Protocolo de bajo costo de análisis de la huella y colgante caja de prueba para los ratones aplicada la tensión de retención crónica

Nuestro protocolo mediante el análisis de la marcha es muy útil para determinar si los motores de ratón de los trastornos del movimiento imitan el síntoma del paciente con alteración de la marcha. Por lo tanto, el análisis de la marcha en la prueba de carga de tensión se puede realizar fácilmente, y sin equipos caros, para detectar ciertos fenotipos motores en ratones, sin efectos espontáneos. Antes de iniciar la prueba de comportamiento, registre el peso de cada ratón y use un lápiz de marcado para etiquetar cada cola.

Cuando todos los animales hayan sido pesados y marcados, coloque los ratones en la sala experimental durante al menos 30 minutos, y coloque una caja colgante transparente, de 25 por 25 por 40 centímetros, con una tapa de malla giratoria, en el banco de laboratorio. Cuando los ratones se hayan aclimatada, coloque un ratón en el centro de la tapa de malla y gire cuidadosamente la tapa boca abajo. A continuación, mida la latencia de caída del ratón desde la tapa de malla, antes de devolver el ratón a su jaula de inicio.

Cuando todos los ratones hayan sido probados, coloque un pedazo de papel blanco de 9,9 por 42 centímetros en el banco del laboratorio y coloque una caja de gol oscura en el extremo distal del papel. Coloque otras cajas, aproximadamente de la misma longitud que el papel, a ambos lados de la pista para evitar el escape. Y agregue tinta negra y roja para separar los platos de Petri de 35 mililitros.

Para entrenar a los ratones para el análisis, coloque un ratón en el extremo proximal del papel, frente al cuadro de objetivos, y deje que el ratón camine desde el extremo proximal del papel hasta el cuadro de meta. Cuando el ratón llega a la caja, raspa suavemente al animal, metiendo la espalda y la cola entre la bola del pulgar y los otros dedos, para limitar el movimiento de las extremidades posteriores. Y sumerja los fondos de las extremidades delanteras en tinta roja, y la parte inferior de las extremidades posteriores en tinta negra.

A continuación, vuelva a colocar el ratón en el extremo proximal del papel, frente al cuadro de objetivos, y deje que el ratón camine desde el extremo proximal hasta el cuadro de meta. Después de secar al aire el papel impreso del pie, utilice una regla para obtener tres medidas de la longitud de la zancada, midiendo las distancias entre las mismas partes de las huellas de la pata. Del ancho de la base frontal, dibujando una línea entre huellas delanteras consecutivas, del mismo lado, y midiendo la longitud de la línea vertical desde la almohadilla de la huella frontal, hasta la línea trazada entre las huellas.

Y del ancho de la base posterior, dibujando una línea entre las huellas traseras derechas consecutivas, y midiendo la longitud de la línea vertical desde la almohadilla de la huella trasera izquierda, hasta la línea trazada entre las otras huellas derechas. Para la superposición, mida la distancia entre las almohadillas de las huellas delanteras y traseras. Para preparar un tubo de retención, utilice un taladro cuadrado para hacer 16 agujeros de dos milímetros en un tubo de 50 mililitros a lo largo de las marcas de la escala, y la parte posterior de cada marca de escala.

Cortar la punta del tubo para hacer un agujero de cinco milímetros, para respirar, y hacer un agujero de cuatro milímetros en la tapa del tubo, para la cola. Para la prueba de carga de tensión, raspa un ratón y coloca al animal en la cabeza del tubo de sujeción primero, con las extremidades delanteras confinadas suavemente. Pase la cola a través del orificio de la tapa antes de tapar el tubo.

Y coloque el ratón en la mesa durante dos horas a temperatura ambiente. Al final del período de carga de tensión, retire el ratón del tubo y devuelva al animal a su jaula de origen. Como se observa en estas figuras representativas, los ratones modelo de distonismo de inicio rápido heterocigoto del Parkinsonismo, demuestran longitudes de zancada delantera y posterior significativamente más cortas, que sus compañeros de basura de tipo salvaje a las cuatro semanas de edad.

Los ratones modelo de distonismo de inicio rápido heterocigoto de estrés, también exhiben longitudes de zancada significativamente más cortas de ambas extremidades que las de las familias de basura de tipo salvaje estresadas a las ocho semanas de edad. Las asimetrías de las longitudes de zancada de ambas extremidades no son significativamente diferentes, en ningún grupo de ratones, a cualquier edad. La base frontal y las superposiciones de ambas extremidades también son similares, en todos los grupos, a todas las edades.

La base posterior es significativamente más ancha en estos ratones modelo de pismismo de distonía heterocigota de inicio rápido estresado, que la observada en los animales de tipo salvaje de estrés a las 10 semanas de edad, lo que indica que el estrés causa déficit motor en ratones modelo de disctonismo de inicio rápido heterocigoto De Parkinson. No se observan diferencias significativas en el tiempo de ahorcamiento, entre el tipo salvaje y el mutante, en animales de cuatro a 10 semanas de edad. A las 12 semanas de edad, sin embargo, el tiempo de suspensión de los ratones de tipo salvaje de estrés es significativamente más largo que el de los otros animales, lo que sugiere que el déficit motor en ratones modelo de distonía de inicio rápido heterocigoto Parkinson, se distingue de ratones de tipo salvaje por prueba de restricción en animales mayores.

Coloque el ratón sobre el papel inmediatamente después de que el ratón cuelgue la parte inferior de las extremidades en la tinta para evitar que la tinta se seque antes de la prueba a pie. Se pueden realizar pruebas adicionales para las características emocionales, como campo abierto, más laberinto elevado y prueba de natación completa, para responder si la anormalidad de la marcha resulta de sólo déficit motor. Nuestro protocolo se puede utilizar para explorar la susceptibilidad al estrés, cambiando el número y la duración de la carga de tensión, y comparando fenotipos del motor entre varias condiciones de carga.

Nuestro protocolo se puede utilizar para explorar la susceptibilidad al estrés cambiando el número y la duración de las cargas de tensión, y comparando fenotipos del motor entre varias condiciones de carga.