Angiografía por fluorescencia para la evaluación de la perfusión del aneurisma y la paciencia de la arteria parental en modelos de aneurisma de rata y conejo
24 de julio de 2019
Presentamos un protocolo para evaluar eficientemente la perfusión del aneurisma y la patencia de los recipientes del aneurisma de las paredes laterales en ratas y conejos, utilizando la videoangiografía por fluorescencia a base de fluoresceína (FVA). Con un valor predictivo positivo del 92,6%, es un método simple pero muy eficaz y económico sin necesidad de equipos especiales.
Este método es una técnica fiable y fácil para visualizar el flujo sanguíneo en tiempo real en aneurismas y vasos y se puede utilizar en diferentes modelos animales. La principal ventaja de esta técnica es que facilita la visualización del flujo sanguíneo durante la cirugía sin necesidad de ningún dispositivo caro o cirugía extensa. Antes de comenzar el procedimiento, utilice cinta negra para fijar un filtro de paso de banda verde para que actúe como un filtro de excitación en una linterna.
Y compruebe que la linterna sólo emite luz azul. Equipe la cámara con un filtro de paso de banda verde para que funcione como un filtro de luz de emisión. Ahora sólo la luz verde debería ser capaz de pasar.
A continuación, desinfecte el espacio de trabajo con una solución desinfectante y cubra la mesa con cortinas estériles para evitar la contaminación. Para realizar la angiografía por vídeo con fluoresceína o FVA en un conejo confirme que el animal anestesiado no responde al estímulo del dolor antes de colocar al conejo en la posición supina. Afeitar el cuello alrededor del músculo esternocleidomastoico.
Enfoque la cámara en la arteria diseccionada y utilice papel de aluminio para cubrir una jeringa de cinco mililitros que contenga 100 miligramos/mililitro de fluoresceína sódica. Apague las luces tanto como sea posible e inyecte 0,3 mililitros/kilogramo de fluoresceína sódica por vía intravenosa en el puerto de inyección del catéter. A continuación, enjuague la jeringa con 0,5 mililitros de solución salina para asegurarse de que se ha inyectado todo el tinte.
E inmediatamente iluminar el campo quirúrgico con la linterna modificada. Tan pronto como se encienda la luz, comience a filmar con la cámara modificada. El flujo sanguíneo debe ser visible dentro de los pocos segundos de la inyección.
Para el análisis macroscópico del vaso después de la angiografía resecar los aneurismas y el complejo de la arteria madre en animales de seguimiento, o realizar la confirmación visual del flujo observando el llenado del aneurisma y/o bypass después de la eliminación de los clips temporales. En este estudio representativo, FVA pudo realizarse en ocho de cada 10 conejos. De los 16 aneurismas identificados en los ocho conejos, dos aneurismas demostraron perfusión persistente de la arteria madre, mientras que la FVA identificó cinco casos con perfusión residual.
14 aneurismas del conejo no mostraron ninguna perfusión residual macroscópica, mientras que 11 fueron detectados posteriormente usando FVA. La perfusión residual se observó macroscópicamente en 23 de 48 ratas, y las otras 25 ratas no mostraron signos macroscópicos de perfusión residual. 22 de los 23 aneurismas sin perfusión macroscópica fueron confirmados usando FVA.
En general, se podría confirmar 25 de 27 casos combinados de conejo y rata, lo que resulta en un valor predictivo positivo del 92,6% una tasa de sensibilidad del 100% y una especificidad del 94,1%Las cosas más importantes al intentar este procedimiento son diseccionar los vasos adecuadamente y trabajar en una habitación oscura al administrar y visualizar fluoresceína. Este procedimiento se puede utilizar en cualquier modelo animal para evaluar el flujo sanguíneo en cualquier vaso visible.
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Descripción general
Este artículo presenta un protocolo para evaluar la perfusión del aneurisma y la permeabilidad vascular mediante angiografía por video fluorescente basada en fluoresceína (FVA) en modelos animales (ratas y conejos). Se destaca que el método tiene un alto valor predictivo positivo del 92,6 %, y se enfatiza su simplicidad y rentabilidad, ya que no requiere equipos especiales.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología vascular
- Imagen de fluorescencia
Antecedentes
- Los aneurismas representan desafíos clínicos importantes en cuanto a la evaluación de la perfusión.
- Los métodos existentes pueden requerir equipos costosos y procedimientos quirúrgicos extensos.
- La angiografía por video con fluoresceína ofrece una solución para la visualización en tiempo real.
- Es notable la versatilidad de la técnica en diferentes modelos animales.
Objetivo del estudio
- Desarrollar un método confiable para visualizar el flujo sanguíneo en aneurismas.
- Evaluar la permeabilidad vascular sin necesidad de equipo costoso.
- Proporcionar un protocolo sencillo que pueda implementarse ampliamente en la investigación.
Métodos Utilizados
- La angiografía con video fluorescencia (FVA) fue la plataforma principal utilizada.
- Los animales empleados incluyeron ratas y conejos, evaluando específicamente el flujo sanguíneo durante y después de la cirugía.
- No se mencionaron flujos de trabajo de multiómica.
- El procedimiento incluyó anestesiar a los animales, preparar el sitio quirúrgico, inyectar sodio de fluoresceína y utilizar un sistema de cámara modificado.
- Los pasos clave consistieron en garantizar una iluminación mínima durante la visualización y un momento preciso en la captura de imágenes tras la inyección.
Resultados principales
- El método visualizó con éxito el flujo sanguíneo en 8 de 10 conejos e identificó casos significativos de perfusión residual.
- De 16 aneurismas evaluados, 11 fueron detectables mediante FVA que no habían sido observados macroscópicamente.
- En ratas, se confirmó perfusión residual en 22 de 23 aneurismas sin signos macroscópicos visibles.
- En general, una combinación de 25 de 27 casos totales mostró confirmación de perfusión utilizando FVA.
Conclusiones
- Este procedimiento demuestra una gran capacidad para evaluar eficazmente el flujo sanguíneo en aneurismas.
- La aplicación de FVA facilita la visualización quirúrgica en tiempo real y la evaluación del estado de perfusión.
- Las implicaciones se extienden hacia una mejor comprensión y técnicas de evaluación de afecciones vasculares en entornos de investigación.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La angiografía por video con fluorescencia (AVF) proporciona un método de bajo costo y sin necesidad de equipos para la evaluación en tiempo real de la perfusión del aneurisma y la permeabilidad de la arteria madre en modelos preclínicos. Su alta sensibilidad y especificidad permiten detectar de forma confiable la perfusión residual, facilitando la identificación temprana de oclusiones incompletas en modelos de aneurisma. Esta capacidad contribuye a la reducción de riesgos mecanicistas en intervenciones vasculares al ofrecer una medición cuantitativa y reproducible para la evaluación preclínica de la eficacia de dispositivos y técnicas quirúrgicas.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite la evaluación de hipótesis terapéuticas mediante la visualización de la dinámica del flujo sanguíneo en modelos de aneurisma.
- Valor operativo: Apoya la validación de dianas funcionales mediante la evaluación directa y en tiempo real de la perfusión, sin necesidad de equipos de imagen costosos.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Valor científico: Proporciona resultados cuantitativos y binarios de perfusión (presente/ausente) que pueden estandarizarse entre estudios.
- Valor operativo: Facilita la disponibilidad del ensayo mediante una inyección sencilla de fluoresceína y un sistema modificado de linterna/cámara, promoviendo la reproducibilidad.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Valor científico: Conecta el descubrimiento con la validación preclínica al confirmar la oclusión del aneurisma y la integridad de la arteria principal en ratas y conejos.
- Valor operativo: Proporciona una métrica de perfusión trasladable que se alinea con los puntos finales clínicos para la evaluación del tratamiento del aneurisma.
Integración de la Línea de Producción y Flujo de Trabajo
La AVF se integra en el continuo de descubrimiento, desde la validación temprana del modelo hasta la evaluación preclínica, y ofrece una lectura basada en la perfusión que orienta las decisiones de continuar o no antes de la optimización del fármaco líder.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis al revelar la perfusión residual que podría indicar un fallo del tratamiento en modelos de aneurisma.
- Detección: Permite la evaluación estandarizada y reproducible de la permeabilidad vascular en múltiples animales y puntos temporales.
- Análisis: Genera resultados claros de perfusión (macroscópicos y confirmados mediante FVA) que permiten comparaciones entre grupos control e intervención.
- Investigación Traducional: Conecta los datos preclínicos de perfusión con su relevancia clínica mediante la validación de la oclusión en modelos de aneurisma anatómicamente relevantes.
- Reutilización Empresarial: Representa una técnica independiente de plataforma y de baja barrera, aplicable en diversos programas de investigación vascular.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva en los modelos de aneurisma al detectar la perfusión que pasa inadvertida en la inspección macroscópica.
- Valor operativo: Requiere únicamente fluoresceína sódica, una linterna y filtros para cámara, lo que posibilita un uso de bajo costo y alto rendimiento.
- Valor estratégico: Reduce el riesgo biológico en programas preclínicos al mejorar la precisión de la evaluación de la oclusión.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo de las intervenciones en aneurismas basándose en resultados de perfusión validados.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia en disección microquirúrgica de vasos y manejo del modelo de aneurisma.
- Necesita un ambiente oscurecido y una linterna modificada con filtros de excitación azul y emisión verde.
- Exige la estandarización de la dosis de fluoresceína (0.3 mL/kg) y la irrigación con suero salino para obtener una señal constante.
- Implica consideraciones de adaptación para diferentes tamaños de vasos y anatomía específica de la especie.
- Se limita a vasos superficiales o accesibles debido a la dependencia de la penetración de luz externa.
