Aislamiento de intact eyeball para obtener tejido superficial ocular integral para el examen histológico y la inmunohistoquímica

Nuestro laboratorio se centra en el desarrollo ocular y las enfermedades. Este protocolo describe un método para eliminar el cráneo y los huesos orbitales secuencialmente de la cabeza del ratón diseccionada. Dejando los párpados, la superficie ocular, la lente y la retina juntos en una sola pieza. El protocolo beneficiará a los oftalmólogos que estén interesados en la didáctica de la superficie ocular. Soy Dianlel Guo, para contar la técnica con una lucha probable al tratar de evitar el daño del globo ocular, mientras disecciona los huesos faciales. La principal ventaja de esta materia de disección es que la integridad de la lámina epitelial de la superficie ocular está bien conservada y las diferentes partes de la superficie ocular pueden ser examinadas por histología o inmunosurete en una sola sección. Asegúrese de cortar todos los huesos pequeños y desechos de los tejidos blandos. Razón, causará marcas cicatriciales en la sección del tejido de lo contrario. Después de eutanasiar el ratón, usa un par de tijeras rectas para cortar la cabeza y bisect a lo largo de la línea media sagital comenzando en el hueso intraparietal rostralmente a la nasal. Coloque cada mitad de la cabeza bisecado en un plato limpio de petri y use tijeras afiladas para cortar la mandíbula y la lengua. Libere el nervio óptico cortándolo del cerebro antes de la ubicación del quiasmo óptico. Y eliminar todos los tejidos cerebrales, incluyendo el bulbo olfativo, que está unido a la pared del cráneo. Ahora todos los tejidos restantes tendrán todo el cráneo y los huesos orbitales asociados con el globo ocular. Lave las partes restantes con PBS para limpiar cualquier sangre y restos de cabello. Pre-fijar los tejidos colocándolos en un tubo de 50 mililitros que contiene 4%paraformaldehído y girándolos a temperatura ambiente. Una vez completada la prefijo, lave rápidamente la cabeza diseccionada en PBS tres veces para eliminar aún más los pelos rotos y los fijadores. Coloque el tejido en una placa de petri de 10 centímetros y corte el cráneo en tres partes a lo largo de los planos indicados en la figura uno del protocolo de texto. El globo ocular y la cavidad están ocultos en la parte media del cráneo bajo huesos efimoides, frontales y maxilares. Utilice dos pares de fórceps rectos número cuatro para despegar el hueso etinido y exponer completamente los huesos frontales y maxilares. Luego, divida geográficamente la superficie del cráneo en cuatro áreas. Inserte la punta de los fórceps curvos horizontalmente en cada área para eliminar los huesos maxilares y frontales secuencialmente. Después de esto, los huesos lagrimales y yugales subyacentes serán expuestos. Retire los dos huesos y los músculos y grasas subcutáneas asociados que rodean el globo ocular. Recorta el globo ocular con los párpados y la piel unidos en un pequeño bloque de forma cuadrada para reducir el volumen tisular y facilitar la orientación del tejido al incrustarlo. Coloque el globo ocular y los tejidos asociados de nuevo en 4%paraformaldehído y continúe fijando durante la noche a las 4