Un protocolo de Rhizobox optimizada para visualizar el crecimiento de las raíces y la capacidad de respuesta a nutrientes localizadas

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la ciencia de la raíz y la rizosfera, como cómo las raíces responden a los parches localizados de nutrientes. Las principales ventajas de esta técnica son que permite mediciones repetidas y no invasivas de un solo sistema radicular en el suelo, pero no requiere equipos especializados y es relativamente barato. Reúna las piezas para el Rhizobox para el montaje.

Estos incluyen paneles frontales y traseros de acrílico transparente de unos 40 centímetros por 61 centímetros. En este punto, hay espaciadores laterales e inferiores en la parte superior del panel posterior. Los espaciadores están alineados con agujeros previamente perforados en los paneles.

Cortar una longitud de relleno de poliéster para ir a lo largo de la parte inferior de la Rhizobox. Poner el relleno en el panel posterior directamente encima del espaciador inferior para ayudar a evitar fugas. Coloque el panel superior en posición en los espaciadores para mantener el relleno en su lugar.

Ahora consigue hardware para ensamblar el Rhizobox. Utilice un tornillo, dos arandelas y tuerca hexagonal para cada uno de los orificios perforados. Coloque una arandela en el panel frontal y apriete el tornillo a través de él hasta el panel posterior.

Otra arandela y la tuerca hexagonal. Para evitar la pérdida de suelo, asegúrese de que todos los tornillos están muy apretados. Además, cree dos espaciadores para formar el tratamiento y controlar los parches.

Hacerlas con láminas de polietileno de alta densidad y fijar un tornillo en la parte superior para permitir sólo la inserción parcial. Para una privación ligera y una reducción de calor, prepare una funda protectora que pueda encerrar la caja. Por último, construye un marco para animar a las raíces a crecer contra el panel posterior.

Este marco de PVC sostiene la caja en un ángulo de aproximadamente 55 grados. Tener preparada una mezcla homogeneizada de tierra de campo y arena. Comience con una bolsa grande que contenga la mezcla de sustrato para cada Rhizobox.

Etiqueta dos bolsas pequeñas con cremallera por caja para el tratamiento y los parches de control. Utilice una báscula y pese 30 gramos del sustrato de arena del suelo. Transfiera el sustrato a la bolsa de control.

Del mismo modo, añadir 30 gramos de sustrato a la bolsa de tratamiento. A continuación, pesar un gramo de nitrógeno 15 etiquetada fuente de nitrógeno y añadirlo a la bolsa de tratamiento. Mezcle bien el sustrato y la fuente de nitrógeno.

Trabaje con un Rhizobox y son espaciadores de parches. Inserte los dos espaciadores en el Rhizobox hasta que el tornillo no se realice más movimiento. Marque la profundidad del borde inferior de los espaciadores en el lado del Rhizobox.

A continuación, quite los espaciadores para los siguientes pasos. Usando un embudo, llene el Rhizobox desde la bolsa grande de sustrato hasta la profundidad marcada. Mueva el embudo hacia adelante y hacia atrás lentamente y uniformemente para llenar el Rhizobox uniformemente.

Cuando el sustrato esté a la profundidad marcada, coloque los espaciadores en la caja. Deben estar a cinco centímetros de los lados izquierdo y derecho de la caja. Continúe llenando la caja hasta que el sustrato esté a unos cinco centímetros de la parte superior de la caja.

A continuación, organizar el riego lento del sustrato en la caja con 150 mililitros de agua con emisores de goteo o a mano. Deje reposar varias horas o durante la noche para que el agua se difunda y el área alrededor de cada espaciador esté completamente húmeda. En este punto, quite los espaciadores para dejar una cavidad vacía para los parches.

Ahora, película de transparencia de cinta al exterior de la caja. Utilice la transparencia para etiquetar un parche como tratamiento y el otro como control. A continuación, utilice el embudo y el sustrato de control preparado para llenar el parche de control.

Este es el parche de control etiquetado después de que se ha llenado. Pase a llenar el parche de tratamiento con el sustrato de tratamiento preparado de la misma manera. Cuando haya terminado, utilice un marcador permanente para trazar el límite de cada parche en la película de transparencia.

A continuación, llene el Rhizobox uniformemente con el sustrato restante de la bolsa grande. Terminar trazando la parte superior del sustrato en la transparencia. Una vez que la caja esté lista, trasplanta una semilla germinada.

En primer lugar, utilice una espátula estrecha para cavar un agujero en el centro de la caja de rizos. El agujero debe tener 2,5 centímetros de profundidad. Coloque la semilla germinada dentro asegurando que el radical esté orientado directamente hacia abajo.

Trace la ubicación de la semilla en la transparencia adjunta a la caja. Cubra la semilla y luego riegarla con hasta 50 mililitros de agua desionizada. A continuación, encierre la caja en su estuche para evitar que la luz interactúe con las raíces durante el crecimiento.

Lleve la caja al marco preparado para ello. Coloque el Rhizobox en el marco para fomentar el crecimiento hacia el marco posterior. Recupere la caja después de cada tres o cuatro días de crecimiento de la planta.

Con el caso eliminado, trazar las raíces visibles de las plantas mediante el uso de un lápiz de color diferente cada vez. Como en este ejemplo, sea coherente y sistemático para este paso. Devuelva la caja cubierta a su soporte y asegurándose de que esté en su orientación original.

Aquí, las longitudes totales de raíz de las raíces trazadas en la parte posterior de 24 rizoboxes se trazan contra longitudes de raíz medidas utilizando un escáner y software informático. Una gráfica similar para los patrones de raíz trazadas en la parte delantera de la caja demuestra que las raíces crecieron preferentemente contra la parte posterior de la caja. Las pendientes consistentes en esta gráfica del logaritmo de la longitud total de la raíz en función de los días de crecimiento sugieren que las tasas de crecimiento eran similares entre las diferentes cajas.

Aquí hay datos para la densidad de longitud de raíz para un genotipo de maíz. La densidad del parche de control es menor que la densidad del parche tratado con nitrógeno. El experimento comparó la densidad de longitud de raíz con seis genotipos de maíz separados.

En todos los casos, la densidad de la longitud de la raíz fue mayor en el parche de tratamiento etiquetado con nitrógeno 15 en comparación con el parche de control. Este protocolo se puede combinar con otros métodos como la esfigografía o la hibridación en condiciones de florescencia in situ para visualizar la distribución espacial de la actividad enzimática o de los microbios.