Inducción de la insuficiencia ventricular derecha por constricción pulmonar de la arteria y evaluación de la función ventricular derecha en ratones

Este método proporciona una técnica útil para estudiar los mecanismos de la insuficiencia ventricular derecha. Las principales ventajas de esta técnica son ahorrar tiempo y aumentar la tasa de éxito de la cirugía. Esta técnica puede ayudarnos a imitar la hipertrofia y el fracaso del corazón derecho en los seres humanos por constricción de la arteria pulmonar para crear una sobrecarga de presión de pulmonato.

Este método se puede aplicar a la técnica de constricción aórtica transversal y puede proporcionar información sobre las complicaciones posteriores al trasplante de corazón y los estudios de enfermedades cardíacas congénitas. El procedimiento lo demostrará Xiaoxia Huang, un técnico de mi laboratorio. Antes de comenzar el procedimiento, pase una pieza de sutura de seda trenzada de 6-0 a través de una aguja de calibre 25 desmontada de una jeringa de un mililitro.

Utilice fórceps hemostáticos para doblar la aguja 90 grados. A continuación, doblar una aguja de calibre 22 120 grados. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del de la de la parte superior, coloque un ratón anestesiado en la posición supina en una almohadilla de calentamiento de 37 grados Celsius, y asegure los incisivos con una sutura.

Fija las extremidades con cinta adhesiva y usa crema depilatoria para eliminar el cabello del cuello al proceso de xifoide. Desinfectar la piel expuesta con yodo secuencial y 75%toallitas de etanol, y utilizar alicates puntiagudos para extraer la lengua ligeramente. Elevar la mandíbula con una espátula hecha a medida para exponer la glotis, y utilizar una fuente de luz fría para dirigir la inserción cuidadosa de una cánula de tráquea hecha a medida a través de la glotis.

Ajuste los parámetros del mini respirador y ajuste la frecuencia respiratoria a 150 respiraciones por minuto y un volumen de marea de 300 microlitros. A continuación, conecte el tubo y el ventilador para confirmar que la cánula se ha insertado correctamente antes de fijar la cánula con cinta adhesiva. Para abrir el pecho, haga una incisión cutánea de aproximadamente 10 milímetros paralela a la segunda costilla.

Usa tijeras y pinzas de codo para separar los músculos pectorales mayores y menores por encima del segundo espacio intercostal. Cuente las costillas desde el ángulo esternal para identificar el segundo espacio intercostal y utilice tijeras para abrir este espacio. Luego separa rotly el parénquima y el timo hasta que el tronco pulmonar sea visible.

Para restringir la arteria pulmonar, usa las pinzas de codo para separar sin rodeos el tronco pulmonar y la aorta ascendente. Utilice la aguja de cierre de 90 grados para pasar la sutura a través del tejido conectivo entre el tronco pulmonar y la aorta ascendente. Coloque la aguja de relleno de 120 grados en el tronco pulmonar.

Utilice la sutura de seda trenzada 6-0 para ligar la aguja de relleno al tronco pulmonar, extrayendo la aguja de relleno inmediatamente después de que se observe el llenado del cono pulmonar. Corte ambos extremos de las suturas y continúe observando el llenado del cono pulmonar para evaluar si hay una constricción. A continuación, evaluar el reflejo del pedal del animal de nuevo para asegurar el éxito de la ligadura y cerrar el pecho y la piel con una sutura de nylon 5-0.

Al menos tres días después de la cirugía, aplica gel de ultrasonido en el tórax del animal constricto de la arteria pulmonar. Coloque una sonda de 30 megahercios en el pecho en una posición de 30 grados en sentido contrario a las agujas del reloj relativa a la línea parasternal izquierda, mientras orienta la muesca en la dirección caudal. Regular los ejes Y y X bajo el modo B hasta que la válvula mitral, la aorta y la cámara del ventrículo izquierdo sean claramente visibles.

Gire la sonda de 30 a 40 grados en su eje Y hacia el pecho. Regular los ejes Y y X hasta que el cono pulmonar sea claramente visible y coloque el cursor en la punta de los foliolos de la válvula pulmonar para medir la velocidad máxima del flujo. Seleccione el color y pw y coloque la línea discontinua de onda pulsada paralela a la dirección del flujo sanguíneo.

Ajuste el lado izquierdo de la almohadilla de modo que sea más alto que el lado derecho, manteniendo la sonda orientada 30 grados al horizonte a lo largo de la línea axilar interior derecha, con la muesca apuntando en la dirección caudal. Regular los ejes X e Y hasta que el ventrículo derecho sea claramente visible. A continuación, haga clic en modo M dos veces para mostrar la línea del indicador.

Ocho semanas después de la cirugía, intubar el ratón como se ha demostrado, y hacer una incisión bilateral de 1,5 centímetros por debajo del proceso de xifoide a través del diafragma para abrir la cavidad torácica. Corte las costillas para exponer el corazón y use una aguja de calibre 23 para penetrar en la pared libre del ventrículo derecho. Presione suavemente el punto de punción con un hisopo de algodón para detener cualquier sangrado y utilice la punta del catéter para perforar el ventrículo a través de la herida.

Cuando la curva es estable, regular la punta del catéter hacia el tracto de salida del ventrículo derecho. Haga clic en seleccionar y analizar para registrar la presión arterial sistólica y la presión diastólica del ventrílico derecho, la tasa máxima de aumento, la constante de tiempo exponencial de relajación y la frecuencia cardíaca durante 10 minutos. Luego transfiera el catéter del corazón a un recipiente de solución salina.

En comparación con el grupo Sham, se obtiene una mayor velocidad máxima, un mayor gradiente de presión y un mayor espesor de la pared del ventrículo derecho a partir de la vista de eje largo parasternal a las ocho semanas después de la cirugía en el grupo de constricción de la arteria pulmonar. Además, la función sistólica del ventrículo derecho se reduce significativamente en el grupo de constricción de la arteria pulmonar, en comparación con el grupo Sham, ocho semanas después de la cirugía. El grupo de constricción de la arteria pulmonar tiene una mayor presión del ventrículo derecho en la sistóleo y la diástole, y el índice de contractilidad se reduce en comparación con el del grupo Sham.

El ventrículo derecho Tau y la tasa máxima de aumento también son mayores en el grupo de constricción de la arteria pulmonar que en el grupo Sham. Demostrar que la disfunción del ventrículo derecho se induce en ratones después de ocho semanas de banda de la arteria pulmonar. Las pruebas hemodinámicas invasivas en el ventrículo derecho revelan que la frecuencia cardíaca permanece estable antes y después del control del catéter.

En comparación con el grupo Sham, las dimensiones del ventrículo derecho se agrandan significativamente, y el peso del ventrículo derecho es mayor. Además, el examen histológico muestra que la fibrosis cardíaca en el área cubierta por cardiomiocitos es mayor en el grupo de constricción de la arteria pulmonar que en el grupo Sham. La parte mayormente importante del procedimiento es asegurar que la arteria pulmonar se separe correctamente y completamente.

Para evitar una separación incorrecta, el punto de separación debe estar cerca de la rama de la arteria pulmonar, donde el tejido conectivo entre las arterias será más suelto. Con este método, hemos proporcionado un enfoque más conveniente y eficiente para inducir la hipertrofia ventricular derecha. Generalmente, el procedimiento quirúrgico y los enfoques de evaluación son muy seguros.