Colección Rápida de Volátiles de Fragancia Floral usando una Técnica de Colección Volátil del Espacio de Cabeza para muestreo de desorción térmica GC-MS

Aquí, presentamos un protocolo para recoger los volátiles de fragancia sorpresal de flores en flor, utilizando un procedimiento de muestreo no destructivo.

Debido a que la fragancia floral es fundamental para atraer polinizadores, este método podría utilizarse para comprender mejor o incluso mejorar la polinización de las especies de flores nativas. Con este método, los volátiles de fragancia se muestrean utilizando un método no destructivo con una máquina de fácil transporte. Esta metodología utiliza un muestreo rápido, reduciendo el tiempo de muestreo de dos a tres horas a 10 minutos.

Estos métodos proporcionan una manera de muestrear rápidamente los volátiles producidos por las flores y podrían utilizarse para muestrear volátiles de otros especímenes, como las feromonas de insectos. Para comenzar, seleccione una flor que inicialmente no esté abierta y marque la flor con cinta de bandera para asegurar el muestreo repetido de la misma flor. Hervir las bolsas del horno en agua durante 30 minutos para eliminar los compuestos plásticos residuales.

Para secar, hornee en un horno a 175 grados Centígrados durante 60 minutos. Una vez que las bolsas se hayan secado, añadir una unión de mamparo de polipropileno a cada esquina del extremo cerrado de las bolsas del horno. Enjuague todas las bolsas y tubos con 75% de etanol y déjelos secar al aire.

Luego, hornee las bolsas y los tubos en un horno a fuego lento, entre 74 y 85 grados Celsius durante 30 minutos. Dependiendo de la duración del tiempo de floración, si es posible espere al menos 24 horas después de la floración para recoger la muestra. Cubra la flor seleccionada con una bolsa de horno al horno.

Aprieta la bolsa firmemente con una cremallera de plástico debajo de la flor para evitar que el aire no deseado fluya en la bolsa. El uso de guantes de neopreno estériles, conecte un tubo de la salida de aire del equipo de recogida y conéctelo a una de las uniones de mamparos en la bolsa del horno. En la otra unión de mamparo, coloque un cartucho de filtro de vidrio que contenga adsorbente de polímero poroso.

Conecte un segundo tubo al equipo de recogida en la entrada de vacío. Conecte el extremo del segundo tubo al cartucho del filtro de recogida volátil de vidrio. Encienda la bomba de aire y el vacío al mismo tiempo y ajuste a 0,05 litros por minuto.

El espacio de la cabeza alrededor de la flor está lleno de aire, pero no sobreinflado. El sistema extrae aire de la bolsa a través del filtro, atrapando los volátiles florales. Deje que la máquina funcione durante 10 minutos.

Y luego apague la bomba de aire y el vacío. Desmonte los tubos y el cartucho del filtro de vidrio. Coloque el filtro en un vial de vidrio y atornille una tapa.

Selle el vial con cinta adhesiva de PTFE. Almacene la muestra en un congelador hasta el análisis de GCMS. Repita este proceso con una bolsa de horno vacía para recoger una muestra de aire en blanco como control.

Para replicaciones consistentes de los mismos volátiles, repita la recolección de muestras a la misma hora cada día, ya que algunas flores producen diferentes niveles de fragancia en el transcurso del día. En primer lugar, retire el cartucho de filtro de vidrio del congelador y colóquelo en un GCMS en el puerto del inyector. Para liberar los volátiles del espacio de la cabeza recogidos en el adsorbente de polímero poroso del adsorbente, caliente la trampa de recolección térmica a 220 grados Celsius durante ocho minutos dentro de un flujo de gas helio a 1,2 mililitros por minuto.

Compare los cromatogramas de los volátiles recogidos para identificar picos recurrentes comunes. Después de identificar los volátiles pico, utilice Pherobase para determinar si han sido descritos previamente en fragancias florales. En este estudio, los datos representativos del GCMS se muestran como un cromatograma.

Los picos entre 10 y 15 minutos son volátiles florales. Los volátiles recogidos fueron referenciados en Pherobase para determinar si han sido descritos previamente en una fragancia floral. Por ejemplo, el compuesto número 21, con un tiempo de retención de 10.311 se ha identificado como benzaldehído.

El benzaldehído se puede buscar en Pherobase con una lista de todas las especies de flores, organizadas por familia de plantas, de las que se ha identificado ese compuesto de fragancia. Las especies de orquídeas se muestran aquí, a partir de la cual se ha determinado que el benzaldehído está presente en la fragancia floral. Los métodos anteriores tardaron de dos a cuatro horas por muestra.

El uso de un disolvente para eliminar la muestra del filtro daría lugar a un pico de disolvente en el GCMS. Esto ocultaría los compuestos de cero a 3,5 minutos. Este método permite ver todos los compuestos.