Name: Medición de cortisol en Koala (Phascolarctos cinereus) Piel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 s
Description: Aprende a medir cortisol en piel de koala (Phascolarctos cinereus) para evaluar estrés crónico. Este método sensible y reproducible utiliza metanol como solvente óptimo de extracción.

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Este trabajo fue apoyado a través de fondos de investigación para Edward Narayan a través de la Western Sydney University, School of Science and Health. Los autores agradecen a Jack Nakhoul por su ayuda con el procesamiento de muestras.

Este proyecto se llevó a cabo bajo estrictas pautas de cuidado animal y humano. La ética animal fue otorgada por la Western Sydney University (A12373). Además, la Universidad De Sídney presentó y aceptó una evaluación del riesgo de laboratorio y un formulario de bioseguridad y radiación para llevar a cabo esta investigación de forma segura (B12366).
NOTA: Las muestras de piel de Koala para este proyecto se obtuvieron del Adelaide Koala and Wildlife Hospital, ubicado en 282 Anzac Highway, Plympton South Australia. La piel fue tomada de un koala que había sido ingresado en el hospital y eutanasiado debido a sus graves lesiones. El koala fallecido había sido almacenado en un congelador dentro de una bolsa de cadáveres poco después de la muerte. Después de retirar el koala fallecido de la bolsa del cuerpo, 1,2 g de piel se asembocaó de la nuca utilizando cortadoras de animales estándar. El pelaje se asemhara lo más posible de la piel, con el fin de garantizar que la piel no se cortara. Una vez afeitado, el koala fallecido fue puesto de nuevo en la bolsa del cuerpo y colocado en el congelador. El pelaje se colocó entonces en una bolsa hecha de papel de aluminio y se almacena por debajo de -20 oC. En tránsito, el pelaje se mantuvo a temperatura ambiente, y a su llegada al laboratorio, el pelaje se almacenó a -80 oC.
1. Extracción de cortisol de piel de Koala
<ol><li>Retirar el pelaje del almacenamiento a -80 oC y dejar tiempo para descongelar.</li>
	<li>Pesar el pelaje en una balanza de precisión analítica de laboratorio.</li>
	<li>Coloque 60 mg de piel en un tubo centrífugo de 1,5 ml prepesado y etiquetado y repita hasta que se llenen 18 tubos. NOTA: Se utilizaron 18 submuestras de piel para este estudio de validación.</li>
	<li>Añadir 1 ml de isopropanol de grado 100% de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) a cada tubo utilizando una pipeta.</li>
	<li>Muestras de vórtice para 30 s.</li>
	<li>Cuele cada muestra con un tamiz de microprecisión de 0,5 mm para lograr la separación del líquido y el pelaje.</li>
	<li>Deseche el líquido en un contenedor de residuos.</li>
	<li>Coloque cada muestra de piel en un bote de pesaje de plástico etiquetado, luego colóquelo en un desecador al vacío, deje que el pelaje se seque durante 3 días.</li>
	<li>Una vez completamente seca, coloque cada muestra en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml etiquetado.</li>
	<li>Coloque cada muestra en un molino de cuentas con 3 perlas de acero cromado (3,2 mm) y pulverizar durante 2 minutos a 30 batidos por segundo.</li>
	<li>Pipeta 1,5 ml de la primera técnica de extracción (100% etanol de grado analítico) en tubos de microcentrífuga de 6 1,5 ml que contienen la muestra de piel.</li>
	<li>Realice lo mismo para el metanol de grado 100% analítico y el isopropanol de grado analítico 100% hasta que se llenen dieciocho tubos de microcentrífuga de 1,5 ml.</li>
	<li>Tapar cada tubo de microcentrífuga de 1,5 ml e incubar a temperatura ambiente (RT) con pulsación constante utilizando una coctelera durante 3 h.</li>
	<li>Retire y estrese las muestras con un tamiz de microprecisión de 0,5 mm.</li>
	<li>Transfiera el líquido a un nuevo tubo de microcentrífuga de 1,5 ml etiquetado con una pipeta, asegurándose de que el pelaje se deseche adecuadamente.</li>
	<li>Extracto de disolvente completamente seco bajo una corriente de vapor N2 bajo un armario de humos.</li>
	<li>Reconstituir el extracto de muestra seca utilizando 400 ml de tampón de ensayo (composición proporcionada en el kit comercial de cortisol; ver Tabla de materiales)y 100 l de etanol de grado analítico 100%. NOTA: Los extractos de muestra se pueden almacenar en -80 .</li>
</ol>2. Controles internos
<ol><li>Para hacer controles, hacer un grupo de muestras extraídas con altos niveles hormonales. Para hacer esta piscina, seleccione muestras de animales con exposición conocida al estresante. Por ejemplo, seleccione muestras de koalas que han sido rescatadas de traumaambiental, ya que generalmente mostrarán altos niveles de hormona cortisol6.<ol>
<li>Para hacer la agrupación de extractos, tome 20 ml de extracto de cada muestra (n a 10) hasta obtener un volumen total de 200 l. La piscina de extractos se puede almacenar en -80 C hasta ensayos. Ejecute el grupo en cada ensayo como controles internos bajos o altos (consulte el paso 2.2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para el ensayo, utilice la piscina para realizar existencias para controles bajos y altos que se unen al 70% (C1) y 30% (C2), respectivamente. Obtener el factor de dilución para los puntos de unión del 30% y 70% del gráfico de paralelismo para el extracto contra el estándar de cortisol (Figura1). Utilice el búfer de ensayo para la dilución del grupo de muestras. Por ejemplo, utilice 60 ml del extracto de la piscina y 60 ml de búfer de ensayo para la dilución 1:2. NOTA: Para el extracto de metanol, el punto de unión del 30% estaba limpio, mientras que el punto de unión del 70% era aproximadamente 1:2 según la Figura1. Por lo tanto, estos proporcionaron el factor de dilución para los controles internos (C1 y C2 respectivamente) para ejecutarse dentro del ensayo.</li>
</ol>3. Análisis de cortisol en extractos de piel de koala
<ol><li>Utilice un kit comercial de cortisol (Tablade materiales)y configure la placa de tira de 96 pozos que incluye las muestras, controles, estándares de cortisol, pozos de unión no específicos y pozos de unión máximos siguiendo las instrucciones del proveedor. Utilice la hoja de diseño de placas proporcionada en el folleto del kit para enumerar las posiciones de las muestras, controles y estándares en el mapa de placas. NOTA: Se recomienda que todas las muestras, controles y estándares se ejecuten por duplicado para permitir la precisión de los resultados.</li>
	<li>Prepare muestras. Siga la extracción de la hormona de piel (sección 1) para obtener 100% de piel de koala extraída de metanol.</li>
	<li>Preparen reactivos. Siga el procedimiento descrito en el kit comercial de cortisol para preparar los reactivos, incluidos (1) tampón de ensayo, (2) tampón de lavado y (3) normas (composiciones proporcionadas en el kit de cortisol, Tabla de materiales).</li>
	<li>De conformidad con las instrucciones proporcionadas en el kit de cortisol, pipeteo de 50 ml de muestras o estándares en pozos en la placa. Pipet 75 l y 50 l de tampón de ensayo en los pozos de unión no específicos (NSB) y los pozos de unión máxima (estándar B0 o cero), respectivamente.</li>
	<li>Añadir 25 l de conjugado de cortisol a cada pocal utilizando un pipeta repetidor. A continuación, pipetee 25 l del anticuerpo cortisol en cada poca, excepto los pozos NSB. Toque suavemente los lados de la placa para asegurarse de que los reactivos estén bien mezclados.</li>
	<li>Cubra la placa con el sellador de placas y agite a temperatura ambiente durante 1 h (a velocidad lenta) utilizando un agitador orbital.</li>
	<li>Retire el sellador de placas y aspire la placa del pozo lavando cada pocador con 300 ml de tampón de lavado 4 veces.</li>
	<li>Seque la placa tocando la placa en toallas absorbentes limpias.</li>
	<li>Pipeta de 100 l de sustrato de tetrametilbenzadina (TMB) (composición proporcionada en el kit de cortisol, Tabla de materiales)a cada pocal.</li>
	<li>Coloque el sellador de placas en la placa del pozo e incubar a RT durante 30 minutos.</li>
	<li>Pipetear 50 l de solución de tope para cada poca.</li>
	<li>Coloque la placa de pozo en un lector de placas capaz de leer 450 nm.</li>
	<li>Para calcular la concentración final de la hormona, derive la concentración final de cortisol de piel en ng/mg de la muestra multiplicando la concentración de la hormona pg/ml con el volumen final del extracto (0,5 ml) y dividiendo por la masa de la muestra de pelaje (60 mg).</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Hay una serie de estudios que utilizan una serie de técnicas para detectar cortisol en piel de mamífero. Este estudio presenta resultados para la detección de cortisol en pieles recogidas de un koala salvaje expuesto al estrés antropogénico actual. Este estudio innovador utilizó el pelaje para probar cuáles de los tres disolventes comúnmente utilizados son los mejores en la extracción de cortisol, una medida de estrés crónico, de piel de koala. Los resultados mostraron que el 100% de metanol era el disolvente recomendado...

Los ecosistemas australianos sostienen la vida humana mediante la prestación de servicios como alimentos y fibra entre muchas otras interacciones dinámicas1. Irónicamente, es la actividad humana la que actúacomo el motor dominante de la interrupción del ecosistema a través del cambio de biodiversidad 2. La fragmentación del hábitat, conocida como el proceso de dividir grandes hábitats continuos en pequeños parchesde tierra, aislados entre sí, es el principal cambio de biodiversidad antropogénica que amenaza los ecosistemas australianos 2. La fragmentación del hábitat modifica la estructura y diversidad de la composición de lasespecies en cualquier área dada, reduciendo así el área de hábitat necesaria para que estas especies mantengan poblaciones viables 2. El resultado de esto es una mayor competencia entre especiespor recursos como alimentos, combustible, fibra y agua 3. La destrucción de los ecosistemas australianos a través del cambio de biodiversidad está teniendo consecuencias catastróficas en muchas especies nativas australianas1.
La especie marsupial más icónica de Australia, el koala (Phascolarctos cinereus), depende de que los ecosistemas australianos permanezcan sanos para su supervivencia4. La introducción del Asentamiento Europeo provocó una rápida disminución de las poblaciones australianas de koalas, ya que fueron sacrificados por sus pelts en busca de beneficios en un gran comercio de exportación5. Esta práctica fue prohibida en la década de 1980 y las poblaciones de koalas fueron capaces de estabilizar5. Sin embargo, el crecimiento exponencial de la población humana ha dado lugar a que esta especie compita por gran parte de su hábitat, y su supervivencia está de nuevo bajo amenaza6. Según la Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza (UICN), todas las poblaciones de koalas australianas están catalogadas como vulnerables a la extinción con una tendencia poblacional decreciente7. Esta lista se atribuye a la incertidumbre en torno a losparámetros de población relevantes y a la marcada variación de las tendencias de población de esta especie 7. Como los animales más emblemáticos y endémicos, los koalas benefician en gran medida a la economía australiana a través del turismo (Oficina de Medio Ambiente y Patrimonio 2018). Una estimación sugiere que el turismo relacionado con el koala ha generado aproximadamente 9.000 puestos de trabajo y contribuye entre $1.1 y $2.500 millones a la economía (Oficina de Medio Ambiente y Patrimonio de la NSW 2018). La eliminación de cualquier especie tiene el potencial de ser catastrófica, y se puede ver en el declive constante de la fauna nativa australiana6. Además, la economía de Australia sentirá las ramificaciones si las poblaciones de koalas australianos siguen disminuyendo al ritmo de6.
Se sugiere que la prevalencia de la muerte y laenfermedad en respuesta a la fragmentación del hábitat es el resultado del estrés crónico 8. Ya veinticuatro especies marsupiales han sido declaradas extintas en Australiadebido a la fragmentación del hábitat, con koalas siguiendo una tendencia similar 8. La complejidad de la fragmentación del hábitat y los sistemas biológicos es sinérgica, pero se puede desempaquetar mediante el análisis de la respuesta al estrés6. En general, cualquier perturbación en un entorno natural de los animales activa una compleja cascada de eventos neurohormonales, conocidos como respuesta de "lucha o huida"9,10. Esta respuesta al estrés es un proceso que comienza en el cerebro donde se activa el eje hipotalámico-hipófisis-adrenal (HPA)11. Un componente del cerebro llamado hipotálamo libera hormona liberadora de corticotrofina (CRH), que luego señala a la hipófisis anterior para liberar la hormona adrenocorticotrófica (ACTH)11. Esto a su vez estimula la secreción de glucocorticoides de la médula suprarrenal. El cuerpo circula glucocorticoides a través de la sangre, lo que desvía el almacenamiento de glucosa del glucógeno y moviliza la glucosa del glucógeno almacenado11. Esta cascada de eventos neurohormonales es la respuesta utilizada por el animal para hacer frente a estímulos impredecibles11. Sin embargo, cuando los glucocorticoides están siendo liberados y permanecen elevados durante un período prolongado de tiempo, el animal se considera que está experimentando estrés crónico12,13. Este proceso implica desviar la energía de otras funciones corporales corporales, ya que es necesaria para la producción continua de glucocorticoides13. Como resultado, el estrés crónico puede prohibir el crecimiento, la reproducción y la inmunidad, siendo todos los rasgos de aptitud clave necesarios para la supervivencia14.
Medir la producción de glucocorticoides de un animal es un indicador común utilizado para determinar si el animal está experimentando o no estrés fisiológico15. Para ello, los glucocorticoides se pueden medir en plasma sanguíneo, suero, saliva, orina o heces16. Sin embargo, la evidencia sugiere que el cabello es un indicador mucho más eficaz de estrés crónico, a diferencia de los16antes mencionados. Esto se debe a que el cabello se piensa para incorporar hormonas transmitidas por la sangre durante su fase de crecimiento; es relativamente estable; y cualquier cortisol detectado en el cabello refleja el estrés fisiológico experimentado durante el período de crecimiento del cabello, que puede ser semanas hasta los meses16. Además, cualquier colección de cortisol debe ser no invasiva para minimizar el estrés asociado con la captura y manipulación16. Sin embargo, cualquier estrés experimentado durante este evento no afectaría los niveles de glucocorticoides en el cabello16. Ha habido muchos estudios que exploran el dominio del uso del cabello para medir el estrés a largo plazo en un número de animales, e incluyen estudios sobre renos, osos pardos, monos rhesus, muskoxen, y osos marrones17,18, 19 , 20 , 21. El cortisol capilar generalmente se extrae lavando primero la muestra para asegurar que el sudor y el cortisol derivado del sebo depositados en la superficie del cabello no se extraigan con cortisol y luego pulverizan la muestra en un batidor de cuentas22. Después del lavado, la muestra debe secarse para asegurar la evaporación completa22. Por último, utilizando un disolvente, la muestra se puede extraer y reconstituir para facilitar el ensayo de cortisol22. El disolvente más común utilizado para extraer cortisol de piel es el metanol21,23; sin embargo, hay algunos estudios que utilizan etanol e isopropanol en sus técnicas de extracción de cortisol. Por ejemplo, un estudio que utilizó etanol tuvo éxito para extraer cortisol del líquido amniótico humano24. Además, un estudio que utilizó isopropanol fue exitoso para extraer cortisol del cabello humano y las uñas25,26. Por esta razón, este estudio probó los tres disolventes (metanol, etanol e isopropanol) para determinar cuál fue el más exitoso para la extracción de cortisol de muestras de piel de koala.
El objetivo principal de este estudio fue utilizar técnicas actuales para validar una técnica óptima de extracción hormonal que se utilizará como una medida no invasiva de cortisol de piel de koala. Esto se logró mediante el ensayo de tres disolventes de extracción (metanol, etanol e isopropanol). Hemos planteado la hipótesis de que el metanol será el disolvente óptimo utilizado para extraer cortisol de piel de koala porque es el disolvente recomendado de extracción por Arbor ensayo kits de cortisol27.

<table><tbody><tr><td>Tubos de centrífuga</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>Perlas de acero al cromo</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>3</td></tr><tr><td>Kit de cortisol</td><td>Ensayos de eje</td><td>K003-H1W</td><td>Fabricado en Michigan, EE. UU.</td></tr><tr><td>Kit de inmunoensayo enzimático DetectX Cortisol</td><td>Ensayos de árbol</td><td>K003-H5</td><td>Utilizado por primera vez para pruebas de cortisol en piel de koala</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td> de grado HPLC <td>n/a</td><td>n/a</td> Metanol de <td>grado HPLC</td></tr><tr><td></td><td>n/a</td><td>n/a</td> Micropipeta de <td>grado HPLC</td></tr><tr><td></td><td>n/a</td><td>n/a n/</td><td>a</td></tr><tr><td>Tamiz de microprecisión</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>0,5 mm</td></tr><tr><td>Lector de microplacas</td><td>Bio Radi</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Lavadora de microplacas</td><td>Bio Radi</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Agitador orbital</td><td>Bio Line</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Barco de pesaje de plástico</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Sellador de placas</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Balanza de precisión</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr><tr><td>Mezclador de vórtice</td><td>Eppendorf</td><td>n/a</td><td>n/a</td></tr></tbody></table>

medición de cortisol en koala (phascolarctos cinereus) piel

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Los métodos óptimos de extracción hormonal utilizados para medir el estrés en animales a través de los tipos de muestra sin ser siempre los mismos. La icónica especie marsupial de Australia, el koala (Phascolarctos cinereus), se enfrenta a una exposición prolongada a factores de estrés inducidos por antropogénicos y la evaluación del estrés crónico en las poblaciones silvestres está justificada con urgencia. Una de las maneras más eficaces de medir el estrés crónico es a través del análisis de la hormona glucocorticoides cortisol en el cabello o el pelaje, ya que apoya las respuestas fisiológicas y conductuales. Este estudio de validación de laboratorio tiene como objetivo probar las técnicas actuales para validar un método óptimo de extracción hormonal que se utilizará como una medida no invasiva de cortisol en piel de koala. Se reconoce que el uso de técnicas no invasivas para medir las hormonas del estrés se prefiere sobre las técnicas tradicionales, invasivas debido a sus puntos de vista prácticos y éticos ideales. Además, es comparativamente más fácil adquirir piel de koalas que adquirir muestras de su sangre. Este estudio utilizó muestras de piel de koala adquiridas del Adelaide Koala and Wildlife Hospital para ejecutar una serie de técnicas de extracción de hormonas en un intento de validar un método óptimo de extracción de cortisol. Los resultados mostraron que el 100% de metanol proporcionaba la extracción de disolvente más óptima en comparación con 100% etanol o 100% isopropanol basado en resultados de paralelismo. En conclusión, este método de extracción de cortisol de piel de koala proporcionó un ensayo no invasivo fiable que podría utilizarse para estudiar el estrés crónico en koalas.

La detección de ensayos de metabolitos hormonales de interés se determina mediante paralelismo. Utilizando una curva de paralelismo, el punto de unión del 50% también determina el factor de dilución de la muestra en la curva estándar (Figura1). Como se muestra en el gráfico de paralelismo (Figura1), los extractos de 100% etanol y 100% isopropanol no proporcionaron desplazamiento paralelo contra el estándar de cortisol. Sin embargo, el extracto de metanol 100% proporcionó desplazamiento p...

Presentamos un protocolo para determinar el disolvente de extracción óptimo para medir el cortisol del pelaje de koala. Los disolventes utilizados en este protocolo son metanol, etanol e isopropanol. Determinar un disolvente de extracción óptimo ayudará a medir de forma fiable el pelaje para determinar el impacto del estrés crónico en las koalas.

Medición de cortisol en Koala (Phascolarctos cinereus) Piel

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Este es un método novedoso para la evaluación de la hormona glucocorticoides, cortisol, de piel de koala. Proporciona un nuevo biomarcador para la evaluación del estrés crónico en koalas. La principal ventaja de esta técnica es que es un método altamente sensible y reproducible con un tiempo de respuesta bastante rápido entre la preparación de la muestra y el ensayo hormonal.Esta técnica permite la evaluación cuantitativa del estrés crónico en koalas, que es una herramienta de gestión clínica muy útil. Me ayuda con este procedimiento Dylan Fox, un estudiante de posgrado de mi laboratorio. Para comenzar este procedimiento recuperar el pelaje del almacenamiento a menos 80 grados Celsius y dejar que se descongele a temperatura ambiente.A continuación, pese el pelaje en una balanza de precisión analítica de laboratorio. Coloque 60 miligramos de pelaje en un tubo centrífuga prepesado y etiquetado de 1,5 mililitros y repita esto hasta que se llenen 18 tubos. Con una pipeta, agregue un mililitro de isopropanol de grado 100%HPLC a cada tubo.Vórtice las muestras durante 30 segundos. Colar cada muestra con un tamiz de micropreistro de 0,5 mililitros para lograr la separación del líquido y el

cortisol-measurement-in-koala-phascolarctos-cinereus-fur

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

El cortisol (CORT) se acumula en el eje del pelo cada vez mayor de los seres humanos y los primates no humanos. Se describen métodos para la extracción y el análisis de CORT cabello con alta precisión y sensibilidad. Medición de pelo CORT está particularmente bien adaptado para la evaluación de estrés crónico durante períodos de semanas a meses.

Extracción y análisis de cortisol de Derechos Humanos y de mono de pelo

Hay una necesidad de una evaluación no invasiva de la tensión. En este trabajo se describe un protocolo simple que utiliza imágenes térmicas para detectar una respuesta significativa en la temperatura del ojo-región herrerillos silvestres a un factor de estrés aguda leve.

Imágenes Térmicas para estudiar el estrés de forma no invasiva en ilimitados Birds

La actividad suprarrenal puede evaluarse en la especie equina mediante el análisis de las heces en busca de metabolitos de corticosterona. El método ofrece una opción no invasiva para evaluar los patrones a largo plazo tanto en caballos domésticos como en caballos criados en libertad. Este protocolo describe el inmunoensayo enzimático implicado y la validación bioquímica asociada.

Análisis de glucocorticoides fecales: Monitoreo suprarrenal no invasiva en los équidos

Análisis de concentración de cortisol de cabello proporciona una alternativa a las medidas tradicionales de cortisol; sin embargo, para recoger muestras del pelo de los americanos africanos, los científicos necesitan ser culturalmente informada y competente. El propósito de este protocolo es demostrar una técnica culturalmente informada para recoger muestras de pelo para el análisis de cortisol de afroamericanos.

Recoger muestras de pelo para cabello análisis de Cortisol en americanos africanos

El propósito de este artículo es identificar los cambios en los niveles de estrés después de la visita a tres entornos diferentes y describir los métodos utilizados para identificar los niveles de estrés basados en medidas de cortisol salival, amilasa y un autoinforme psicológico Instrumento.

Medición de los niveles de estrés biofísico y psicológico después de la visita a tres lugares con diferentes niveles de naturaleza

En este estudio, presentamos un protocolo para la extracción de cortisol de la aleta y la mandíbula de las especies de esturión. Los niveles de cortisol de aleta y mandíbula se examinaron más adelante comparando dos disolventes de lavado seguidos de ensayos ELISA. Este estudio pilotó la viabilidad del cortisol maxilar como un indicador de estrés novedoso.

Extracción de cortisol de las matrices de aleta de esturión y mandíbula

Este protocolo demuestra cómo proporcionar un enriquecimiento ambiental práctico y significativo para los cerdos que se alojan en pisos de listón durante las diferentes etapas de sus vidas, y cómo recoger muestras de saliva de una manera no invasiva para la medición de concentraciones de cortisol, como biomarcador para el estrés agudo.

Proporcionar un enriquecimiento ambiental significativo y medir el cortisol de saliva en cerdos alojados en pisos de lama

Este protocolo describe el método para determinar la lipólisis basal y estimulada por forskolina en almohadillas de grasa inguinal obtenidas de dieta normal de chow (NCD) o dieta con alto contenido de grasa (HFD) ± capsaicina alimentada con ratones de tipo salvaje. Como índice para la lipólisis, la liberación de glicerol se midió a partir de almohadillas de grasa adiposa inguinal.

Medición de la lipólisis estimulada por Basal y Forskolin en las almohadillas de grasa adiposa inguinal

El objetivo del protocolo es preparar hidrolizado de queratina de plumas de pollo por hidrólisis alcalina y enzimática y para probar si la adición de hidrolizado de queratina en una base para ungüentos cosméticos mejora la función barrera de la piel (aumentan la hidratación y disminuye la pérdida transepidérmica de agua). Las pruebas se realizan en hombres y mujeres voluntarios.

Preparación de hidrolizado de queratina de plumas de pollo y su aplicación en cosméticos

Las mitocondrias contienen varias enzimas flavin dependientes que pueden producir especies reactivas del oxígeno (ROS). Monitoreo ROS liberación de sitios individuales en la mitocondria es difícil debido a reacciones secundarias no deseadas. Presentamos un método fácil y económico para la evaluación directa de tasas nativas para la liberación ROS con flavoenzymes purificada y microplacas fluorometría.

Medida simultánea de superóxido de Hidrógeno peróxido y la producción de NADH deshidrogenasas mitocondriales Flavin-que contiene

Aprende a medir cortisol en piel de koala (Phascolarctos cinereus) para evaluar estrés crónico. Este método sensible y reproducible utiliza metanol como solvente óptimo de extracción.

Medición de cortisol en Koala (Phascolarctos cinereus) Piel

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