet en un mililitro de enzima de disociación celular. Después de cinco minutos a temperatura ambiente, agite el tubo con golpecitos suaves y detenga la reacción enzimática con cuatro mililitros de medio completo. Centrifugar las células de nuevo y volver a suspender el pellet en un mililitro de medio completo fresco antes de colar las células a través de un filtro de 70 micrómetros.
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