El método flotante para tejido parafina-encajado de seccionamiento y corte

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo morfológico, como el corte de parafina. La principal ventaja de esta técnica es que culmina el corte y el procedimiento de plegado y evita el proceso de transferencia que requiere el método convencional. Para comenzar, reúna todas las piezas prefabricadas en una campana extractora.

Use cloroformo para combinar las siete tablas acrílicas, como se muestra aquí. El producto final será un tanque equipado con un canal de sección y un baño de agua. Instale el elemento calefactor eléctrico tubular a través del orificio en la placa acrílica número dos.

Con un taladro eléctrico, haga un pequeño agujero en la placa acrílica número siete e instale un termostato digital en el tanque, asegurándose de que esté al menos un centímetro por debajo del nivel de la superficie del agua prevista, que se indica con el punto negro en el tanque. Ajuste el voltaje para que esté por debajo de 24 voltios antes de encender el equipo. Retire la bandeja de residuos de la sección del micrótomo.

A continuación, utilice un sellador de silicona neutro para unir el canal de las secciones al soporte de la cuchilla del micrótomo, asegurándose de que no quede ningún sellador por encima de la parte superior de la hoja. Deje que la configuración se seque durante la noche para que el cloroformo y el sellador de silicona neutro tengan tiempo de solidificarse. Al día siguiente, instale la cuchilla en el soporte de la cuchilla.

Agregue agua al baño de agua, asegurándose de que la superficie del agua toque la parte superior de la cuchilla. Después de realizar el corte de parafina convencional, encienda el equipo para comenzar un corte de parafina mejorado. Utilice el interruptor de detección de temperatura para abrir el calentador.

Ajuste la temperatura objetivo entre 38 grados centígrados y 40 grados centígrados durante una hora para calentar el agua. Utilice un cuchillo para modificar el bloque de parafina adquirido por la inclusión de parafina. A continuación, coloque el bloque en la abrazadera del casete del micrótomo y bloquéelo.

Corta las secciones más gruesas para acercarte rápidamente a la muestra. Ajuste a un grosor de sección adecuado para las muestras. Al girar el volante, las secciones se cargarán automáticamente en secciones, canal y baño.

A continuación, corte el espécimen en un trazo de corte lento y uniforme. Guíe las secciones hacia la cámara del baño para que floten en una línea. Si la sección de la cabeza se adhiere a la pared de la cámara, use una guía de cepillo para mantenerla flotando.

Después de que las secciones se desplieguen por completo en el baño de agua, use pinzas para separar varias y luego recójalas en un portaobjetos de microscopio. Transfiera los portaobjetos a un horno a 42 grados centígrados para que se sequen durante la noche. Los portaobjetos se pueden almacenar a temperatura ambiente indefinidamente hasta que estén listos para analizar.

Cuando esté listo para analizar, utilice la tinción con hematoxilina-eosina para evaluar las secciones utilizando el método mejorado. En este estudio, se utiliza un método mejorado para preparar secciones de parafina para el tejido del hipocampo de ratones adultos, los riñones de ratones adultos, los cerebros de ratones embrionarios y los ojos de pez cebra. Como se muestra aquí, el nuevo método evita la pérdida de secciones y aumenta la proporción de secciones intactas en cada tipo de tejido examinado.

Al realizar el corte de series completas, se observa que este método acelera la velocidad de corte de parafina en todas las muestras analizadas. En otras palabras, este método proporciona un corte de parafina de mayor calidad en menos tiempo que el método convencional. A continuación, se observan secciones en serie de la retina óptica del pez cebra mediante tinción con hematoxilina-eosina.

Se considera que las secciones recolectadas con el método mejorado tienen una mejor integridad que las recolectadas con el método convencional de corte con parafina. Si bien no hay diferencias significativas en la calidad de la mayoría de las secciones cosechadas al comparar estos dos métodos, se observa que algunas secciones cosechadas con el método convencional tienen una calidad relativamente baja. No olvide que trabajar con cloroformo puede ser extremadamente peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como la campana extractora al realizar este procedimiento.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe agregar agua con cuidado y evitar el llenado excesivo.