Construcción de una hoja de varias capas células madre mesenquimales con un sistema de cultivo dinámico 3D

Terapia con células madre se ha divulgado ampliamente como un tratamiento prometedor para muchas enfermedades. Y las técnicas de la hoja celular se han desarrollado con el fin de mejorar la retención de la célula y la supervivencia dentro de los objetivos, también. Durante la construcción de láminas celulares, el suministro de nutrición insuficiente sigue siendo un problema clave para la pérdida de la función de las células madre, y es una propiedad de células madre insatisfactorias que finalmente afectaría los efectos terapéuticos in vivo.

Nuestro propósito de preparar el producto de lámina de células madre multicapa disponibles, nuestro equipo desarrolló el andamio de láminas celularizadas, pericardio y láminas celulares. Sobre la base del andamio, el arrancador de células multicapa se construiría rápidamente con hidrógeno nonapéptido y se utiliza un sistema de perfusión dinámica para garantizar el suministro de nutrición de la célula madre in vitro. Saque un andamio DBP seco y colótelo en el centro de la base negra.

Coloque un anillo de tensión blanco en el andamio DBP y colócalo en el soporte de tejido. Asegúrese de que el andamio DBP esté totalmente fijado en el soporte de tejido. Agregue 100 medios de cultivo de microlitros en el andamio DBP.

Coloque el andamio en la incubadora de 37 grados Celsius y déjelo remojar durante 15 minutos. Saque las células de la incubadora, retire los medios de cultivo del plato de cultivo, lave suavemente las células con dos mililitros de PBS caliente. Retire todo el PBS del plato de cultivo y asegúrese de que no quede líquido.

Añadir dos mililitros a 1.25%solución de trippsina al plato, e incubar las células durante tres minutos. Detenga el efecto de la trippsina añadiendo dos mililitros de cultivo medio. Lave suavemente las células del plato.

Transfiera las suspensiones celulares en un nuevo tubo centrífugo de 15 mililitros. Centrifugar las células a 220 veces la gravedad durante cinco minutos, y obtener sedimentos celulares. Retire el sobrenadante y acabe con el sedimento celular.

Re suspenda las células con una solución de tres mililitros de 10%sacarosa. Aspirar 10 microlitros suspensión celular, y el número de celda de contenido lee un hemocicómetro, extraer tres millones de células y transferir en su nuevo tubo centrífugo de 1,5 mililitros. Centrifugar las células a 220 veces la raíz cuadrada durante cinco minutos, eliminar completamente los sobrenadantes y obtener el sedimento de las células.

Preparar 20 microlitros 10%solución de sacarosa. Reabrir suavemente las células y obtener una suspensión uniforme. Añadir 20 microlitro péptidos hidro gel en la parte superior de la suspensión mezclar suavemente el gel de péptido hidro, y las células suspensión con la T, sacar el andamio DBP, dejando el portador del tejido, y luego aspirar suavemente la mediana de calculi con un T.Aspirar la mezcla la mezcla y añadir uniformemente al andamio DBP.

Añadir un mililitro de esteliceto de calcio en la parte inferior del portador del tejido. Agregue suavemente un medio cultural de cuatro mililitros en el plato de cultivo y luego emerja la hoja de celda. Ponga las células en la incubadora durante dos horas para que se escaren.

El sistema de perfusión dinámica incluye un recipiente de cultivo de perfusión, el recremento de intercambio de gas y una botella de vidrio. Los ensamblados son sistemas de perfusión dinámicos como se muestra en la figura. Añadir dos medios de cultivo hidrolilitros en la botella de vidrio.

Inserte la hoja celular en la cámara del recipiente de cultivo, agregue tres medianas de cultivo de mililitros en el recipiente, coloque los sistemas de perfusión dinámica en las incubadoras y comience a bombear. Abra el contenedor de referencia cultural en el recumbent bipositivo. Saque la hoja de celda del recipiente de cultivo y colóquela en un plato de cultivo.

Utilice un fórceps para inmovilizar el portador del tejido y utilice otros dos fórceps para separar el anillo de tensión blanca de la base negra. Por último, obtenga la hoja de celda multicapa. El andamio DBP es transparente.

El SEM revende muestra que las universidades capturadas y los componentes están completamente reservados. Las hojas celulares se pueden obtener y mantener por fórceps para su conservación corta. Estas láminas celulares podrían transferirse a un tubo cilindriforme de 1,5 mililitros.

Como modelo, por ejemplo, comenzando con muestras de células de BMFC altamente positivas para el marcador de células madre CD 9O y el CD 29. Después de la construcción de la célula, el BMFC está dejando la hoja celular sigue siendo altos niveles de expansión de CD 90 y el CD 29. La construcción de la estructura de celdas multicapa es el paso crítico del protocolo.

El tiempo de la sartén requiere cuatro geles hidroeléctricos cuando el valor PH cambia de SA a neutro, por lo tanto, es importante lavar la célula con solución de sacarosa para eliminar los iones de superficie. Además, la relación de volumen de la suspensión celular y el panthihidrogel no es buena amiga para la construcción de la estructura multicapa temporal. Después de la formación de la estructura de células madre 3D, verá que el sistema de perfusión dinámica es importante para estabilizar la estructura multicapa, así como para mantener las viabilidades de las células madre.

La infiltración dinámica de la mediana de cultivo podría facilitar que las células madre proliferen y extrapolar el contexto celular dentro de la estructura multicapa también los termómetros de cultivo dinámicos deben ajustarse de acuerdo con diferentes tipos de células madre.