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DOI: 10.3791/60060-v
Kristi J. Warren1,3, Todd A. Wyatt2,3,4
1Department of Internal Medicine,University of Utah, 2Research Service,VA Nebraska Iowa Health Care System, 3Department of Internal Medicine,University of Nebraska Medical Center, 4Department of Environmental, Agricultural & Occupational Health,University of Nebraska Medical Center
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En este protocolo, los linfocitos se colocan en la cámara superior de un sistema de transmigración, separados de la cámara inferior por una membrana porosa. La quimiocina se añade a la cámara inferior, lo que induce la migración activa a lo largo de un gradiente de quimiocina. Después de 48 h, los linfocitos se cuentan en ambas cámaras para cuantificar la transmigración.
La transmigración de linfocitos es una característica importante de cualquier respuesta inmunitaria. Por lo tanto, este protocolo es significativo porque permite a un investigador evaluar la movilidad de los linfocitos en un sistema in vitro bien definido. La principal ventaja de esta técnica es que se pueden evaluar varias quimioquinas para determinar su eficacia de inducir la migración en células definidas recientemente, como el grupo dos células linfoides innatas, o ILC2.
Una segunda ventaja es que los inhibidores o terapias biológicas destinadas a bloquear determinadas vías de quimiocina pueden ser probados por este método antes de hacer experimentos más caros con animales. Comience por extirpar pulmones y bazos de ratones machos y hembras tratados con ova eutanizado usando de dos a tres animales por grupo. Colocar los tejidos extirpados en tubos de disociación separados según el tipo de tejido y el sexo animal.
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