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DOI: 10.3791/58723-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol demonstrates how to assess bacterial colonization of organs, specifically focusing on Listeria monocytogenes crossing the blood-brain barrier. The method allows for the determination of bacterial numbers in the brain while excluding those in the blood vessels.
Durante la infección, la Listeria monocytogenes es capaz de atravesar la barrera hemato - encefálica para colonizar el cerebro. En este protocolo, se demuestra cómo evaluar la colonización bacteriana de los órganos después de la infección de ratones. Se proporciona un procedimiento para realizar la perfusión de órganos enteros para determinación específica de números bacterianos en la parenquimia del cerebro.
Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la patogénesis bacteriana sobre si las bacterias transmitidas por la sangre pueden cruzar la barrera hematoencefálica para infectar el sistema nervioso central y el cerebro. Con esta técnica, los números bacterianos dentro de la sangre y el tejido cerebral de los animales infectados se pueden determinar excluyendo el número de bacterias que residen dentro de los vasos sanguíneos del cerebro. Demostrar el procedimiento será Pallab Ghosh, un investigador asociado de mi laboratorio.
A las 72 horas posteriores a la infección, establezca un sistema de perfusión automatizado a un caudal de cuatro mililitros de PBS complementados con 10 mililitros de EDTA por minuto. Y coloque al animal eutanizado en la posición supina en una sartén de disección. Confirme la eutanasia por falta de respuesta al pellizco de la pata.
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