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Isolating, Sequencing and Analyzing Extracellular MicroRNAs from Human Mesenchymal Stem Cells

Aislamiento, secuenciación y análisis de microRNA extracelular de las células madre mesenquimales humanas

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8,654 Views
10:55 min
March 8, 2019

DOI: 10.3791/58655-v

, , , , ,

1The Interdisciplinary Nanoscience Centre,Aarhus University, 2Department of Molecular Biology and Genetics,Aarhus University

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Este protocolo muestra cómo purificar microRNAs extracelulares de medios de cultivo celular para la construcción de biblioteca de RNA pequeño y secuencia de la generación siguiente. Varios puestos de control de calidad se describen para permitir a los lectores a entender qué esperar cuando trabajan con baja entradas muestras como exRNAs.

Este es el primer documento que aborda problemas técnicos en la secuenciación de pequeños ARN derivados de vesículas extracelulares de las células. Las muestras NGS requieren una preparación y un control de calidad estrictos. Debido a la naturaleza de los vehículos eléctricos, el proceso de control de calidad de las muestras EV se desvía de la norma.

La ventaja de este protocolo son los pasos de control de calidad para los usuarios por primera vez. Demostrando el procedimiento estará Junyi Su, una asistente de investigación de mi laboratorio. Para empezar, placa células madre mesenquimales humanas a 2.000 células por centímetro cuadrado en medios MSC frescos en cinco matraces T175.

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Células troncales mesenquimales genética número 145 RNAs extracelulares exosomas vesículas extracelulares ribonucleproteins microRNAs pequeños RNAs secuenciación de próxima generación construcción de biblioteca de RNA pequeños

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