Name: Extracción y análisis de propóleos verde Taiwan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprende a extraer y caracterizar propóleo verde de Taiwán usando etanol como solvente. Este protocolo reproducible permite evaluar la actividad antibacteriana y determinar la calidad del producto natural de forma confiable.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este manuscrito fue editado por Wallace de edición académica.

1. preparación de compuestos extraídos de etanol
<ol><li>Pesar 10 g de propóleo verde Taiwan congelado, que fue recogida de colmenas en Taiwan desde mayo a julio, y moler con la amoladora de la especia. Confirman que piezas enteras del Taiwan propóleos verde molido en un polvo fino sin partículas grandes.</li>
	<li>Añadir 100 mL de diferentes concentraciones de etanol (60%, 70%, 80%, 95% y 99.5%) y agua a los distintos matraces y mezcle cada concentración con 10 g de propóleo de la tierra.</li>
	<li>Incubar a 25 ° C y agitar el matraz a 250 rpm durante 48 h.</li>
	<li>Filtrar los extractos de etanol a través de papel filtro con un tamaño de poro de 25 μm.</li>
	<li>Reconstituir los filtrados en su volumen original (100 mL) con etanol al 95% utilizando un matraz aforado.</li>
	<li>Almacenar los extractos de etanol a-20 ° C. Nota: El protocolo se puede detener aquí.</li>
</ol>2. preparación de extractos de etanol para HPLC
<ol><li>Concentrado de 10 mL de los extractos de etanol por evaporación al vacío a 40 ° C durante 15 minutos.</li>
	<li>Cocer la materia seca a 45 ° C por 24 h.</li>
	<li>Reconstituir con 10 mL de etanol al 95% materia seca.</li>
	<li>Filtro de 1 mL de etanol extractos utilizando un filtro de jeringa estéril con un tamaño de poro de 0.45 μm.</li>
	<li>Refilter los extractos de etanol con un filtro de jeringa estéril de un tamaño de poro de 0,22 μm. El filtrado se recoge y puede analizarse directamente mediante HPLC.</li>
</ol>3. análisis del contenido Propolin utilizando HPLC
<ol><li>
Establecimiento de curvas estándar de propolins
	<ol>
<li>Preparar 1 L de la fase móvil de la solución de metanol: agua 88.8:11.2 (v/v).</li>
		<li>Preparar diluciones seriadas de propolin estándar concentraciones (C, D, F y G) (15,625 mg/mL, 31,25 mg/mL, mL/62,5 mg y 125 mg/mL, respectivamente) con la solución de la fase móvil como solvente.</li>
		<li>Inyectar 20 μl de concentraciones estándar propolin en la columna de fase inversa, secuencialmente de la concentración baja a la alta concentración.</li>
		<li>Establecer la columna HPLC a 30 ° C y la velocidad de flujo de 1 mL/min.</li>
		<li>Establecer la longitud de onda del detector UV a 280 nm y el tiempo de la grabadora a 20 min.</li>
		<li>Analizar las normas por lo menos 3 x.</li>
		<li>Parcela la respuesta de la medición (eje y) contra la concentración (eje x) usando el cálculo software de la hoja y crear una curva estándar con la ecuación y el valor de R cuadrado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análisis de la Extracto en etanol s
	<ol>
<li>Inyectar 20 μl de los extractos etanólicos obtenidos de paso 2,5 en la columna de fase inversa.</li>
		<li>Establecer la columna HPLC a 30 ° C y la velocidad de flujo de 1 mL/min.</li>
		<li>Establecer la longitud de onda del detector UV a 280 nm y el tiempo de la grabadora a 20 min.</li>
		<li>Analizar las normas por lo menos 3 x.</li>
		<li>Calcular la concentración de propolin en el extracto de etanol, utilizando la ecuación para la curva estándar obtenida en el paso 3.1.7 que utiliza el área de pico para cada propolin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. mínima concentración inhibitoria y mínima concentración bactericida análisis
Nota: El método de microdilución se utiliza para evaluar la eficacia antibacteriana de propolins extraído de etanol de propóleos verde Taiwan.
<ol><li>
Preparación de organismos de prueba
	<ol>
<li>Descongelar las cepas de bacterias, Staphylococcus aureus y Escherichia coli y entonces, la cultura les en caldo de soja tríptica y caldo nutritivo, respectivamente, a 37 ° C durante 24 h.</li>
		<li>Pasajes S. aureus utilizando caldo de soja tríptica y e. coli utilizando caldo nutritivo durante dos generaciones y, a continuación, calcular unidades formadoras de colonias por recuento de colonias individuales sobre una placa de agar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparación de etanol de extractos para pruebas de actividad antibacteriana
	<ol>
<li>Concentrar los extractos etanólicos obtenidos de paso 1.5 por evaporación al vacío a 40 ° C durante 15 minutos.</li>
		<li>Reconstituir la materia seca con dimetil sulfóxido (DMSO) y ajustar la concentración del extracto a 12,8 mg/mL.</li>
		<li>Hacer una dilución seriada (concentraciones: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 y 640 μg/mL) de etanol extractos utilizando el caldo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Pruebas de concentración mínima inhibitoria
	<ol>
<li>Añadir 10 μl de los extractos de etanol diluido desde 0.156 a 640.0 μg/mL en una placa de 96 pocillos.</li>
		<li>Con caldo, ajustar el volumen a 100 μl y mantener 5% DMSO en todas las diluciones.</li>
		<li>Inocular 100 μl de cultivo bacteriano (1 x 106/ml) en la placa de 96 pocillos.</li>
		<li>Inóculo de cultivo con diferentes concentraciones de etanol extrae a 37 ° C durante 48 h.</li>
		<li>Analizar el crecimiento bacteriano según la turbidez y el uso de densidad óptica (lector de microplacas) a 590 nm para determinar la concentración mínima inhibitoria (MIC).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Concentración bactericida mínima pruebas de
	<ol>
<li>Inocular 10 μl de un cultivo líquido de cada pocillo de la prueba MIC que no crecimiento sobre una placa de agar.</li>
		<li>Incubar a 37 ° C durante 24 h.</li>
		<li>Determinar la actividad bactericida mediante la identificación de la concentración más baja que no hay crecimiento bacteriano visible. La concentración que elimina completamente el crecimiento de la célula se considera la concentración bacteriana mínima (CBM).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que declarar.

Un estudio informó que la maceración, utilizando diferentes concentraciones de etanol, podría ser utilizado para extracción de propóleo brasileño17; sin embargo, el proceso fue largo17. Tardó menos de 10 días para extraer los compuestos bioactivos, tales como contenido fenólico, de propóleo brasileño17. Alternativamente, la extracción de etanol en combinación con la calefacción a 37 ° C, 50 ° C o 70 ° C durante 30 min se ha propuesto para la extracci...

El propóleos es una mezcla resinosa natural producida por la especie de abeja Apis mellifera. El propóleos ha sido ampliamente utilizado desde la antigüedad en medicina popular. Un estudio divulgado recientemente que el propóleos es beneficioso para la prevención de las infecciones microbianas e inflamación1. Numerosos estudios han demostrado que los principales compuestos bioactivos en el propóleos son flavonoides, ésteres de ácidos fenólicos, prenylated p-ácidos hidroxicinámico y diterpenic ácidos2,3. Hasta la fecha, se han identificado 10 prenylated flavanone derivados propoleo verde Taiwan mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)4,5,6,7. El más abundante entre ellos es propolins de5,C, D, F y G7. Los considerables efectos biológicos de propóleos verde Taiwan se correlacionan con su alto contenido de propolins8.
Las concentraciones de compuestos bioactivos en el propóleos varían mucho dependiendo de la temporada y ubicación geográfica de la cual se obtiene el propóleos. Propóleos Europeo contiene principalmente flavonoides aglicona y fenólicos ácidos9. Los principales compuestos bioactivos en el propóleos de Brasil son prenylated p-cumárico ácidos, tales como artepillin C10. Un estudio demostró que la estación es un factor crítico para determinar el contenido total propolin en taiwanés propóleos verde11. El contenido de propolin en propóleos verde Taiwan es más alta en verano (mayo - julio) y la más baja en invierno11. La propiedad antibacteriana del propóleos se ha considerado extensamente para ser un indicador de actividad biológica. Generalmente, las muestras de propóleos recolectados de diversas regiones han exhibido una propiedad antibacteriana similar; por ejemplo, es generalmente eficaz contra casi todas las bacterias Gram-positivas y exhibe un limitado efecto antibacterial contra bacterias Gram-negativas10,12,13. Interacciones sinérgicas entre los flavonoides en el propóleos fueron demostradas para tener un efecto antibacteriano14. Del mismo modo, propóleos verde Taiwan informó tener un efecto antimicrobiano contra bacterias Gram-positivas15. Además, un estudio también identificó un efecto antimicrobiano de las interacciones de la propolins en taiwanés propóleos verde8.
La caracterización de los compuestos bioactivos en el propóleos es difícil porque su composición química puede variar según su fuente de origen. Por lo tanto, es necesario establecer un método factible y repetible para determinar la calidad de lo propóleos verde Taiwan. Sin embargo, se ha establecido ningún procedimiento estándar para la extracción de propóleos verde taiwanés y posterior análisis funcional. Se han propuesto varios métodos que se aplican diversamente solventes orgánicos e inorgánicos para propóleos extracción16,17,18,19,20. Ya que el propóleos es una mezcla lipofílica, estudios han demostrado que la extracción orgánica es mejor que inorgánicos extracción8,18,19. La concentración total propolin en Taiwan propóleo verde y sus propiedades antibacterianas son indicadores de la calidad del propóleos verde Taiwan. Así, el propósito de este estudio es presentar un protocolo para uso de etanol como solvente para extraer y caracterizar las propiedades antibacterianas del propóleo verde Taiwan.

<table><tbody><tr><td>etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman n.º 4 papel de filtro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>fase inversa RP-18 columna</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>caldo de soja tríptico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>caldo de nutrientes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>dimetilsulfóxido</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>molinillo</td> <td>de especiasLector de</td> microplacas <td>Waring WSG60K</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Dispositivos moleculares</td><td>Sistema de HPLC EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Agilent</td> serie <td></td><td>1200</td></tr><tr><td>evaporación al vacío</td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

extracción y análisis de propóleos verde taiwan

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Taiwan propóleos verde es rico en flavonoides, prenylated y exhibe una amplia gama de actividades biológicas, como antioxidante, antibacteriano y contra el cáncer. Los compuestos bioactivos de propóleos verde Taiwan son propolins, es decir, C, D, F y G. La concentración de propolins en el propóleos verde Taiwan varía dependiendo de la temporada y ubicación geográfica. Por lo tanto, es fundamental establecer un procedimiento estándar y repetible para determinar la calidad del propóleos verde Taiwan. Aquí, presentamos un protocolo que utiliza la extracción de etanol, cromatografía líquida de alto rendimiento y un análisis de la actividad antibacteriana para caracterizar la calidad del propóleos verde taiwanés. Este método indica que la extracción de etanol de 95% y 99.5% alcanzar las producciones de materia seca máximo de propóleos verde Taiwan, lo que las concentraciones más altas de propolins que tienen propiedades antibacterianas. Según estos resultados, el presente Protocolo se considera confiables y repetibles para determinar la calidad del propóleos verde Taiwan.

Positivos datos representativos para la extracción de etanol se presentan en la tabla 1. El rendimiento de materia seca de propóleos verde Taiwan fue positivamente asociado a la concentración de etanol. Los extractos de etanol de 95% y 99.5% tuvieron la mayor materia seca rendimiento de propóleos verde Taiwan. El rendimiento de materia seca menor de propóleos verde Taiwan se produjo cuando se utilizó agua como solvente de extracción. Estos resultados indican que un solven...

Presentamos un protocolo para usar etanol como solvente para extraer y caracterizar propóleos verde Taiwan que exhibe actividad antibacteriana.

Extracción y análisis de propóleos verde Taiwan

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Aquí, presentamos el protocolo para el uso de etanol como disolvente para extraer y caracterizar el propóleo verde taiwanés que inhibe la actividad antibacteriana. Este protocolo es un método fiable y repetible para determinar la calidad del propóleo verde taiwanés. El procedimiento de demostración será Chun'Ting Chen y Yi'Hsuan Chien, estudiantes de doctorado de mi laboratorio.Para empezar, pesa 100 gramos de propóleos verdes taiwaneses. Usando un molinillo de especias, muele el propóleo asegurándose de que las piezas estén molidas en un polvo fino sin partículas grandes. Establecer cinco matraces y añadir 100 mililitros de diversas concentraciones de etanol en agua a cada uno.Mezclar 10 gramos de propóleo molido en la solución de etanol en cada matraz, e incubar a 25 grados centígrados con agitación a 250 RPM durante 48 horas. Después de esto, utilice papel de filtro con un tamaño de poro de 25 micrómetros para filtrar los extractos de etanol. Con un matraz volumétrico, reconstituya los filtrados a su volumen original de 100 mililitros con 95% de etanol.Almacene los extractos reconstituidos a menos 20 grados centígrados hasta que estén listos para su uso. Cuando esté listo para preparar los extractos para HPLC, utilice la evaporación al vacío para concentrar 10 mililitros de cada extracto a 40 grados Celsius durante 10 minutos. Hornee la materia seca a 45 grados centígrados durante 24 horas.A continuación, reconstituir cada muestra de materia seca con 10 mililitros de 95%etanol. Usando un filtro de jeringa con un tamaño de poro de 0,22 micrómetros, vuelva a filtrar cada extracto y recoja el filtrado para su análisis directo con HPLC. Para comenzar a establecer una curva estándar, prepare un litro de la solución móvil de metanol a agua en una proporción de 88,8 a 11,2.Utilizando la solución de fase móvil como disolvente, prepare diluciones en serie de las concentraciones estándar de propon, tal como se describe en el protocolo de texto. Inyectar 20 microlitros de cada concentración estándar en las columnas de fase inversa secuencialmente desde la concentración más baja hasta la más alta. A continuación, establezca la columna HPLC en 30 grados Celsius, establezca la longitud de renuncia del detector UV en 280 nanómetros, y el caudal en un mililitro por minuto, y el tiempo de grabación en 20 minutos.Analice las normas al menos tres veces. Después de esto, utilice el software de hoja de cálculo para conectar la respuesta de medición contra la concentración, lo que resulta en una curva estándar con una ecuación determinada y un valor R cuadrado. Para comenzar a analizar los extractos, inyecte 20 microlitros de cada extracto en la columna de fase inversa.Establezca la columna HPLC a una temperatura de 30 grados centígrados y un caudal de un mililitro por minuto. Establezca la longitud de renuncia del detector UV en 280 nanómetros y el tiempo de grabación en 20 minutos. Analice los extractos al menos tres veces.A continuación, utilice la curva estándar para determinar la concentración de proponina en cada extracto de etanol. Después de preparar los organismos de ensayo y los extractos de etanol, añadir 10 microlitros de extracto de etanol diluido, que van desde 0.156 a 640 microgramos por mililitro en los pozos de una placa de 96 pozos. Utilice caldo para ajustar el volumen de cada pocero a 100 microlitros asegurándose de mantener 5%DMSO en todas las diluciones.A continuación, inocular 100 microlitros de cultivo bacteriano en cada pozo de la placa de 96 pozos. Cultura a 37 grados centígrados durante 48 horas. Utilice un lector de microplacas a 590 nanómetros para analizar el crecimiento bacteriano de acuerdo con la turbidez y para determinar la concentración inhibitorina mínima.Después de esto, inocular 10 microlitros de cultivo líquido de cada pozo que exhibieron para crecer en una placa de agar. Incubar a 37 grados centígrados durante 24 horas. Identificar la concentración más baja que no reveló crecimiento bacteriano visible para determinar la actividad bacteriana.La concentración que eliminó completamente el crecimiento celular se considera la concentración bacteriana mínima. En este estudio, el propóleo verde taiwanés se extrae con etanol. El rendimiento de materia seca parece ser más alto cuando se utiliza una alta concentración de etanol, y más bajo cuando se utiliza agua.Estos resultados indican que un disolvente orgánico funciona mejor durante esta extracción, y que el rendimiento se asocia positivamente con la concentración de etanol. Del mismo modo, la concentración de propons se parece estar positivamente asociada con la concentración de etanol durante la extracción, con el mayor rendimiento de propolinas que se obtiene en los extractos de etanol 95% y 99,5%. A continuación se investigan los efectos antibacterianos de los extractos de etanol contra el Aureus y la coli.La concentración inhibitoria mínima media de S aureus parece estar entre 10 y 20 microgramos por mililitro y la concentración bacteriana media parece ser de 20 microgramos por mililitro. Los extractos de agua, sin embargo, no tenían ningún efecto antibacteriano contra S aureus. No se observa ningún efecto antibacteriano para E coli cuando se utiliza el agua o extractos de etanol.Uno de los procedimientos experimentales clave es evitar la uniformidad del propóleo verde taiwanés durante la molienda.

extraction-and-analysis-of-taiwanese-green-propolis

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

La biomasa vegetal ofrece un recurso renovable para varios productos, incluido el combustible, piensos, alimentos y una variedad de materiales. En este trabajo investigamos las propiedades del árbol del tabaco (Nicotiana glauca) y el álamo como fuentes adecuadas para un gasoducto de biorrefinería.

Transcripción y metabolito de perfiles para la Evaluación de árbol Tabaco y Poplar como materia prima para la industria basada en Bio

Consorcios microbianos en las colmenas de la abeja bumble enriquecen y conservan el polen para las larvas de abeja. Utilizando la siguiente secuencia de generación, junto con laboratorio y experimentos en el campo, este manuscrito describe protocolos utilizados para probar la hipótesis de que residuos del fungicida alteran el microbioma del polen y datos demográficos de la Colonia, en última instancia conduce a la Colonia pérdida.

Empírico, metagenómica y técnicas computacionales iluminarán los mecanismos por los cuales fungicidas compromiso Pathología Apícola

Transitoria expresión heteróloga de enzimas biosintéticas en las hojas de Nicotiana benthamiana puede desviar fuentes endógenas de 2,3-oxidosqualene hacia la producción de nuevos productos de alto valor triterpeno. Es en este documento se describe un protocolo detallado para rápido (5 días) escala de preparativo de triterpenos y análogos utilizando esta potente plataforma basada en plantas.

Expresión transitoria en Nicotiana Benthamiana las hojas para la producción de triterpeno a escala preparativa

Aquí, utilizamos un método de extracción (PHWE) de agua caliente a presión, que utiliza una máquina de espresso hogar sin modificar para introducir a estudiantes a la química de productos naturales en el laboratorio. Se presentan dos experimentos: PHWE de eugenol y acetyleugenol de dientes y PHWE de seselin y (+)-epoxysuberosin de la planta australiana Correa reflexa.

Extracción de agua caliente a presión empleando (PHWE) para explorar la química de productos naturales en el laboratorio de pregrado

El presente protocolo describe la contaminación de los alcaloides de pirrolizidina (PA) en muestras de té de malezas productoras de PA en jardines de té.

Fuente y ruta de contaminación por alcaloides pirrolizidina en muestras de té

El presente protocolo describe el uso de la tecnología de códigos de barras de ADN para autenticar materiales medicinales de origen vegetal y la planta medicinal Angelica sinensis (Oliv.) Diels fue identificado como un ejemplo.

Aplicación de códigos de barras de ADN para identificar plantas medicinales

En este estudio se compararon los contenidos de polisacáridos de Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi e Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian obtenidos mediante extracción con agua caliente y cuantificados mediante colorimetría de ácido fenol-sulfúrico. También investigamos las actividades antioxidantes in vitro de los polisacáridos de estas dos especies de Hippophae a través de experimentos de eliminación de radicales libres de 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo.

Estudio comparativo sobre el contenido de polisacáridos y las actividades antioxidantes de Hippophae rhamnoides subsp. sinensis e Hippophae gyantsensis

Este manuscrito describe cómo la pantalla para termoestabilizante mutaciones, purificar el transportador de serotonina humano, generar anticuerpos de alta afinidad, y cristalizar el complejo transportador de serotonina-anticuerpo unido a la antidepresivo fármaco S citalopram. Este protocolo puede ser adaptado para el estudio de otros transportadores desafiantes de membrana, receptores y canales.

Termoestabilización, Expresión, purificación y cristalización del transportador de serotonina humano enlazado a<em&gt; S</em&gt; citalopram

Se presenta un protocolo para la extracción completa de lípidos, metabolitos y proteínas de tejidos biológicos utilizando una muestra.

Un método de extracción fraccionada simple para el análisis comprensivo de metabolitos, lípidos y proteínas a partir de una sola muestra

Este protocolo describe una metodología eficiente para la extracción y cuantificación de cafeína en suspensiones celulares de C. arabica L. y un proceso experimental para la evaluación de la actividad enzimática de la cafeína sintasa con el nivel de expresión de el gen que codifica esta enzima.

Extracción de cafeína, la actividad enzimática y la expresión del gen de la sintasa de cafeína de suspensiones celulares de plantas

Aprende a extraer y caracterizar propóleo verde de Taiwán usando etanol como solvente. Este protocolo reproducible permite evaluar la actividad antibacteriana y determinar la calidad del producto natural de forma confiable.

Extracción y análisis de propóleos verde Taiwan

Explorar más videos