Name: Proteína quinasa c-Delta inhibidor péptido formulación usando nanopartículas de oro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Aprende a formular inhibidores de proteína quinasa C-delta usando nanopartículas de oro para tratar lesión pulmonar aguda por isquemia-reperfusión. Este sistema mejora la estabilidad y captación celular con dosis más bajas.

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Este trabajo es apoyado por becas de investigación de los institutos canadienses de investigación en salud (PJT-148847), Ministerio de investigación e innovación de Ontario (RE-08-029) y Canadá primer investigación de excelencia del programa, medicina por diseño en la Universidad de Toronto. Dr. Mingyao Liu es James y María Davie Cátedra de lesión pulmonar, la reparación y la regeneración.

1. preparación de soluciones de péptido
<ol><li>Recuperar los péptidos (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL) del congelador de-20 ° C y descongelar a temperatura ambiente (RT). Nota: Mantenga el frasco cerrado para evitar que la humedad de condensación en los péptidos.</li>
	<li>Pesar 0.01 g de cada péptido en una microescala. Poner cada péptido en un tubo cónico de 50 mL separadas.</li>
	<li>Añadir 18,74 mL de agua desionizada (DI) al tubo de P2.</li>
	<li>Añadir 16,93 mL de agua desionizada al tubo P4.</li>
	<li>Añadir 8,21 mL de acetonitrilo 50% diluido en agua desionizada para el tubo de PKCδi.</li>
	<li>Vortex brevemente las soluciones de péptido. Poner los tubos cónicos de 50 mL en un sonicador (40 MHz) durante 5 minutos.</li>
	<li>Llevar las soluciones de péptido a un gabinete de bioseguridad. Todas las soluciones de péptido preparadas deben ser de 1 mm.</li>
	<li>Transferir 1 mL de cada solución del péptido a un nuevo tubo cónico de 50 mL. 19 mL de agua desionizada en los tubos de P2 y P4 y añadir 19 mL de acetonitrilo 50% al tubo de PKCδi, tal que cada solución es diluida a 50 μm y almacenado en su propio tubo.</li>
</ol>2. formulación de PNB/PKCi
<ol><li>Péptidos se deben agregar a la solución de GNP mientras que todavía en el BSC</li>
	<li>Añadir 475 μL de P2, 25μL de P4 y 500 μL de solución de δPKCi en un tubo de 15 mL. Añadir 9 mL de solución de GNP de 20 nm (7.0x1011 partículas/mL) en el mismo tubo de 15 mL.</li>
	<li>La salida del gabinete de seguridad de la biotecnología. Envuelva el tubo de 15 mL con papel de aluminio. Dejarlo toda la noche en un agitador a temperatura ambiente.</li>
	<li>Retomar las muestras la bioseguridad gabinete. Alícuota 1 mL de GNP/PKCi en cada microtubos de 1,5 mL.</li>
	<li>Centrifugar los tubos en una microcentrífuga durante 30 min a 15.294 x g a 4 ° C.</li>
	<li>Retire el sobrenadante de cada tubo en un gabinete de bioseguridad. Nota: Tenga cuidado de quitar el sobrenadante asegurando que el GNP se mantiene intacta y no se aspira.</li>
	<li>Vuelva a suspender el sedimento en el solvente deseado según la concentración necesaria. Aplicables disolventes pueden ser agua DI, PBS y 0.9% NaCl. Nota: A partir de 1 mL de GNP/PKCi, la pelotilla de GNP contiene 6.3 x 1011 partículas, basadas en la concentración de GNP proporcionada por el fabricante. Administrar 1.3 x 1012 partículas en 500 μl de 0.9% NaCl, añadimos 232 μl de 0.9% NaCl a cada uno de tres gránulos. Después de la les agrupación juntos, entonces podemos recolectar 500 μl de solución de GNP/PKCi. Nota: Mezcle el deseado solvente antes de diluir la pastilla de GNP/PKCi, de lo contrario GNP/PKCi será agregado.</li>
</ol>3. evaluación de la PNB/PKCi híbrido solubilidad
<ol><li>Verter 0,5 mL de solución de GNP/PKCi en una cubeta de acrílico. Coloque la cubeta de acrílico en un espectrofotómetro UV-Vis y el pico de absorción15de prueba.</li>
</ol>

<ol><li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014%3B+focus+theme%3A+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li>
<li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+graft+dysfunction%3A+definition%2C+risk+factors%2C+short-+and+long-term+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical%22%5BJournal%5D)">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li>
<li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia%3A+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li>
<li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li>
<li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction%3A+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li>
<li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li>
<li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery+and+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li>
<li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide%3A+a+multifunctional+Trojan+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li>
<li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental%2C+health+and+safety+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li>
<li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li>
<li>Cheng, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnologies+for+biomolecular+detection+and+medical+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 10 (1), 11-19 (2006).</li>
<li>Rosi, N. L., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanostructures+in+biodiagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Nanostructures in biodiagnostics.</a> Chemical Reviews. 105 (4), 1547-1562 (2005).</li>
<li>Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+chemical+and+biological+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in chemical and biological sensing.</a> Chemical Reviews. 112 (5), 2739-2779 (2012).</li>
<li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+nanomedicine%3A+preparations%2C+imaging%2C+diagnostics%2C+therapies+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+%26+Particle+Systems+Characterization%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle & Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li>
<li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanoparticle+Research%22%5BJournal%5D)">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li>
<li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li>
<li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li>
<li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360(2009).</li>
<li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration%3A+Effect+of+particle+size%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B-Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li>
<li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li>
<li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar en este proyecto.

Para garantizar la formulación correcta, es crucial que la solución de δPKCi sufre el paso de sonicación en 1.6. ΔPKCi secuencia de péptido contiene moléculas hidrofóbicas, por lo que un sonicador ayuda a disolver PKCi en la solución de 50% acetonitrilo. Además, es muy importante mezclar el solvente meticulosamente, como se indica en el paso 2.7.  El híbrido de GNP/PKCi no se bien formularán si estos pasos no se realizan correctamente, debido a la agregación del péptido δPKCi23. 
  Formulaci...

Trasplante de pulmón guarda a pacientes con fase final pulmón enfermedad1. Sin embargo, complicaciones serias después de trasplante de pulmón siguen siendo un obstáculo. En las primeras etapas después del trasplante del pulmón, la disfunción primaria del injerto es la complicación más perjudiciales1, y su principal causa es la isquemia-reperfusión (IR)-inducida de lesión pulmonar aguda2.
Bajo conservación en frío, el metabolismo en el pulmón de un donante es restringido a un nivel muy bajo. Sin embargo, la síntesis de óxido nítrico y especies reactivas de oxígeno se activan debido a la cesación del flujo de sangre3. Después del trasplante, se restablece la circulación de la sangre, y especies reactivas del oxígeno y el óxido nítrico generado durante la isquemia fría mejoran la inflamación y muerte celular, dando por resultado la lesión del tejido.
Para evitar lesiones de IR, se ha utilizado un inhibidor de proteína cinasa Cδ (PKCδi) en el corazón, cerebro y pulmón4,5,6,7,8. Estos estudios demostraron que el PKCδi disminuido la inflamación y la apoptosis durante la reperfusión. También ha impedido pulmonar lesiones IR en ratas y en un modelo de trasplante pulmonar6. PKCδi generalmente se conjuga con un penetración celular péptido, TAT, para la entrega intracelular. Sin embargo, se ha demostrado que el péptido de TAT solo tiene efectos biológicos no específicos, incluyendo la promoción de la angiogénesis, apoptosis y la inhibición de múltiples citoquinas9,10,11. Nanopartículas, pequeñas partículas que van desde 1 a 100 nm de diámetro12, han sido exploradas como candidatos en la facilitación de entrega de drogas13. En particular, nanopartículas de oro (SPNG) son consideradas como no invasiva y no tóxico. Por lo tanto, hemos desarrollado SPNG como portadores de entrega de medicamentos de fármacos basados en péptidos14,15.
La superficie de PNB puede ser manipulada para aplicaciones específicas como el reconocimiento molecular16,17, sensores químicos18, imagen19y entrega de la droga. Se ha desarrollado un sistema híbrido de GNP/péptido, que contiene 20 nm SPNG y dos péptidos cortos (P2: CAAAAE y P4: CAAAAW) en una proporción de 95: 5, para modificar las propiedades superficiales de PNB. El péptido de la P2, con el cargado negativa el ácido glutámico (E) al final, estabiliza el SPNG en una solución acuosa, y el péptido de P4, con el triptófano hidrofóbico (W) al final, ayuda a PNB entrada en células14. El residuo de cisteína (C) en el término de N de estos péptidos contiene un grupo tiol que puede conjugar a las superficies del oro14. Este híbrido de péptido y PNB se utilizó más para entregar PKCδi (CSFNSYELGSL). La relación molar optimizada de P2:P4 a PKCδi es 47.5:2.5:50. SPNG conjugado con PKCδi (GNP/PKCi) son estables en agua destilada, 0.9% NaCl y PBS con albúmina bovina o suero bovino fetal14. La inyección intravenosa de GNP/PKCi se ha demostrado para prevenir lesiones de isquemia-reperfusión del pulmón15. Este artículo describe un método para formular GNP/PKCi y describe cómo evaluar las propiedades fisicoquímicas de GNP/PKCi. Hemos utilizado métodos similares para formular otros fármacos basados en péptidos conjugados a GNP20,21,22. Esperamos que este artículo dibuja más atención a esta formulación novedosa para la entrega intracelular de la droga.

<table><tbody><tr><td>péptido de ácido glutámico cargado negativamente (P2)</td><td>CanSecuencia de</td><td></td> péptidos<td>: CAAAAE-NH2 Longitud: 6aa Modificación: Amidación C-terminal Cantidad: 50mg Pureza: >95%</td></tr> <tr><td>péptido de triptófano hidrofóbico (P4)</td><td>Secuencia de péptido Can</td><td></td><td>: CAAAAW-NH2 Longitud: 6aa Modificación: Amidación C-terminal Cantidad: 50mg Pureza: >95%</td></tr><tr><td>&delta; Sustancia del péptido PKCi</td><td>CanPeptide</td><td></td><td>Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 Longitud: 11aa Modificación: C-terminal amidation Cantidad: 50mg Pureza: >95%</td></tr><tr><td>Tubo cónico (50ml)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3582070</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico (15ml)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3582096</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>271004-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Branson Ultrasonics Corp.</td><td>Branson 2510MTH</td><td></td></tr><tr><td>Microtubo</td><td>Diamed.ca</td><td>AD 150-N</td><td></td></tr><tr><td>Solución de nanopartículas de oro</td><td>Ted Pella</td><td>15705-5</td><td>A El tamaño de partícula es de 20nm</td></tr><tr><td>Agitador de plataforma oscilante</td><td>VWR international</td><td>40000-304&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>Cubeta acrílica</td><td>SARSREDT</td><td>67.758</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotómetro UV-Vis</td><td>Agilent</td><td>Caty 60 UV-Vis</td><td></td></tr></tbody></table>

proteína quinasa c-delta inhibidor péptido formulación usando nanopartículas de oro

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

Inhibidores de proteína quinasa c-Delta (PKCδi) es un fármaco prometedor para evitar lesiones de órgano inducida por isquemia-reperfusión. Generalmente se conjuga a un penetración de célula péptido, TAT, para la entrega intracelular. Sin embargo, TAT ha mostrado actividad biológica no específica. Nanopartículas de oro (SPNG) pueden utilizarse como portadores de drogas entrega sin toxicidad reconocida. Por lo tanto, hemos utilizado un híbrido de GNP/péptido para entregar PKCδi. Dos cortos péptidos (P2: CAAAAE y P4: CAAAAW), en una proporción de 95: 5, fueron utilizados para modificar las propiedades superficiales del PNB. SPNG conjugado con PKCδi (GNP/PKCi) es estables en agua destilada 0,9% NaCl y el tampón fosfato salino (PBS) con albúmina sérica bovina o suero bovino fetal. La inyección intravenosa de GNP-PKCi fue demostrada previamente para evitar lesiones de isquemia-reperfusión pulmonar. Este artículo describe un protocolo para GNP/PKCi de formular y evaluar las propiedades fisicoquímicas de GNP/PKCi. Hemos utilizado métodos similares para formular otros fármacos basados en péptidos con el PIB. Este artículo que sacarán más atención a esta tecnología de entrega de nuevas drogas intracelular y sus aplicaciones en vivo.

Se debe evaluar las propiedades biofísicas del GNP/PKCi híbrido, como GNP tiende a agregado de solvente. Cuando se agrega GNP, el color de la solución cambia de color de rosa a púrpura (Figura 1a). Espectrofotómetro UV-Vis es capaz de detectar los cambios más sensible. Si GNP/PKCi no se agrega el pico de absorción debe ser en 525 nm (Figura 1b). Si se agrega el PNB, el pico de absorción se desplazan hacia la derecha. Como un méto...

Anteriormente hemos utilizado un híbrido de péptido nanopartículas de oro para entregar por vía intravenosa un péptido sintético, inhibidor de proteína cinasa C-delta, que reduce la lesión pulmonar aguda inducida por isquemia-reperfusión. A continuación os mostramos el protocolo detallado de la formulación de la droga. Otros péptidos intracelulares pueden ser formuladas de manera similar.

Proteína quinasa c-Delta inhibidor péptido formulación usando nanopartículas de oro

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

Nuestro exclusivo sistema de administración de fármacos, que utiliza partículas de oro de 20 nanómetros en dos péptidos cortos específicos, puede estabilizar nanopartículas de oro en solución fisiológica y mejorar su absorción celular, y así, entregar eficazmente fármacos basados en péptidos u otros fármacos en las células. Nuestro híbrido peptídico GNP es fácil de sintetizar y estable. Mediante el uso de híbrido de péptido de nanopartículas de oro como portadores de fármacos, podemos transferir fármacos peptídicos a las células de manera efectiva y en abundancia.Tratamos la lesión por isquemia-reperfusión en los pulmones con nuestro híbrido GNP/PKCi. El GNP introduce péptidos inhibidores de la PKC en el citoplasma. Este método de administración fue capaz de reducir la lesión pulmonar más grave utilizando una dosis más baja de PKCi que otros métodos de administración.Para comenzar este procedimiento, recupere los péptidos de un congelador a menos 20 grados centígrados y descongelarlos a temperatura ambiente. Utilice una micro báscula para pesar 0,01 gramos de cada péptido descongelado y transfiera cada péptido a un tubo cónico separado de 50 mililitros. Añadir 18,74 mililitros de a

protein-kinase-c-delta-inhibitor-peptide-formulation-using-gold

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Tipo B a base de gelatina sistema nanovectors ingeniería (gens) fue desarrollado para la entrega de genes sistémicos y transfección en el tratamiento del cáncer de páncreas. Por la modificación con el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) péptido específico en la superficie de nanparticles, podrían dirigir a los receptores EGFR y la liberación del plásmido en la reducción de medio ambiente, tales como altas concentraciones de glutatión intracelular.

Entrega y transfección de genes en células humanas de cáncer de páncreas con factor de crecimiento epidérmico receptor dirigidos a base de gelatina Nanovectors Ingeniería

Describimos la implementación de la estrategia REPLACE para dirigirse a las interacciones proteína-proteína. REPLACE es una estrategia iterativa que involucra enfoques sintéticos y computacionales para la conversión de inhibidores peptídicos optimizados en moléculas similares a fármacos.

El desarrollo de inhibidores de interacciones proteína-proteína a través REEMPLAZAR: Aplicación al Diseño y Desarrollo para no ATP inhibidores de CDK Competitiva

Mostramos la preparación y abordamos la viabilidad de vehículos celulares que contienen nanovarillas de oro para la obtención de imágenes fotoacústicas del cáncer.

Análisis preparación y fotoacústica de Vehículos celulares que contienen oro Nanorods

La señalización de receptores de tipo Toll-like (TLR) juega un papel importante en la fisiopatología de muchas enfermedades inflamatorias humanas y se anticipa que la regulación de las respuestas de TLR por nanopartículas bioactivas es beneficiosa en muchas afecciones inflamatorias. Las células informadoras basadas en células THP-1 proporcionan una plataforma de cribado versátil y robusta para identificar nuevos inhibidores de la señalización de TLR.

Proyección de nanopartículas bioactivas en células inmunológicas fagocíticas para inhibidores de la señalización de receptores de tipo Toll

Se describe un método de sintetizar biocompatibles nanopartículas de oro de 10 nm, funcionalizadas por glicol de polietileno capa sobre la superficie. Estas partículas pueden ser usados en vitro y en vivo para brindar terapias a nanoescala espacios celulares y extracelulares son difícil acceso con tamaños de nanopartículas convencional.

Síntesis de funcionalizados 10 nm recubierto de polímero partículas de oro para apuntar el endotelio y el suministro de medicamentos

Este protocolo describe un método eficiente para sintetizar una nanoemulsión de un conjugado de ácido oleico acids-platinum(II) estabilizado con un tripéptido de lisina-tirosina-fenilalanina (KYF). Las formas de nanoemulsión condiciones suaves sintético a través de autoensamblaje de lo KYF y el conjugado.

Una nanoemulsión tripéptido-estabilizado del ácido oleico

En este protocolo, las nanopartículas de oro modificadas con doxorrubicina AS1411-g-PEI-g-PEG se sintetizan a través de reacciones de amida de tres pasos. Luego, la doxorrubicina se carga y se administra a las células cancerosas diana para el tratamiento del cáncer.

Síntesis De Aptamer-PEI-g-PEG Nanopartículas De Oro Modificadas Cargadas Con Doxorrubicina Para La Administración De Fármacos Dirigidos

Este estudio tenía como objetivo presentar una estrategia para identificar las interacciones entre fármacos y péptidos. La estrategia consiste en la biopanning de péptidos cortos que reconocen fármacos basados en un biosensor de micropeso de cristal de cuarzo (QCM), seguido de análisis bioinformática para evaluar cuantitativamente la información obtenida para el reconocimiento de fármacos y la anotación de los sitios de unión a fármacos sobre proteínas.

Estrategia de análisis bioaformático y bioinformática basada en biosensores para la validación global de interacciones entre fármacos y proteínas

Este estudio desarrolló un método no invasivo y en tiempo real para evaluar la distribución del ligando de muerte programada 1 en todo el cuerpo, basado en imágenes tomográficas por emisión de positrones del antagonista del D-docapéptido [68Ga]. Esta técnica tiene ventajas sobre la inmunohistoquímica convencional y mejora la eficiencia de la identificación de los pacientes apropiados que se beneficiarán de la terapia de bloqueo de puntos de control inmunitario.

Desarrollo de un trazador PET de péptido D marcado con 68galios para la obtención de imágenes de la expresión del ligando de muerte programada 1

En este artículo se describe un método para sintetizar nanoprecipitation a base de polímeros con nanopartículas de copolímeros de bloque doble. Vamos a discutir la síntesis de copolímeros de bloque doble, la técnica nanoprecipitation, y sus posibles aplicaciones.

Formulación de nanopartículas poliméricas mediante la técnica de dibloque Nanoprecipitation

Aprende a formular inhibidores de proteína quinasa C-delta usando nanopartículas de oro para tratar lesión pulmonar aguda por isquemia-reperfusión. Este sistema mejora la estabilidad y captación celular con dosis más bajas.

Proteína quinasa c-Delta inhibidor péptido formulación usando nanopartículas de oro

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