Name: Suero humano Anti-Acuaporina-4 inmunoglobulina G detección por análisis Cell-based (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Aprenda a detectar inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 en suero humano mediante ensayo basado en células. Este método ofrece mayor sensibilidad y especificidad para diagnosticar trastornos del espectro de neuromielitis óptica.

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Los autores agradecemos el apoyo de becas de la Fundación Nacional de Ciencias de China (Nº 31600820), la salud y la Comisión de planificación familiar de la provincia de Jilin (no. 2016Q036) y la ciencia y tecnología de planificación de proyecto de la provincia de Jilin (Nº 20180520110JH).

Este procedimiento fue aprobado por el Comité de ética de la Universidad del primer Hospital de Jilin y se realizó en aproximadamente 1.500 temas.
1. paciente inscripción y recogida de muestras de sangre
<ol><li>Aplicar la detección de laboratorio del suero de que IgG anti-AQP4 en pacientes de la clínica con las principales quejas y los síntomas enumerado a continuación. Realizar exámenes físicos también. Neuritis óptica: pacientes sufren déficits visuales, tales como pérdida de campos visuales y reducción de la agudeza visual. Mielitis aguda: los pacientes pueden presentar con parálisis, déficits sensoriales y disfunción autonómica. Síndrome del área postrema: los pacientes pueden tener síntomas de hipo e inexplicable, náuseas o vómitos. Síndrome de médula oblonga aguda: lesiones del médula oblonga pueden resultar en diferentes síntomas y signos dependiendo de la localización de las lesiones. Narcolepsy sintomático o agudo diencefálico síndrome clínico con lesiones diencefálicas NMOSD típico del MRI. Síndrome cerebral sintomático con NMOSD típicas lesiones cerebrales. Nota: Según los criterios diagnósticos de consenso internacional para NMOSD5, se puede hacer un diagnóstico de NMOSD si el paciente es el suero anti-AQP4 IgG positivo y cuenta con al menos una de las características clínicas fundamentales mencionados anteriormente. Sin embargo, no recomendamos pruebas de IgG anti-AQP4 en pacientes con neuritis óptica solamente.</li>
	<li>
Recogida de muestras de sangre Nota: pacientes no es necesario ser ayuno.<ol>
<li>Dibujar 2-3 mL de sangre venosa en un tubo de colección de sangre vacío de 4 mL.</li>
		<li>Permita que el suero coagule durante 30 min a temperatura ambiente (RT). Nota: Coagulación prolongado puede aumentar niveles séricos debido a la pérdida de plaquetas.</li>
		<li>Centrífuga a 2100 x g por 5 min transferir cuidadosamente el suero a un tubo nuevo.</li>
		<li>Analizar el suero inmediatamente o alícuota y almacenar a -20 ó -80 º C. Nota: Almacenamiento a-20 ° C es para el almacenamiento de meses, mientras que es de-80 ° C para almacenamiento de años.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anti-AQP4 detección del anticuerpo
PRECAUCIÓN: Las muestras y los reactivos del kit utilizado deben considerarse material infeccioso. Reactivos que contienen azida de sodio en el kit son tóxicos. Un diagrama de flujo del Protocolo se proporciona en la figura 1.
<ol><li>
Preparación
	<ol>
<li>Llevar el kit a RT antes del uso. Nota: Guarde el juego a 2-8 ° C.</li>
		<li>Preparar por lo menos 200 mL de tampón de lavado PBS que contenía 0,2% Tween 20. Vierta 100 mL de tampón de lavado en un vaso de precipitados de 500 mL.</li>
		<li>Diluir el suero muestras 10 x tampón de lavado. Preparar los controles positivos y negativos según las instrucciones del distribuidor.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubación de la muestra
	<ol>
<li>Añadir 30 μL las muestras diluidas previamente control positivo y control negativo a los campos de reacción de la bandeja de reactivo (figura 2). Nota: Evitar las burbujas de aire.</li>
		<li>Retire la cubierta protectora en las diapositivas del biochip. Nota: No toque los biochips para evitar el desprendimiento y la contaminación de las células fijas. Mantenga el lado a lado de la diapositiva antes de quitar la tapa.</li>
		<li>La diapositiva del biochip se aplican a la bandeja de reactivo (figura 2). Iniciar una incubación de 30 min a TA. Nota: Cada muestra debe ser una gota individual conectado al biochip correspondiente sin mezclar con otras gotitas.</li>
		<li>Suavemente le enjuagar el portaobjetos biochip una vez con tampón de lavado. Sumerja el portaobjetos de biochips en el vaso de 500 mL con 100 mL de tampón de lavado durante al menos 5 min lugar el vaso en un agitador y si es posible.</li>
		<li>Sacar el portaobjetos de biochip del tampón de lavado. Cuidadosamente Limpie el tampón de lavado residual fuera de los campos de reacción con una toalla de papel. Exponga la diapositiva biochip aire libre 1-2 minutos que se evapore el tampón de lavado residual en el campo de la reacción. Nota: No seque hacia fuera de los campos de reacción. No toque los biochips con toalla de papel.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubación del anticuerpo secundario
	<ol>
<li>Preparar la solución de anticuerpo secundario según las instrucciones del distribuidor.</li>
		<li>Añada 25 μl del anticuerpo secundario fluorescente a los campos de reacción de una bandeja de reactivo limpio.</li>
		<li>La diapositiva del biochip se aplican a la bandeja de reactivo cargada con anticuerpo secundario. Incubar durante 30 min a TA.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Montaje
	<ol>
<li>Derramar el tampón de lavado usado y añadir 100 mL de tampón de lavado fresco en el vaso. Repita el lavado como se describe en los pasos 2.2.4 y 2.2.5.</li>
		<li>Cuidadosamente añadir medio de inclusión a los campos de reacción en una diapositiva de biochip (una gota por campo de reacción). Sello de la diapositiva del biochip con una pieza de vidrio de cubierta. Evitar las burbujas de aire.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Detección de fluorescencia
	<ol>
<li>Encender la lámpara fluorescente del microscopio y precalentamiento para elegir un filtro nm 488 a 15 minutos.</li>
		<li>Software de fotografía abierta. Tomar fotografías de zonas transfected y untransfected de todos los campos de reacción con diferentes aumentos. Primero, tome una foto con 4 aumentos para tener una visión general, luego tomar más fotografías con x 10 y 20 aumentos x. Nota: El protocolo detallado se muestra en la tabla 1. Interpretación de los resultados se discute en la sección de resultados representativos.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. diagnóstico de los pacientes
<ol><li>Si el paciente es el suero anti-AQP4 IgG positivo y muestra al menos una característica clínica central de NMOSD (véase la sección discusión), diagnosticar al paciente con NMSOD5. Sin embargo, si el paciente es anti-AQP4 IgG negativo, una diagnosis de NMOSD puede no ser excluido.</li>
</ol>

<ol><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2 (4), 110(2015).</li>
<li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li>
<li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22in+vitro.Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311(2016).</li>
<li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li>
<li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li>
<li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li>
<li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay%3A+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li>
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<li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica%3A+re-testing+study+in+a+large+population+from+China%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li>
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<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+encephalomyelitis%3A+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134(2018).</li>
<li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+antibody+disease%3A+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li>
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<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li>
<li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Hemos descrito un método ampliamente accesible para la detección de IgG anti-AQP4 en suero humano. IgG anti-AQP4 se relaciona estrechamente con NMOSD y establecer un método de detección de IgG anti-AQP4 confiable es crucial para el diagnóstico clínico de NMOSD. En primer lugar, la IgG anti-AQP4 es específico para NMOSD. Esclerosis múltiple es una enfermedad mediada inmune del sistema nervioso central y comparte muchas similitudes con NMOSD12. Sin embargo, IgG anti-AQP4 es sólo positiva en NMOSD<su...

Suero IgG de AQP4 es un biomarcador diagnóstico base para Neuromielitis optica espectro trastornos (NMOSD)1. El ensayo celular (CBA) es un método de detección de IgG anti-AQP4 ampliamente utilizado con alta sensibilidad y especificidad. Aquí, se presenta un protocolo detallado para el CBA.
AQP4, una proteína de canal de agua, tiene seis unidades que atraviesan la membrana y dos dominios helicoidales rodeando uno acuoso poro2. IgG anti-AQP4 es implicar en la patogenesia de NMOSD mediante el enlace a su objetivo de AQP4, que se encuentra principalmente en el endfeet de astrocitos3. Se ha demostrado que la IgG anti-AQP4 es positiva en aproximadamente dos tercios de NMOSD pacientes4. En los más recientes criterios de diagnóstico internacionales para NMOSD, IgG anti-AQP4 se considera un núcleo biomarcador diagnóstico5. En este sentido, es crucial para establecer un protocolo confiable para la detección de suero humano IgG anti-AQP4 y facilitar el diagnóstico clínico de NMOSD.
Actualmente, varios métodos de detección de IgG anti-AQP4 están disponibles, como CBA, análisis de tejidos, análisis enzima-ligado del inmunosorbente y flujo cytometry6,7. CBA emplea EU90 células, que son transfectadas con AQP4 humana, captar IgG anti-AQP4. La IgG anti-AQP4 capturado es detectada por anticuerpos fluorescentes de secundarios y posteriormente visualizada por microscopía. La acumulación de pruebas ha demostrado que la CBA es más sensible y específico que otros anti-AQP4 IgG detección métodos6,7. Según un meta-análisis, la sensibilidad y especificidad de la CBA se demostró que el 76% y 99%, que fueron superior a base de tejido y análisis de la enzima-ligado del inmunosorbente6. Además, una comparación multicéntrica de diagnóstico análisis de IgG anti-AQP4 fue llevado a cabo7. Un total de 193 estudio temas de 15 centros diagnóstico europeos fueron inscritos7. Se utilizaron cuatro métodos distintos para la detección de IgG del suero anti-AQP47. Se demostró que el CBA fue más sensible y específico que otros métodos7. AQP4 es expresada como dos isoformas principales (AQP4-M1 y AQP4 M23), celular de captura de IgG anti-AQP4 es transfected con AQP4-M1 o AQP4 M23. Sin embargo, qué tipo de célula de captura es mejor sigue siendo controvertido. Una investigación ha apoyado AQP4-M1 base CBA8, mientras que otros han indicado que AQP4 M23 basado en CBA es mejor7,9,10. Sin embargo, AQP4 M23 basado en CBA puede producir resultados falsos positivos debido a la no específica IgG enlace8. Jarius et al.. 11 informó que no hubo ninguna diferencia significativa en las tasas de detección de IgG anti-AQP4 entre M1 de AQP4 y AQP4 M23 basado en CAD.
En Resumen, suero anti-AQP4 IgG es un biomarcador de núcleo para NMOSD. CBA tiene mayor especificidad y sensibilidad que otros métodos de detección de IgG anti-AQP4. Sigue siendo polémico si la AQP4-M1 o AQP4 M23-basado en CBA es mejor. En este artículo, se describe un protocolo detallado para CBA AQP4 M1-basada, que puede aplicar a diagnóstico clínico y estudios de NMOSD.

<table><tbody><tr><td>Anti-acuaporina-4 IIFT</td><td>Euroimmun</td><td>FA 1128-2005-50</td><td>Contiene portaobjetos de biochip recubiertos con células AQP4-M1 transfectadas y no transfectadas de la UE 90, IgG anti-humanos marcadas con fluoresceína, anticuerpo anti-AQP4 como control positivo, muestra de anticuerpos negativos, sal para PBS pH 7.2, Tween 20 y medio de inclusión.&nbsp;</td></tr><tr><td>CellSens Dimension</td><td>OLYMPUS</td><td>N/A</td><td>software de fotografía</td></tr><tr><td>Tubo activador de gel y coágulos</td><td>Mejorar</td><td>la 623040202</td> médica <td>De una empresa china local</td></tr></tbody></table>

suero humano anti-acuaporina-4 inmunoglobulina g detección por análisis cell-based

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Anti-Acuaporina-4 (AQP4) inmunoglobulina G (IgG) es el biomarcador diagnóstico base para trastornos del espectro de Neuromielitis optica (NMOSD). El ensayo celular (CBA) es un método ampliamente utilizado para la detección de IgG anti-AQP4 en suero humano con alta sensibilidad y especificidad. Brevemente, suero IgG anti-AQP4 es captada por células transfected AQP4 que es fijo en el biochip entonces detectado por un anticuerpo secundario marcado con fluoresceína. Microscopía de fluorescencia se utiliza para visualizar la fluorescencia, y la intensidad de fluorescencia es evaluada por al menos dos médicos experimentados. Puede hacer un diagnóstico definitivo de NMOSD basado en la combinación de resultados de detección de IgG anti-AQP4, manifestaciones clínicas y resultados neuroradiological. Según estudios previos, CBA es más sensible y específico que otros métodos de detección de IgG anti-AQP4, y puede ser aplicado al diagnóstico clínico y estudios de NMOSD. El método tiene limitaciones; por ejemplo, todavía carece de una escala internacional para evaluar los títulos de IgG del suero anti-AQP4. Aquí, se describe un protocolo detallado para la detección de IgG anti-AQP4 suero humano utilizando CBA.

Utilizando el procedimiento descrito aquí, IgG específica anti-AQP4 en suero es detectable. Durante el procedimiento, las muestras, un control positivo y control negativo fueron agregados a los campos de reacción, que contienen áreas transfected y untransfected (figura 2). Fluorescencia del control negativo en un área de transfected indica principalmente la Unión inespecífica del anticuerpo secundario a las células transfected en biochips (<strong class="xfig...

Ensayo basado en células es un método ampliamente utilizado para detectar la inmunoglobulina del suero de anti-Acuaporina-4 G. Este método podría aplicarse a diagnóstico clínico y las investigaciones científicas de los trastornos del espectro óptico de Neuromielitis óptica.

Suero humano Anti-Acuaporina-4 inmunoglobulina G detección por análisis Cell-based

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Según los recientes criterios de diagnóstico internacional para los trastornos del espectro de la neuromielitis óptica, anti-AQP4 IgG se considera un biomarcador de diagnóstico central. La detección de IgG anti-AQP4 mediante un ensayo basado en células puede facilitar el diagnóstico clínico. Por lo tanto, el ensayo basado en células es más sensible y específico que otros métodos de detección.Y se puede aplicar tanto al diagnóstico clínico como a los estudios científicos. En primer lugar, lleve las muestras de suero del paciente, el portaobjetos de biochip, el polvo PBS y el TWEEN 20 del kit de ensayo basado en células refrigeradas a la temperatura ambiente. A continuación, prepare más de 200 mililitros de tampón de lavado PBS que contengan 0,2 por ciento de TWEEN 20 para cada diapositiva de biochip.Utilice el tampón de lavado para hacer diluciones en serie de 10 veces de cada muestra de suero. Preparar controles positivos y negativos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Agregue 30 microlitros de diluciones seriales de 10 veces de la muestra, el control positivo y el control negativo, a cinco campos de reacción individuales en la bandeja de reactivos.Sujete el portaobjetos de biochip por sus diapositivas y retire su cubierta protectora sin tocar sus campos de reacción. Coloque el portaobjetos en la parte superior de la bandeja de reactivos e incubar la configuración a temperatura ambiente durante 30 minutos. Enjuague suavemente el portaobjetos biochip con el tampón de lavado.A continuación, sumerja en un vaso de precipitados de 500 mililitros lleno de 100 mililitros del tampón de lavado, y déjelo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Saque el portaobjetos biochip del tampón de lavado. Use una toalla de papel para limpiar cuidadosamente cualquier tampón restante del exterior de los campos de reacción.Deje que el portaobjetos se seque al aire durante uno o dos minutos. En la sala oscura, añada 25 microlitros de anticuerpos secundarios fluorescentes a cada campo de reacción de la bandeja de reactivos. Coloque el portaobjetos en la parte superior de la bandeja de reactivos e incubar la configuración a temperatura ambiente durante 30 minutos.Enjuague suavemente el portaobjetos biochip con el tampón de lavado. A continuación, sumérgelo en un vaso de precipitados de 500 mililitros lleno de 100 mililitros del tampón de lavado fresco, y déjalo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Saque el portaobjetos biochip del tampón de lavado.Use una toalla de papel para limpiar cuidadosamente cualquier tampón restante del exterior de los campos de reacción. Deje que el portaobjetos se seque al aire durante uno o dos minutos. Agregue cuidadosamente una gota del medio de incrustación a cada campo de reacción en la diapositiva del biochip.Por último, selle el portaobjetos biochip con un vidrio de cubierta evitando burbujas de aire y proceda con imágenes. La débil intensidad de fluorescencia del control negativo observado en la zona infectada indica la unión inespecífica del anticuerpo secundario. La comparación entre las intensidades de fluorescencia detectadas del control positivo en las áreas infectadas y no infectadas indica la unión específica del IgG anti-AQP4 a AQP4M1 en las células infectadas.El suero negativo anti-AQP4 IgG muestra patrones de unión similares al control negativo en áreas infectadas y no infectadas. El suero positivo muestra patrones de unión similares al control positivo en áreas infectadas y no infectadas. Las muestras se consideran anti-AQP4 IgG positivas cuando la fluorescencia aumenta heterogéneamente en el área infectada.La intensidad de la fluorescencia está correlacionada con el título de IgG anti-AQP4 en el suero. Las muestras se consideran probablemente positivas cuando sólo un pequeño número de células en el área trans infectada muestran intensidades de fluorescencia detectables. Una muestra debe considerarse como anti-AQP4 IgG negativo cuando su intensidad en la zona infectada es sólo homogéneamente más fuerte que en la zona no infectada.Evitar las burbujas de aire es vital y difícil. Para eliminar las burbujas de aire, utilice primero una pipeta para evitar burbujas de aire en las gotas. En segundo lugar, mientras aplica la diapositiva de biochip a la bandeja de reactivos, primero deje que un lado de la diapositiva toque las gotas, y luego nivele la diapositiva lentamente.Además, no toque los campos de reacción a lo largo del experimento.

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Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video demuestra la caracterización basada en cromatografía líquida de interacción hidrofóbica de conjugados anticuerpo-fármaco. Utilizando una columna de cromatografía basada en ligando de butilo, los conjugados anticuerpo-fármaco se caracterizan mediante interacciones hidrofóbicas con el ligando.

Cromatografía líquida de interacción hidrofóbica dependiente de butilo: una técnica para caracterizar conjugados anticuerpo-fármaco basada en interacciones hidrofóbicas

Este video describe una técnica de inmunoensayo que utiliza perlas magnéticas fluorescentes o microesferas junto con diferentes antígenos para detectar simultáneamente varios isotipos de anticuerpos en una muestra de suero. El ensayo es útil para comprender la seroconversión durante una infección o después de la vacunación.

Ensayo de inmunoperlas multianalitos: una técnica de inmunoensayo basada en flujo para la detección simultánea de múltiples subtipos de anticuerpos en muestras de suero humano

El video muestra un ensayo basado en células para detectar la inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 utilizando un biochip que contiene células no transfectadas y células transfectadas que expresan acuaporina-4. Este método tiene aplicaciones en el diagnóstico de trastornos del espectro de la neuromielitis óptica, confirmados por una fuerte fluorescencia verde en el biochip.

Un ensayo para detectar la inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 sérica

El video muestra un inmunoensayo en papel, que involucra discos de celulosa funcionalizados con amina reticulados con glutaraldehído. La inmovilización covalente de anticuerpos de captura específicos de IgG-Fc, seguida de la introducción de anticuerpos de detección conjugados con inmunoglobulina G y peroxidasa de rábano picante, da como resultado un cambio de color que confirma la presencia de inmunoglobulina G.

Un inmunoensayo en papel para la detección de inmunoglobulina G

Durante los últimos años, los ensayos basados ​​en células vivas se han utilizado con éxito para detectar anticuerpos contra antígenos de superficie y conformacionales. Aquí se describe un método que utiliza el flujo de alto rendimiento citometría permite el análisis de grandes cohortes de pacientes. La detección de nuevos anticuerpos será mejorar el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del sistema inmune-mediada.

Ensayo de alto rendimiento basado en células citometría de flujo para detectar anticuerpos a la N-metil-D-aspartato receptor o dopamina-2 del receptor en suero humano

Aquí se describen dos ensayos para medir la activación del complemento inducida por anticuerpos contra las células rojas de la sangre. La principal ventaja sobre los ensayos actuales es su naturaleza cuantitativa y fácil de interpretar.

Los métodos para la detección cuantitativa de anticuerpos inducida por la activación del complemento en los glóbulos rojos

Este artículo describe un método de microarrays de la proteína simple para perfiles de respuesta inmune humoral a un panel de 7-plex de altamente purificaron antígenos de Clostridium difficile en suero humano. El protocolo puede ampliarse para la determinación de las respuestas de anticuerpos específicos en los preparados de inmunoglobulina intravenosa policlonal.

Un análisis de Microarray de proteínas para la determinación serológica de anticuerpos las respuestas siguientes infección por Clostridium difficile específica de antígeno

Aquí presentamos un método de citometría de flujo basadas en células para detectar anticuerpos neutralizantes u otros factores que interfieren con la absorción celular de terapias de reemplazo de la enzima en una matriz humana, tales como líquido cefalorraquídeo (LCR) o suero humano.

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El método BSelex para identificar y recuperar anticuerpos específicos de antígenos individuales de células mononucleares de sangre periférica humana combina citometría de flujo con PCR de una sola célula y clonación.

Método de cribado de una sola célula para la selección y recuperación de anticuerpos con especificidades deseadas de poblaciones de células B de memoria humana enriquecidas

Presentamos un protocolo para el uso de un microarray proteico construido mediante la impresión de antígenos de la gripe en diapositivas recubiertas de nitrocelulosa para sondear simultáneamente el suero de múltiples anótipos de anticuerpos contra más de 250 antígenos de diferentes cepas de virus, por lo tanto permitiendo la medición de la amplitud de los anticuerpos séricos a través de los subtipos de virus.

Uso de un microarreglo antigonagen antigripal para medir la amplitud de los anticuerpos séricos a través de los subtipos de virus

Aprenda a detectar inmunoglobulina G anti-acuaporina-4 en suero humano mediante ensayo basado en células. Este método ofrece mayor sensibilidad y especificidad para diagnosticar trastornos del espectro de neuromielitis óptica.

Suero humano Anti-Acuaporina-4 inmunoglobulina G detección por análisis Cell-based

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