Inducción y puntuación de la enfermedad de injerto-versus-huésped en un modelo de murina xenógeno y cuantificación de células T humanas en tejidos de ratón utilizando PCR digital

Este protocolo describe cómo inducir la enfermedad de xenoinjerto contra huésped, o xenoGVHD, y cómo cegar y estandarizar la puntuación clínica para garantizar resultados consistentes. El modelo xenoGVHD proporciona un método in vivo para probar terapias inmunosupresoras contra células T humanas en lugar de murinas, mejorando la traducción de estos estudios a la clínica. Demostrar el procedimiento será Amara Seng, una estudiante graduada de mi laboratorio.

Un día antes de la inyección, coloque ratones de ocho a 12 semanas de edad, no obesos de ciencia clásica, o NSG, ratones en una jaula de pastel esterilizado, e irradiga a los ratones en una fuente de cesio-137 con una dosis total de 150 centigrayrays, con una rotación lenta para asegurar una irradiación uniforme. Luego, coloque los ratones en jaulas limpias en un gabinete de bioseguridad estéril durante la noche. A la mañana siguiente, recoja suficiente sangre humana sana para aislar 1,1 veces 10 a las siete células mononucleares de sangre periférica, o PBMC, por ratón, y diluya la sangre heparinizada en un volumen igual de 2%suero bovino fetal, o FBS, en PBS.