Name: Ultrasonido de alta frecuencia para el análisis del desarrollo Fetal y placentario en Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Aprende a usar ultrasonido de alta frecuencia para analizar el desarrollo fetal y placentario en ratones. Esta técnica no invasiva permite monitorear el flujo sanguíneo materno y fetal durante toda la gestación.

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Muchas gracias a la compañía de instrumentos de proyección de imagen (especialmente a Magdalena Steiner, Katrin Suppelt y Sandra Meyer) su apoyo rápido y agradable y por responder todas nuestras preguntas sobre el sistema de proyección de imagen y su uso puntualmente y completamente. Agradecemos al Prof. Hans-Reimer Rodewald y Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Alemania) para proporcionar la Colonia Cpa3. Además, agradecemos a Stefanie Langwisch, que estuvo a cargo de las colonias de ratón y que generan las imágenes en la figura 1.
El trabajo y el sistema de proyección de imagen fueron financiados por subvenciones de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) a A.C.Z. (ZE526/6-1 y 6/AZ526-2) que eran proyectos encajados la DFG prioridad programa 1394 "las células de mástil en salud y enfermedad."

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."
1. experimental procedimiento
<ol><li>Mate de 6 a 8 semanas de edad hembra MC-deficiente C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) ratones y MC-suficiente C57BL/6J-Cpa3+/+ (controles de Colonia; Cpa3+/+) con ratones BALB/c machos.</li>
	<li>Definir el día de gestación (gd) 0 después de la confirmación del tapón vaginal y tratar a las hembras inmediatamente después de la confirmación de enchufe. Nota: Un enchufe es el esperma del macho en el orificio vaginal de la hembra.<ol>
<li>Inyecte 250 μl de PBS por vía intraperitoneal en control Cpa3+/+ hembras.</li>
		<li>Inyecte 250 μl de anti-CD122 (0.25 mg) por vía intraperitoneal en MC-deficiente Cpa3Cre /+ hembras. Nota: Una inyección de 0,25 mg de anti-CD122 agota NKs periféricas y uNKs en MC-deficiente Cpa3Cre /+ hembras como se describió anteriormente22.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Espere hasta gd5. Nota: En gd5, existe la posibilidad más temprana para el análisis de la implantación.<ol>
<li>Proceder con los pasos 2-5 para el análisis de ultrasonido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Realizar la proyección de imagen de ultrasonido en gd5, 8, 10, 12 y 14.</li>
</ol>2. preparación del sistema de ultrasonido
<ol><li>Encienda el sistema (figura 1A; alimentación principal en la espalda y el equipo espera en el sitio de izquierda), la plataforma de calefacción (figura 1B; en el teclado de control) y el más caliente del gel (figura 1). Nota: Gel del ultrasonido necesita calentamiento aproximadamente 0,5 hora.</li>
	<li>Asegurar que la unidad de isoflurano es llenando suficientemente (figura 1).</li>
	<li>Abrir un Nuevo estudio o una Serie nueva en un estudio actual en el navegador. Rellene la información requerida (propietario, nombre del estudio, nombre de la serie, datos animal) en la ventana de Información de estudio . Haga clic en Aceptar.</li>
	<li>Después de hacer clic en Aceptar, asegúrese de que aparece la ventana de proyección de imagen de modo B y la proyección de imagen en modo B comienza automáticamente.</li>
</ol>3. manejo del ratón
<ol><li>Anestesia del ratón<ol>
<li>Coloque el ratón en el cuadro de precipitación (Figura 1E), cerrar el cuadro de, abra el tubo de isoflurano al cuadro de precipitación y encienda el isoflurano (concentración 3.5%).</li>
		<li>Cuando el ratón está anestesiado, inferior (a 1.5% de concentración) y redirigir el flujo de isoflurano abriendo el tubo de la dirección de la plataforma de calefacción y cerrar el flujo de la caja de precipitación. Nota: Para alcanzar suficiente anestesia, esperar un adicional 10 s después de que el ratón ya no se está moviendo.</li>
		<li>Transferir el ratón rápidamente de la caja a la plataforma de calefacción (Figura 1F) en posición dorsal y Coloque suavemente su nariz en el tubo de la nariz de anestesia localizado en la parte superior de la plataforma.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fijación, depilación y preparación del ratón para medir la<ol>
<li>Coloque la protección de los ojos crema en cada ojo del ratón para evitar la resequedad en los ojos.</li>
		<li>Coloque una gota de gel de electrodos en cada una de las cuatro áreas de cobre en la plataforma de calefacción (Figura 1F).</li>
		<li>Toque las patas con cinta quirúrgica en las áreas de cubierta de gel de electrodo de la plataforma de calefacción.</li>
		<li>Revise ECG [valor óptimo = 450-550 golpes/minuto (BPM)] y fisiología respiratoria en todo momento. Nota: Mediante el uso de una sonda rectal, la medición de la temperatura corporal es posible, pero no es necesario.</li>
		<li>Lugar depilatorio crema en el abdomen del ratón, frote la crema con un bastoncillo de algodón y espere alrededor de 1 minuto retirar la crema con una compresa empapada en agua. Repita este paso si no todos los vellos se han ido.</li>
		<li>Aplicar el ultrasonido con gel sobre la piel depilada.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. mediciones y adquisición de imágenes y vídeos
<ol><li>Mantener el transductor (figura 1) en la mano o pinza en el dispositivo de sujeción (figura 1 H; sosteniendo el dispositivo se recomienda).</li>
	<li>Identificar la vejiga con el transductor y utilizarlo como punto de referencia. Mover el transductor a los sitios de izquierda y derecho del abdomen para implantaciones de rastro.</li>
	<li>B-modo de visualización de estructuras anatómicas en la imagen en escala de grises 2D<ol>
<li>Mover el transductor o tabla de plataforma donde el ratón está ocupado hasta que la primera implantación es visible en la pantalla a su tamaño más grande de la calefacción.<ol>
<li>Seleccionar Imagen etiqueta y escriba un nombre o Marco Store (almacenamiento sin nombre) para almacenar los marcos individuales, o Cine tienda para almacenar un cineloop para medidas de implantación todo.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Mover el transductor o tabla para traer la placenta a una posición donde es visible el flujo sanguíneo en la UmA. Almacenar un solo cuadro o cineloop (ver paso 4.3.1.1) para mediciones de placentarias. Nota: Las mediciones placentarias son posibles desde gd10 adelante.</li>
		<li>Continuar con todos los implantes utilizando el mismo método.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo doppler color para visualizar y determinar la dirección del flujo de sangre<ol>
<li>Presione el botón de Color .</li>
		<li>Mover el cuadro de Color (en esta área, la señal es visible) en la posición deseada usando el trackball. Si es necesario, cambiar el tamaño de la caja pulsando Actualizar y mover el trackball (a la derecha/hacia arriba = mayor; para el lado-abajo izquierdo = más pequeño). Cuando la caja tiene el tamaño correcto, pulse seleccionar.</li>
		<li>Guardar marcos individuales o cineloops como se describe en el paso 4.3.1.1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo de doppler de pulso (PW) para cuantificar el flujo de sangre a través de los vasos de la Arteria uterina (de la arteria uterina, UA) y UmA<ol>
<li>Ubicar la región de interés en la adquisición de doppler color. Nota: La UA se encuentra caudal a la vejiga y la UmA se encuentra entre el feto y la placenta.</li>
		<li>Prensa PWy una línea discontinua aparece. Desplazar esta línea vascular de interés y ajustar el ángulo de la línea utilizando el botón "Ángulo Doppler" en consonancia con el flujo de sangre. Pulse Actualizar. Nota: El ángulo entre la dirección del flujo sanguíneo y el transductor debe ser coherente en todos los animales, especialmente cuando se utilizan ángulos de más de 60° (aquí, 70° para UAs y 45° para UmAs fueron utilizados).</li>
		<li>Almacenar un cineloop de las líneas de doppler que aparece en la ventana de adquisición doppler PW.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. revisión y acabado de adquisición de datos y una serie de ahorro
<ol><li>Para revisar los datos, pulse estudio gestión. Desplácese hasta la imagen en miniatura de interés y haga doble clic en actualización.</li>
	<li>Comprimir primero Gestión de estudio cerca de la ventana del navegador para terminar la adquisición de datos y guardar una serie grabada. Nota: Después de cerrar una serie, no es posible almacenar marcos o cineloops en esta serie ya.</li>
</ol>6. manejo de adquisición de datos del ratón
<ol><li>Retirar el gel de los animales anestesiados con la ayuda de compresas secas.</li>
	<li>Retire cuidadosamente la cinta quirúrgica de las patas.</li>
	<li>Cierre el tubo de isoflurano (concentración 0%).</li>
	<li>Proceder con el siguiente análisis de ultrasonido en gd5, 8, 10 y 12.<ol>
<li>Coloque el animal solo en una jaula para un mínimo de 5 minutos así que tiene tiempo para despertar y orientar.</li>
		<li>Vuelva a colocar el ratón en la jaula original. Nota: No apague el isoflurano antes de retirar el gel y el esparadrapo, como ratones se despiertan muy rápidamente (alrededor de 20 s) después de apagar el isoflurano.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Proceder con el siguiente análisis de ultrasonido en gd14.<ol>
<li>Sacrificar a la hembra antes que despierte por dislocación cervical. Abrir el animal, extirpar el útero, separar los fetos y placentas y medir el peso fetal y placentario.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. copiar e importar los datos
<ol><li>Marque una o más series haciendo clic en Exportar a y seleccione el espacio de almacenamiento para copiar datos en un disco duro.</li>
	<li>Abra el software en un ordenador y haga clic en Copiar desde y seleccione la serie de estudios desde el disco duro para importar una serie de estudios en el software.</li>
	<li>Analizar los datos con el software.</li>
</ol>

<ol><li>Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0032-1312759">Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren?</a> Ultraschall in der Medizin. 33 (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).</li>
<li>Jones, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echolocation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Echolocation.</a> Current Biology. 15 (13), R484-R488 (2005).</li>
<li>Simmons, J. A. <a target="_blank" href="https://nyaspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/j.1749-6632.1971.tb13095.x">The sonar receiver of the bat.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).</li>
<li>Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-dependent+modulation+of+ultrasonic+vocalizations+in+house+mice+%28Mus+musculus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus).</a> Public Library of Science ONE. 12 (12), e0188647(2017).</li>
<li>Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Socio-Affective+Communication+in+Rats+through+Playback+of+Ultrasonic+Vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations.</a> Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).</li>
<li>Hasiniaina, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency%2Fultrasonic+communication+in+a+critically+endangered+nocturnal+primate%2C+Claire%27s+mouse+lemur+%28Microcebus+mamiratra%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra).</a> American Journal of Primatology. , e22866(2018).</li>
<li>Yeo, L., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+and+power+Doppler+combined+with+Fetal+Intelligent+Navigation+Echocardiography+%28FINE%29+to+evaluate+the+fetal+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Obstetrics+%26+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart.</a> Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50 (4), 476-491 (2017).</li>
<li>Teichholz, L. E. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0033062075800193">Echocardiography in valvular heart disease.</a> Progress in Cardiovascular Diseases. 17 (4), 283-302 (1975).</li>
<li>Zechner, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.springerlink.com/index/570nn04566572457.pdf">Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin.</a> Der Anaesthesist. 61 (7), 608-617 (2012).</li>
<li>Blank, W., Schuler, A. <a target="_blank" href="https://econtent.hogrefe.com/doi/full/10.1024/1661-8157/a002703">Sonografie der Schilddrüse - Update 2017.</a> Praxis. 106 (12), 631-640 (2017).</li>
<li>Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonography+of+the+Kidney%3A+A+Pictorial+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review.</a> Diagnostics. 6 (1), Basel, Switzerland. (2015).</li>
<li>Older, R. A., Watson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+anatomy+of+the+normal+male+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract.</a> Journal of Clinical Ultrasound. 24 (8), 389-404 (1996).</li>
<li>Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transrectal+real-time+ultrasound+scanning+of+the+cow+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract.</a> Theriogenology. 21 (3), 485-494 (1984).</li>
<li>Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+gall+bladder+by+endoscopic+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10 (1), 10-15 (2018).</li>
<li>Weskott, H. -P. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00117-011-2254-3">Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome.</a> Der Radiologe. 52 (4), 347-359 (2012).</li>
<li>Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Absolute+Blood+Perfusion+in+Mice+Using+Dynamic+Contrast-Enhanced+Ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound.</a> Ultrasound in Medicine & Biology. 43 (8), 1628-1638 (2017).</li>
<li>Quaia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+tissue+perfusion+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22European+Radiology%22%5BJournal%5D)">Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound.</a> European Radiology. 21 (3), 604-615 (2011).</li>
<li>Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+hemodynamic+wall+shear+stresses+in+human+umbilical+vessels+from+normal+and+intrauterine+growth+restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. , (2018).</li>
<li>Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+growth+restriction+is+associated+with+prioritization+of+umbilical+blood+flow+to+the+left+hepatic+lobe+at+the+expense+of+the+right+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe.</a> Pediatric Research. 66 (1), 113-117 (2009).</li>
<li>Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+in+pregnancies+complicated+by+intrauterine+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 69 (6), 895-902 (1987).</li>
<li>Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+velocity+waveforms+as+predictors+of+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 70 (1), 7-10 (1987).</li>
<li>Meyer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chymase-producing+cells+of+the+innate+immune+system+are+required+for+decidual+vascular+remodeling+and+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth.</a> Scientific Reports. 7, 45106(2017).</li>
<li>Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Ablation+of+Uterine+Natural+Killer+Cells+and+Uterine+Mast+Cells+in+Mice+Leads+to+Poor+Vascularization+and+Abnormal+Doppler+Measurements+That+Compromise+Fetal+Well-being%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1913(2017).</li>
<li>Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+color+Doppler+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic color Doppler imaging.</a> Interface Focus. 1 (4), 490-502 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Utilizando nuestro sistema de ultrasonido, demostró restricción del crecimiento fetal en las madres MC NK-deficientes de gd10 en. Además, observamos en gd10 y 12, reducido tamaño placentario y gd14 la ausencia o reversión del flujo diastólico final en las uma de algunos fetos de ratones uMC/uNK-deficientes. Este signo de pobre vascularización se asoció con un índice significativo de la resistencia de las arterias que indica restricción del crecimiento intrauterino. Resultados confirman el papel importante de uMCs y uNKs ...

El ultrasonido es ondas sonoras con frecuencias por encima del rango audible del oído humano, superior a 20 kHz1. Animales como murciélagos, Gales, delfines2,3, ratones4,5de ratas y ratón lémures6 todos utilizar ultrasonido para orientación o comunicación. Los seres humanos toman ventaja del ultrasonido para varias aplicaciones técnicas y médicas. Un dispositivo de ultrasonido es capaz de crear la onda de sonido y distribuir y representar la señal. Si el ultrasonido choca contra un obstáculo, el sonido es reflejado, absorbido o puede ir a través de él. La aplicación de la ecografía como un método de proyección de imagen, llamado sonografía, se utiliza para el análisis de tejidos orgánicos en humana o veterinaria como el corazón (ecocardiografía)7,8, pulmón9,10 de la glándula tiroides , riñones11y12,de las vías urinaria y reproductiva13; detección de cálculos biliares tumores de14 y15; y la evaluación de la perfusión de los vasos sanguíneos u órganos16,17. El ultrasonido es un método estándar en el cuidado prenatal durante el embarazo, y discapacidades del desarrollo fetales o deterioros se pueden reconocer temprano. Específicamente, el crecimiento de un feto se controla estrechamente a intervalos regulares para reconocer un posible retraso del crecimiento intrauterino. Finalmente, el flujo sanguíneo fetal puede controlarse, como esto puede señalar restricciones de crecimiento18,19,20,21.
Una ventaja importante de proyección de imagen de ultrasonido en comparación con otros métodos como la radiografía es inocuidad del sonido de los tejidos a analizar. Este método fácil y rápido es no invasivo, indoloro y puede ser utilizado varias veces. El desembolso inicial de un dispositivo de ultrasonido es caro; sin embargo, los materiales consumibles necesarios son baratos. El sistema de ultrasonido utilizado en este manuscrito es conveniente para una gama de modelos animales (es decir, ratones y peces) mientras que para los seres humanos un dispositivo de ultrasonido requiere una frecuencia de 3-15 mHz, una frecuencia de 15-70 mHz se requiere para los ratones.
El presente manuscrito describe un protocolo para el uso del modo B, modo doppler color y modo de doppler de onda de pulso. La descripción incluye la preparación de los ratones, así como rendimiento, adquisición de datos y almacenamiento. Este método ha sido cepas de ratón con éxito aplicadas a diferentes días en gestación y puede utilizarse para investigar el desarrollo fetal y placentario así como parámetros de la sangre materna y fetal. Aquí, todas las aplicaciones se explican en base nuestros estudios utilizando ratones embarazadas de NK MC-deficientes y el control.

<table><tbody><tr><td>LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb)</td><td>BioLegend</td><td>123204</td><td>Klon TM-&beta; 1; 500 y micro; g</td></tr><tr><td>Sistema Vevo 2100</td><td>&nbsp; FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td>Transductor&nbsp; MS550D-0421</td></tr><tr><td>Vevo LAB Software</td><td>&nbsp; FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Baxter</td><td>PZN: 6497131</td><td></td></tr><tr><td>Gel de electrodos</td><td>Parker</td><td>12_8</td><td></td></tr><tr><td>Cinta quirúrgica</td><td>3M Transpore</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>Contorno de ojos</td><td>Bayer</td><td>PZN: 1578675</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores con punta de algodón</td><td>Raucotupf</td><td>11969</td><td>100 piezas</td></tr><tr><td>Crema depilatoria</td><td>Reckitt Benckiser</td><td></td><td></td>2077626</tr><tr><td>Compresas</td><td>Nobamed Paul Danz AG</td><td>856110</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Gel de ultrasonidos Gello</td><td>GmbH</td><td>246000</td><td></td></tr></tbody></table>

ultrasonido de alta frecuencia para el análisis del desarrollo fetal y placentario en vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Imágenes por ultrasonido son un método generalizado para detectar anomalías de órganos y tumores en los tejidos humanos y animales. El método es no invasivo, inocuo e indoloro, y la aplicación es fácil, rápido y puede realizarse en cualquier lugar, incluso con dispositivos móviles. Durante el embarazo, imágenes por ultrasonido se utilizan en forma estándar para vigilar estrechamente el desarrollo fetal. La técnica es importante evaluar la restricción del crecimiento intrauterino (RCIU), una complicación del embarazo corto y largo plazo consecuencias de salud para la madre y el feto. Entender el proceso de restricción del crecimiento intrauterino es indispensable para el desarrollo de estrategias terapéuticas eficaces.
El sistema de ultrasonido usado en este manuscrito es un dispositivo de ultrasonido para el análisis de pequeños animales y puede utilizarse en varios campos de investigación, incluyendo investigación de embarazo. Aquí describimos el uso del sistema para el análisis en vivo de fetos de natural killer (NK) células/la célula de mástil (bujía métrica)-deficiente de las madres que dan a luz a crías de crecimiento. El protocolo incluye la preparación del sistema, manejo de los ratones antes y durante las mediciones y el uso de la modalidad B, color doppler y ondas de pulso doppler. Se analizaron el tamaño fetal, tamaño placentario y suministro de sangre al feto. Encontramos tamaños de implantación reducidos y placentas pequeñas en ratones NK MC-deficientes de media gestación a partir. Además, MC, NK-deficiencia fue asociada ausente han invertido y flujo diastólico final en el fetal Arteria umbilicalis(UmA) y un índice de resistencia elevado. Los métodos descritos en el protocolo se pueden utilizar fácilmente para temas de investigación relacionados y no relacionados.

Componentes individuales del sistema de ultrasonido utilizado en este manuscrito se muestran en la figura 1. La figura 2 muestra a representante adquirieron de imágenes de ultrasonido en modo B en gd5, 8, 10 y 12 (B) y en la medida correspondiente del área de implantación resultados (A), demostrando un área significativa implantación reducida de tratados con anti-CD122 Cpa3Cre / + rato...

Aquí describimos la técnica de ultrasonido de alta frecuencia para el análisis en vivo de fetos de ratones. Este método permite el seguimiento de los fetos y el análisis de parámetros placentarios, así como el flujo de sangre materna y fetal durante el embarazo.

Ultrasonido de alta frecuencia para el análisis del desarrollo Fetal y placentario en Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Este método es muy importante para responder a preguntas clave en las áreas de Oncología, Neuro-Biología, Cardiología y Desarrollo Fetal, y por supuesto también es importante en el área de la investigación reproductiva. Las principales ventajas de esta técnica son que no es invasiva, indolora, fácil, rápida y permite el seguimiento de fetos en puntos de tiempo gestacional relevantes a lo largo del embarazo. Al menos media hora antes del procedimiento de diagnóstico por imágenes, encienda el sistema de ultrasonido, la plataforma calentada y el calentador de gel.Abra un nuevo estudio o una nueva serie en un estudio existente en el navegador. Introduzca toda la información necesaria en la ventana de información del estudio. Haga clic en Aceptar y confirme que aparece la ventana de imágenes en modo B.Cuando la ecografía esté lista, confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo delfín en un ratón anestesiado, y aplique un ung ón en los ojos del animal. Coloque una gota de electro gel en cada una de las 4 secciones de cobre de la plataforma calentada y fije las patas a las secciones recubiertas de electro gel de la plataforma. Retire el cabello del abdomen del animal con crema depilatoria y un hisopo de algodón, lavando la crema de la piel depilada después de un minuto con una compresa empapada en agua.A continuación, aplique gel de ultrasonido precalentó sobre el área expuesta. Una razón para la baja intensidad de la señal puede ser la baja cantidad de gel colocado entre el ratón y el haz de ultrasonido. En nuestra experiencia, una cantidad bastante grande de gel es necesaria para una buena calidad de la señal.Cuando el animal esté listo, coloque el transductor sobre la vejiga para su uso como punto de referencia, y mueva la mesa de la plataforma calefactora a los lados izquierdo y derecho del abdomen para trazar las implantaciones fetales en modo B 2D, ajustando el transductor o plataforma según sea necesario hasta que la primera implantación sea visible en la pantalla, en su tamaño más grande. Seleccione Etiqueta de imagen e introduzca un nombre para el archivo de imagen. Ajuste la posición de la imagen, hasta que el flujo sanguíneo dentro de la arteria umbilicalis de la placenta esté a la vista, y almacene un solo marco o cineloop para mediciones placentarias.Para colorear las imágenes Doppler para determinar la dirección del flujo sanguíneo, presione el botón Color y utilice el trackball para mover el cuadro de color a la posición adecuada, haciendo clic en Actualizar para ajustar el tamaño de la caja según sea necesario. Cuando el cuadro tenga el tamaño correcto, haga clic en Seleccionar y almacene la imagen según sea experimentalmente adecuado. Para la cuantificación Doppler de onda pulsada del flujo sanguíneo a través de los vasos, localice la región de interés en el modo de adquisición Doppler de color y haga clic en Onda de pulso.Aparecerá una línea discontinua. Mueva la línea al vaso sanguíneo de interés y utilice la perilla de ángulo Doppler para ajustar el ángulo de la línea para alinearse con el flujo sanguíneo. Para las mediciones Doppler de onda pulsada, es importante observar el ángulo entre la dirección del flujo sanguíneo y el haz de ultrasonido.Los ángulos demasiado altos o los diferentes ángulos entre los animales en el mismo experimento pueden conducir a mediciones de velocidad inexactas. A continuación, haga clic en Actualizar y almacene cineloop de las líneas Doppler que aparecen en la ventana de adquisición Doppler de onda pulsada. Para revisar los datos, haga clic en Gestión de estudios, desplácese hasta la imagen en miniatura de interés y haga doble clic en Actualizar, haga clic de nuevo en Gestión de estudios y haga clic en Cerrar para cerrar la ventana del explorador para finalizar la adquisición de datos y guardar una serie grabada.Para exportar los datos, conecte un disco duro, haga clic en Exportar a, para marcar una o varias series de datos y seleccione el espacio de almacenamiento para copiar los datos en el disco duro. Aquí, se muestran imágenes de ultrasonido representativas adquiridas en el modo B en los días gestacionales 5, 8, 10 y 12, y se muestran sus correspondientes resultados de medición del área de implantación, revelando una reducción significativa en el área de implantación en ratones tratados con deficiencia de células de mástil tratados con anti-CD122 desde el día gestacional 10 en adelante. La imagen en modo B facilita la toma de imágenes y la medición de partes individuales de una implantación.Por ejemplo, los animales con deficiencia de células de mástil tratados con anti-CD122 demuestran una reducción significativa en el área de la placenta, el grosor y el diámetro en comparación con los ratones no tratados en los días gestacionales 10 y 12. Por el contrario, el área placentaria y el diámetro son similares entre los grupos en el día gestacional 14, y el grosor de la placenta, un aumento significativo en los animales transgénicos tratados contra-CD122 en comparación con los ratones no tratados en el día gestacional 14. Las imágenes Doppler de onda pulsada de la arteria uterina para la medición de la velocidad sistólica máxima y la velocidad diastólica, y el índice de resistencia calculado, revelan valores similares entre los animales tratados y no tratados.El índice de resistencia de la arteria umbilicalis en animales con deficiencia de células de mástil tratados con anti-CD122, sin embargo, aumenta significativamente en comparación con los ratones no tratados. Al intentar este procedimiento, es importante tener en cuenta, que usted debe hacer esto cada dos días en lugar de todos los días, para evitar el estrés, y el riesgo de narcotización repetitiva de los animales. Después de este procedimiento, se pueden realizar otras mediciones, como la medición 3D, la visualización y cuantificación del movimiento del tejido a lo largo del tiempo, las mediciones de la presión arterial y también las inyecciones guiadas por ultrasonido.Después de su desarrollo, este método allanó el camino para médicos e investigadores en el área de la atención obstétrica y prenatal, porque es posible hacer un seguimiento del desarrollo fetal y reconocer posibles anomalías durante el embarazo.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

La muerte fetal y perinatal es una característica común en el estudio de las alteraciones genéticas que afectan el desarrollo cardíaco. Alta frecuencia de imágenes por ultrasonido ha mejorado en 2-D y resolución pueden proporcionar información relevante sobre el desarrollo cardíaco temprano y es un método ideal para detectar el impacto en la estructura y función cardíaca antes de la muerte.

La ecocardiografía fetal murino

En este video, demostramos la ecografía de alta frecuencia para obtener imágenes de los sitios de implantación de embriones en un modelo murino embarazada. Esta técnica de imagen detecta con éxito el embarazo viable y caracteriza los sitios de implantación embrionaria durante el embarazo murino temprano.

Caracterización temprana del embarazo basada en ecografía de alta frecuencia: una técnica para estudiar la implantación embrionaria y la progresión del embarazo en un modelo murino embarazada

Se describe el examen de la función cardíaca fetal mediante ecocardiografía fetal funcional contemporánea y fetoplacentaria ecografía Doppler utilizando el VEVO 2100 microultrasound VisualSonics en un modelo inducida quirúrgicamente de restricción del crecimiento fetal intrauterino en un conejo.

Ecocardiografía Fetal y Ecografía Doppler de onda pulsada en un modelo de conejo de Restricción del crecimiento intrauterino

Ultra-alta frecuencia de ultrasonido es una poderosa herramienta de imágenes en directo para examinar anormalidades cardíacas en animales pequeños. Su carácter no invasivo permite el mantenimiento del estado fisiológico de los embriones. En este documento, se muestra el uso del modo M ultrasonido para medir el ritmo cardíaco de los embriones en E18.5 en el útero.

En el útero de medición de la frecuencia cardíaca en el ratón por no invasiva Ecocardiografía en modo M

La ultrasonido craneal (CUS) es una herramienta valiosa para la obtención de imágenes cerebrales en neonatos críticamente enfermos. Este video muestra un enfoque integral para el CUS neonatal (Doppler) tanto para fines clínicos como de investigación, incluida una demostración de la técnica a pie de cama.

Estado del Arte craneal imágenes por ultrasonido en neonatos

A continuación, presentamos un protocolo para inyectar medios de contraste de microburbujas de ultrasonidos en la vida, aislados finales de la gestación de embriones murinos etapa. Este método permite el estudio de los parámetros de perfusión y de marcadores moleculares vasculares dentro del embrión utilizando imágenes de ultrasonido de alta frecuencia con contraste.

Imágenes de contraste en embriones de ratón Uso de alta frecuencia de ultrasonido

Ratones son ampliamente utilizados para estudiar biología gestacional. Sin embargo, interrupción del embarazo se requiere para este tipo de estudios que impide investigaciones longitudinales y hace necesario el uso de grandes cantidades de animales. Por lo tanto, describimos una técnica no invasiva de la ecografía de alta frecuencia para la detección precoz y seguimiento de eventos tras la implantación en el ratón embarazado.

Un nuevo uso de la ecografía tridimensional de alta frecuencia para la caracterización de embarazo temprano en el ratón

Proyección de imagen de ultrasonido de alta frecuencia del ratón fetal ha mejorado la resolución de imagen y puede proporcionar la precisa caracterización no invasiva de desarrollo cardíaco y defectos estructurales. El protocolo descrito en este documento está diseñado para realizar la ecocardiografía ratones fetales en tiempo real en vivo.

Proyección de imagen usando un sistema del ultrasonido de alta frecuencia (30 / 45MHZ) Cardiovascular fetal ratón

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Evaluación integral de la efectividad y seguridad de la entrega de drogas orientada a Placenta utilizando tres métodos complementarios

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Análisis de pez cebra larvas esquelético Integridad del músculo con el colorante azul de Evans

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