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DOI: 10.3791/58244-v
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Aquí, presentamos los protocolos para identificar inmunomoduladores 1) virus-codificado que promueven la replicación de arbovirus y host 2) eucariotas factores que limitan la replicación de arbovirus. Estos métodos basados en fluorescencia y luminiscencia permiten a los investigadores obtener rápidamente lecturas cuantitativas de la replicación de arbovirus en análisis simplistas con proporciones bajas de señal a ruido.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la inmunología viral, como qué factores del huésped restringen la replicación del arbovirus y, a su vez, qué proteínas de evasión inmunitaria codificadas por el virus superan estos mecanismos de restricción del huésped. La principal ventaja de esta técnica es que permite utilizar ensayos simplistas de luminiscencia y espacio fluorescente para definir las condiciones celulares que permiten que los arbovirus se repliquen en una infección que de otro modo sería abortiva en células de insectos lepidópteros. Debido a que la replicación de fondo de los arbovirus en las células de lepidópteros es relativamente sencilla, resulta relativamente sencillo detectar las condiciones que permiten la replicación de los arbovirus.
Para empezar, mantenga las células LD652 en placas tratadas con cultivo de tejidos de 10 centímetros y pase las células cuando alcancen el 80% de confluencia. Pipetee el medio sobre la monocapa celular repetidamente para desalojar las células, luego diluya la muestra en el medio de crecimiento hasta una densidad aproximada de 100 mil células por mililitro. Después de esto, transfiera un mililitro del cultivo diluido a cada pocillo de una placa de 24 pocillos.
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