Name: Cuantificación de hipopigmentación de la actividad In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Aprende a cuantificar la actividad hipopigmentante in vitro mediante ensayos de tirosinasa, contenido de melanina y tinción de células B16-F10. Estos métodos permiten evaluar rápidamente compuestos antimelanogénicos para cosmética funcional.

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Este trabajo fue apoyado por la Corea Instituto de planificación y evaluación de tecnología en alimentos, agricultura y silvicultura (IPET) a través del programa de desarrollo de tecnología de Agri-bioindustria, financiado por el Ministerio de agricultura, alimentación y asuntos rurales (MAFRA ) (116159-02-2-WT011) y escuela de Ciencias de la vida y biotecnología BK21 Plus, Universidad de Corea.

1. preparación del medio, compuestos y reactivos
<ol><li>Preparar el medio completo de crecimiento B16F10. Suplemento Dulbecco había modificado medio de águila (DMEM) con 10% suero bovino fetal (FBS) y 1% de penicilina/estreptomicina (plagas).<ol>
<li>Para hacer 500 mL de medio completo, mezclar 445 mL de medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) con 50 mL de SBF y 5 mL de plagas en una botella esterilizada de vidrio de 1 L. Después de mezclar suavemente, filtrar el medio a través de un filtro de 0.2 μm superior de la botella a un nuevo frasco de vidrio esterilizado y luego almacenar a 4 ° C. PRECAUCIÓN: Todas las técnicas de cultivo celular deben realizarse en gabinete usando una técnica aséptica para garantizar la esterilidad de seguridad.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparar el tampón de lisis: 20 mM Tris (hidroximetil) aminometano que contiene 0,1% Tritón X-100 (v/v) tampón a pH 7.5 (pH ajustado con HCl). Este buffer se puede utilizar por 3 meses cuando se almacena a temperatura ambiente (RT). Añadir inhibidores de la proteasa en el búfer de lisis justo antes del uso.</li>
	<li>Preparar el tampón de ensayo de inhibidor de la tirosinasa. Preparar 1 M NaH2PO4 (monobásico) y M 1 Na2HPO4 (dibásicos) soluciones. Mezclar 46,3 mL de Na2HPO4 y 53,7 mL de NaH2PO4 para preparar un volumen final de tampón de fosfato de sodio de 0,1 M (pH 6.8).<ol>
<li>Diluir la mezcla resultante a 1 L (volumen final) con H2O. ajustar el pH de la solución final a 6.8. Este buffer se puede utilizar para 1 mes cuando se almacena a 4 ° C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparar la solución de sustrato de tirosinasa: 0,1% 3, 4-dihidroxi-L-fenilalanina (DOPA, w/v) disuelto en tampón de ensayo de inhibidor de la tirosinasa (consulte paso 1.3). PRECAUCIÓN: Mantener en hielo mientras está en uso.</li>
	<li>Opcionalmente, preparar tirosinasa seta de 100 U/mL. Disolver el liofilizado tyrosinase seta en tampon de ensayo de inhibidor de la tirosinasa. Esta solución puede utilizarse durante 2 meses cuando se almacena a – 20 ° C. La actividad de la tirosinasa de champiñón como actividad de la tirosinasa celular se calcula en presencia de materiales de la célula. PRECAUCIÓN: La solución es alícuotas antes así de congelación repetida congelación y descongelación puede evitarse. Mantener la solución en el hielo mientras está en uso.</li>
	<li>Preparar la solución de NaOH N 1. Pesar 4 g de NaOH en un matraz aforado y disolver en agua destilada hasta completar 100 mL.</li>
	<li>Preparar la solución de fijación (formol al 10%). Diluir 27 mL de formaldehído al 37% con 73 mL de agua destilada. Preparar diariamente.</li>
	<li>Preparar solución stock de plata amoniacal. Preparar 5 mL de solución de nitrato de plata de 10% en un matraz aforado. Añadir gota a gota, solución de hidróxido de amonio hasta que el precipitado se haya disuelto completamente. Añada 200 μL de solución de nitrato de plata (10%). La solución será ligeramente nublada. PRECAUCIÓN: Evite el contacto y la inhalación. Utilizar una campana de humos.</li>
	<li>Preparar solución de trabajo de plata amoniacal. Diluir 2,5 mL de solución stock de plata amoniacal con 7,5 mL de agua destilada. Utilizar una vez y luego desechar. PRECAUCIÓN: Evite el contacto y la inhalación. Utilizar una campana de humos.</li>
	<li>Preparar el cloruro de oro 0.1%. Preparar 1 mL de cloruro de oro 10% y agregar 99 mL de agua destilada en un matraz aforado. Preparar diariamente.</li>
	<li>Preparar la solución salina buffer fosfato (PBS). Añadir 8 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,44 g de Na2HPO4 y 0,24 g de KH2PO4 en 800 mL de agua destilada. Ajustar el pH a 7.4 con HCl. diluir la mezcla resultante a 1 L (volumen final) con agua destilada.</li>
	<li>Preparar solución de tiosulfato de sodio 5% (p/v) disuelto en agua destilada.</li>
</ol>2. la cultura y el tratamiento de la célula
<ol><li>Utilizar células B16F10 comercialmente disponibles. Mantener las células B16F10 en medio completo. Mantener el frasco de cultivo celular en humidificado, 5% CO2 ambiente incubadora a 37 ° C.</li>
	<li>Preparar compuestos de prueba, inhibidor control positivo y las muestras control negativo.<ol>
<li>Disolver los compuestos de prueba en los disolventes apropiados. Disolver los compuestos solubles en agua en agua destilada doble. Disolver agua compuestos insolubles en el solvente orgánico adecuado, por ejemplo., DMSO.</li>
		<li>Aquí, uso arbutin disuelto en agua destilada doble (125 μg/mL) como control positivo para determinar la actividad de hipopigmentación en comparación con los compuestos de prueba o un control negativo. Como control negativo (control tratados con vehículo), utilice las soluciones o buffers utilizados en la muestra, por ejemplo, doble y agua destilada, DMSO, etanol.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Siembra y tratamiento de la célula<ol>
<li>Semilla B16F10 células 5 x 104 células/pozo en placas de cultivo de 24 pozos con medio completo e incuban en una incubadora de CO2 durante 24 h. Después de la incubación, aspirar el medio completo.</li>
		<li>Incubar las células con medio DMEM (sin FBS y 1% de penicilina/estreptomicina) que contiene compuestos de prueba, un control inhibidor o control negativo en un incubador de CO2 para las células 72 h. verificación cada 24 h bajo el microscopio. Después de este paso, vaya a los pasos 3-5 para experimentos adicionales. PRECAUCIÓN: La mezcla de la sustancia y medio DMEM debe filtrarse a través de un filtro de 0.2 μm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. medición de la actividad de la tirosinasa celular
<ol><li>Usando el método descrito en el paso 2, quite los medios de comunicación y enjuague las células dos veces con 300 μL de PBS frío.</li>
	<li>Coloque la placa de cultivo celular en hielo. Añadir 300 μL de tampón de lisis e incubar durante 5 minutos. A continuación recoger la célula lisada con un raspador celular y transferir el lisado celular a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL.</li>
	<li>Homogeneizar el lysate de la célula con un homogenizador celular a 14.500 rpm durante 2 s, 3 veces en el hielo para obtener tirosinasa intracelular. Uso del específico de la condición óptima para el homogeneizador.</li>
	<li>Centrifugar 10 min a 12.000 × g a 4 ° C y transferir el sobrenadante de células a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL. Mantenga en hielo mientras está en uso.</li>
	<li>Transferencia de 70 μL del sobrenadante a una microplaca de 96 pocillos transparente poliestireno.</li>
	<li>Añadir 140 μL de una solución que contiene sustrato de tirosinasa (DOPA) a una microplaca de 96 pocillos transparente poliestireno, agite suavemente e incubar por 2 h a 37 ° C.</li>
	<li>Opcional, añadir 70 μL de solución de tirosinasa de champiñón de 100 U/mL a cada pozo e incubar por 2 h a 37 ° C.</li>
	<li>Medir la actividad de la tirosinasa en una longitud de onda de 475 nm, utilizando el lector de microplacas.</li>
	<li>Normalizar la actividad de la tirosinasa a la concentración de proteína de cada muestra. Medir la concentración de proteína de cada muestra de un ensayo de Bradford.</li>
</ol>4. medir el contenido de melanina
<ol><li>Usando el método descrito en el paso 2, quite los medios de comunicación y enjuague las células dos veces con 300 μL de PBS frío.</li>
	<li>Coloque la placa de cultivo celular en hielo. Añadir 300 μL de tampón de lisis e incubar durante 5 minutos. A continuación recoger la célula lisada con un raspador celular y transferir el lisado celular a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mL.</li>
	<li>Centrifugar 10 min a 12.000 × g a 4 ° C.</li>
	<li>Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo y medir la concentración de proteína para la normalización. Medir la concentración de proteína de cada muestra de un ensayo de Bradford.</li>
	<li>Añadir 300 μL de 1 N NaOH a cada pellet e incubar a 60 ° C durante 1 h.</li>
	<li>Centrifugue la solución disuelta durante 10 min a 12.000 x g a 4 ° C.</li>
	<li>Transfiera 200 μL del sobrenadante a una microplaca de 96 pozos.</li>
	<li>Medir el contenido de melanina en una longitud de onda de 400 nm.</li>
	<li>Normalizar el contenido de melanina en la concentración de proteína.</li>
</ol>5. coloración de Fontana-Masson de
<ol><li>Coloración de Fontana-Masson<ol>
<li>Lavar las células dos veces con 300 μL de PBS frío.</li>
		<li>Añadir 200 μL de formalina al 10% a cada pocillo e incubar 1 h a 4 ° C.</li>
		<li>Enjuague con agua destilada.</li>
		<li>Añadir 200 μL de plata amoniacal con solución e incubar 1 h a 37 ° C o hasta que las células se convierten en color amarillo/marrón. PRECAUCIÓN: Coloque plata amoniacal recién mezclado de la solución de trabajo en un baño de 58 a 60° C y permitir suficiente tiempo para que la temperatura se equilibre.</li>
		<li>Retire plata amoniacal solución y enjuague con agua destilada.</li>
		<li>Retire el agua destilada. Añadir 200 μL de cloruro de oro 0.1% e incúbelos durante 2 min a TA.</li>
		<li>Retire la solución de cloruro de oro 0.1% y enjuagar con agua destilada.</li>
		<li>Retire el agua destilada. Añadir 200 μL de solución de tiosulfato de sodio (5%, p/v) e incubar durante 2 minutos.</li>
		<li>Retire la solución de tiosulfato de sodio y enjuagar con agua destilada.</li>
		<li>Retire el agua destilada. Añadir 200 μL de Nuclear Fast Red e incubar durante 5 minutos.</li>
		<li>Quite Nuclear Fast Red y enjuague con agua del grifo.</li>
		<li>Retire el agua del grifo y observar las células bajo un microscopio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloración de Fontana-Masson (umbral de análisis usando ImageJ) Nota: Se muestra un ejemplo del procedimiento de análisis de imagen utilizando el software ImageJ en los materiales complementarios.<ol>
<li>Abrir el programa ImageJ.</li>
		<li>Seleccione archivo | Abierto | Imagen de microscopio.</li>
		<li>Selecciona la imagen | Ajustar | Umbral de color.
</li>
		<li>Para medir el área manchado con Fontana-Masson, la barra de parámetro de brillo a cero y ajuste la barra de brillo para encontrar el punto en que se incluyen todas las células manchadas (negro o marrón oscuro).</li>
		<li>Seleccione analiza | Analizar las partículas. Marque la casilla de resumir en la ventana de partículas analizar y pulse OK. Obtener el resultado Resumen y pegar en una hoja de cálculo. Nota: La descripción de los parámetros de la caja resultante es la siguiente: Slice: El nombre de cada imagen Cuenta: Número de células Superficie total: Superficie Total de células contadas Tamaño promedio: Área/número Total % Área: manchado área área Total × 100%; área total se calcula automáticamente.</li>
		<li>Calcular el correspondiente área manchada con melanina utilizando el valor de superficie Total. Melanina relativa teñido área (%) = valor de la superficie celular de la superficie total de la muestra/media prueba de control × 100, es decir,
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen ninguna revelación al informe.

Se han presentado protocolos para la evaluación de la actividad de hipopigmentación de prueba compuestos con melanocitos cultivados. Resultados representativos mostraron el efecto de hipopigmentación de la arbutina, un inhibidor de la tirosinasa que inhibió el contenido de melanina de celular y actividad de tirosinasa. Estos métodos son ampliamente utilizados en la investigación de actividad anti-melanogenic. Mediante estos ensayos, que con éxito hemos identificado varios compuestos bioactivos que tienen efectos inhibito...

Melanina juega un papel fundamental en la fisiología, patología y toxicología de los varios órganos incluyendo la piel, ojos y cerebro1. Principales funciones de la melanina son efectos foto-proyección y bioquímicos. Melanina absorbe la luz infrarroja y visible, así como la radiación ultravioleta (UV), con tasas de aumento de la absorción en longitudes de onda más cortas de la luz; así, melanina protege los tejidos contra daños causados por la luz visible o UV radiación2. Melanina es un antioxidante y tiene una afinidad por los metales y otras sustancias químicas tóxicas; por lo tanto, puede proteger los tejidos del estrés oxidativo y química3. Sin embargo, la producción excesiva de melanina provoca problemas dermatológicos.
La cantidad y calidad de melanina en la piel y el iris son los más importantes determinantes del color del iris y la piel. Los individuos pueden tener preferencias de color de piel diferente; algunos favorecen la piel bronceada, mientras que otros favorecen colores de piel más claros. Dependiendo de estos perfiles de consumidor, hipopigmentación cosmética se han desarrollado para satisfacer mercados individuales de piel favorece colores4. En consecuencia, estudios de actividad hipopigmentación y anti-melanogenic son importantes científicamente y prácticamente.
Melanogénesis es el complejo proceso de biosíntesis de la melanina mediante una serie de reacciones químicas enzimáticas y espontáneas en los melanocitos. Un melanocito es rodeado por aproximadamente 36 queratinocitos y melanocitos son las fábricas de la síntesis de melanina que distribuyen su producto a los queratinocitos vecinos. En la piel, la melanina producida y almacenada en el compartimiento melanosomal de melanocitos es transportada a vecinos queratinocitos en las epidermis a través de las dendritas.
L-tirosina sirve como sustrato inicial para la melanogénesis y la tirosinasa enzima cataliza dos reacciones consecutivas que transforman la L-tirosina en 3, 4-dopa (DOPA) y luego en dopaquinona. Estas reacciones son el paso tarifa-limitador en la melanogénesis5,6. Por consiguiente, hipopigmentación actividad primero puede medirse determinando la actividad de la tirosinasa celular directamente. Para ello, extractos de melanocitos que contiene tirosinasa se incuban con la DOPA y la dopaquinona producida en las muestras se puede medir por espectrofotometría a 475 nm. Los valores se normalizan por las concentraciones de proteína de las muestras y sustancias con hipopigmentación actividad dan como resultado menos formación de dopaquinona en comparación con controles.
En segundo lugar, actividad de hipopigmentación puede cuantificarse midiendo directamente la melanina en los melanocitos cultivados. Después de tratar las células con el material de prueba, la melanina se extrae en condiciones alcalinas y el contenido de melanina se cuantifica por espectrofotometría a 400 nm. Un agente de la hipopigmentación se traducirá en un menor contenido de melanina que la de controles7.
Por último, la actividad de hipopigmentación puede cuantificarse por coloración de Fontana-Masson melanina y análisis de imagen posterior. En la tinción de Fontana-Masson, gránulos de la melanina reducen nitrato de amoníaco-plata en un visible estado metálico negro y las áreas negras de las células en los imágenes microscópicas representan la cantidad de melanina.
Un agente de hipopigmentación generalmente da resultados consistentes y comparables con estos tres métodos, que confirma que la actividad de la sustancia es válida. Alternativamente, puede ser útil medir la expresión de genes clave y proteínas en la melanogénesis en respuesta a una sustancia de prueba para examinar la actividad de hipopigmentación. Además de tirosinasa, proteínas relacionadas con la tirosinasa (TRP-1) y dopachrome tautomerase (TRP-2) son enzimas críticas en la melanogénesis8. El factor de transcripción factor transcripción asociada a microftalmia (MITF) es un regulador principal en la melanogénesis y cuantificación de sus niveles de expresión del gen de la proteína o un análisis de la actividad de promotor puede utilizarse también para evaluar actividad de hipopigmentación.

<table><tbody><tr><td>3,4-Dihidroxi-l-fenilalanina</td><td>Sigma</td><td>D9628</td><td></td></tr><tr><td>Solución de hidróxido de amonio</td><td>Sigma</td><td>#320145</td><td></td></tr><tr><td>Arbutina</td><td>Fluka</td><td>#10960</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30243.01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>HyClone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Yakuri Productos químicos puros</td><td>#16223</td><td>37%</td></tr><tr><td>Cloruro de oro</td><td>American MasterTech</td><td>AHG0226</td><td>0.10%</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Samchun químico</td><td>H0255</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Bio básico Canadá Inc.</td><td>PB0440</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>#60218</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>J.T.Baker</td><td>#3817-01</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Duksan productos químicos puros</td><td>#81</td><td></td></tr><tr><td></td><td>NaOH Sigma</td><td>655104</td><td></td></tr><tr><td>Rojo rápido nuclear</td><td>Merck</td><td>100121</td><td>Rojo rápido nuclear 0.1% en aluminio al 5% sulfato.</td></tr><tr><td>Solución de penicilina y estreptomicina</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>nitrato de plata</td><td>Duksan Pure Chemicals</td><td>#900</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sodio dibásico (Na2HPO4)</td><td>J.T. Baker</td><td>#3817-01</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sodio monobásico (Na2HPO4)</td><td>Sigma</td><td>S5011</td><td></td></tr><tr><td>Tiosulfato de sodio pentahidratado</td><td>Duksan Pure Chemicals</td><td>#2163</td><td></td></tr><tr><td>Tris(hidroximetil)aminometano</td><td>Bio Basic Canada</td><td>TB0196</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Union Carbide</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tirosinasa del hongo</td><td>Sigma</td><td>T3824</td><td>25 KU</td></tr></tbody></table>

cuantificación de hipopigmentación de la actividad in vitro

Quantification of Hypopigmentation Activity In Vitro

Este estudio presenta los métodos de laboratorio para la cuantificación de hipopigmentación de la actividad in vitro. Melanina, el pigmento principal en los melanocitos, se sintetiza en respuesta a múltiples factores ambientales y celulares. Melanina, protege las células de la piel contra el daño ULTRAVIOLETA, pero también tiene funciones biofísicas y bioquímicas. Producción excesiva o acumulación de melanina en los melanocitos puede causar problemas dermatológicos, tales como pecas, manchas, melasma y moles. Por lo tanto, el control de la melanogénesis con hipopigmentación agentes es importante en personas con necesidades clínicas o cosméticas. Melanina se sintetiza principalmente en los melanosomas de melanocitos en un proceso bioquímico complejo llamado melanogénesis, influenciado por extrínsecos y factores intrínsecos, como las hormonas, inflamación, edad y exposición a la luz ultravioleta. Se describen tres métodos para determinar la actividad de hipopigmentación de productos químicos o sustancias naturales en los melanocitos: medición de la actividad de la tirosinasa 1) celular y contenido de melanina 2) y melanina celular 3) tinción y cuantificación con imagen Análisis.
En la melanogénesis, tirosinasa cataliza el paso de limitación de velocidad que convierte la L-tirosina en 3, 4-dopa (l-dopa) y luego en dopaquinona. Por lo tanto, la inhibición de la tirosinasa es un mecanismo primario de hipopigmentación. En los melanocitos cultivados, actividad de la tirosinasa puede cuantificarse por la adición de l-dopa como sustrato y dopaquinona producción de medición por espectrofotometría. Melanogénesis puede medirse también cuantificando el contenido de melanina. La fracción celular que contiene melanina es extraída con NaOH y melanina se cuantifica espectrofotométricamente. Finalmente, el contenido de melanina puede ser cuantificado por análisis de imagen después de la coloración de Fontana-Masson de melanina. Aunque los resultados de estos ensayos in vitro no siempre se pueden reproducir en la piel humana, estos métodos son ampliamente utilizados en la investigación de la melanogénesis, especialmente como el paso inicial para identificar la potencial actividad de hipopigmentación. Estos métodos pueden utilizarse también para evaluar la diferenciación, crecimiento y actividad de melanocitos. Resultados consistentes con los tres diferentes métodos de aseguran la validez de los efectos.

Resultados representativos para la actividad de hipopigmentación de la arbutina, un anti-melanogenic compuesto, en B16F10 melanocitos se muestran a continuación. Figura 1A muestra que arbutin suprimió significativamente la actividad de la tirosinasa celular en comparación con el control tratados con vehículo. Del mismo modo, el contenido de melanina de las células estimuladas con arbutin se redujo significativamente en comparación con los controles (<strong c...

Se describen tres métodos experimentales para la evaluación de la actividad de hipopigmentación de químicos in vitro: cuantificación del contenido 2) melanina y actividad tirosinasa 1) celular y 3) medición de la melanina por análisis de imagen y coloración celular melanina.

Cuantificación de hipopigmentación de la actividad In Vitro

This study presents laboratory methods for the quantification of hypopigmentation activity in vitro. Melanin, the major pigment in melanocytes, is ...

Este método puede ser útil en el desarrollo de cosméticos funcionales y agentes de la piel con actividades anti-melanogénicas. Está ahí para realizar y el resultado se puede obtener rápidamente. Además, este método puede ser útil para los investigadores, que quieren identificar o investigar los efectos o los compuestos o investigar las actividades antimelanogénicas o promelanogénicas.Para medir la actividad tirosinasa comenzar por la siembra de melanicidas B16-F10 a cinco veces 10 a las cuartas células por pozo de una concentración de placa de 24 pozos en medio completo durante 24 horas en una incubadora de cultivo celular. Al día siguiente, reemplazar el sobrenadante en cada pozo con DMEM complementado con compuesto de prueba recién preparado y control de inhibidores o un control negativo y devolver la placa a la incubadora durante otras 72 horas. Al final del tratamiento enjuague los pozos dos veces con 300 microlitros de pbs fríos por pozo y coloque la placa sobre hielo.A continuación, agregue 300 microlitros de búfer de lelisis a cada pozo usando un rascador de celda para recoger las lesates celulares después de cinco minutos. Transfiera las suspensiones de partículas celulares

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Se describe un método para medir los marcadores bioquímicos de la hipoxia-isquemia neonatal. El enfoque utiliza cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y cromatografía de gases espectrometría de masas (GC / MS).

La medición bioquímica de la hipoxia neonatal

La terapia fotodinámica (TFD) es un método no invasivo y no quirúrgico para el tratamiento del cáncer de pulmón. Los fotosensibilizadores se acumulan selectivamente en el tejido tumoral y provocan la muerte de las células tumorales en presencia de oxígeno y la longitud de onda adecuada de la luz. En este video de protocolo, se utiliza el método basado en PDT para evaluar el potencial fototóxico de un potencial fotosensibilizador en células de cáncer de pulmón.

Ensayo de fototoxicidad in vitro: un método basado en PDT para evaluar el potencial fototóxico de un fotosensibilizador en células de cáncer de pulmón

Este video describe un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en un modelo de ratón humanizado, un modelo de ratón que imita la piel humana. Determinamos la dosis eritematosa mínima (MED) de radiación UV que puede causar eritema o edema en la piel. El método puede ayudar a averiguar la eficacia de los fármacos utilizados para reducir la sensibilidad a los rayos UV.

Ensayo de dosis mínima eritematosa: un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en modelos de ratón

Melanina epidérmica es inducida por la aplicación tópica de forskolina en un modelo murino de lo humano-UV sensible de piel clara. La manipulación terapéutica de los niveles de AMPc en la piel y el oscurecimiento de la epidermis a proteger firmemente contra la inflamación mediado por UV (quemadura solar) según lo medido por la dosis eritematosa mínima (MED) de ensayo.

La inducción farmacológica de la melanina epidérmica y Protección contra las quemaduras solares en un modelo de ratón humanizado

Este documento informa que la adición de Y-27632 al medio TIVA puede aumentar significativamente el rendimiento de los melanocitos de los tejidos cutáneos adultos.

Y-27632 enriquece el rendimiento de los melanocitos humanos de los tejidos adultos de la piel

Este protocolo presenta un conjunto de experimentos adoptados para la evaluación de péptidos anticancerígenos fotoconmutables, que pueden ser utilizados en el cribado preclínico de dichos compuestos. Esto incluye la evaluación de citotoxicidad en cultivos celulares 2D y 3D, la evaluación de la eficiencia de fotoisomerización ex vivo (tejido modelo) y la eficacia in vivo .

Evaluación in vitro e in vivo de compuestos biológicamente activos fotocontrolados: posibles candidatos a fármacos para la fotofarmacología del cáncer

Este protocolo describe un modelo de acumulación de lipofuscina en cultivos epiteliales pigmentarios (EPR) humanos altamente diferenciados y polarizados y un ensayo de fagocitosis de segmento externo (SG) mejorado para detectar la capacidad total de consumo/degradación de SG del EPR. Estos métodos superan las limitaciones de los modelos anteriores de lipofuscina y los ensayos clásicos de fagocitosis del segmento externo de persecución de pulsos.

Modelos mejorados de lipofuscina y cuantificación de la capacidad de fagocitosis del segmento externo en cultivos epiteliales de pigmento retiniano humano altamente polarizados

Las enfermedades oculares degenerativas que afectan la capa del epitelio pigmentario de la retina del ojo tienen orígenes monogénicos y poligénicos. Se han desarrollado varios modelos de enfermedades y una aplicación de software, LipidUNet, para estudiar los mecanismos de la enfermedad, así como posibles intervenciones terapéuticas.

LipidUNet-Machine Learning Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

Este estudio describe las técnicas biofísicas, bioquímicas y moleculares para caracterizar la actividad chaperona de Escherichia coli HdeB en condiciones de pH ácido. Estos métodos se han aplicado con éxito para otros chaperones ácido-protectores tales como HdeA y puede ser modificado para trabajar para otros chaperones y condiciones de estrés.

Detección de la actividad dependiente del pH de<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Acompañante HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; y<em&gt; En Vivo</em

Aquí presentamos un método para medir directamente el ARN de transferencia carga niveles de purificada de Escherichia coli RNA como una forma de comparar niveles relativos de ARN de transferencia, o cualquier otro RNA corto, a través de diferentes muestras basadas en la adición de espiga en células expresan un gen de referencia.

Cuantificación de la abundancia y la carga de los niveles de ARN de transferencia en Escherichia coli

Aprende a cuantificar la actividad hipopigmentante in vitro mediante ensayos de tirosinasa, contenido de melanina y tinción de células B16-F10. Estos métodos permiten evaluar rápidamente compuestos antimelanogénicos para cosmética funcional.

Cuantificación de hipopigmentación de la actividad In Vitro

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