Estandarización de un método no letal para caracterizar el estado reproductivo y el desarrollo larvarios de los mejillones de agua dulce (Bivalvia: Unionida)

Nuestro protocolo estandariza las metodologías para muestrear las branquias de los mejillones de agua dulce gravídica y caracterizar las diferentes etapas del desarrollo larvario, al mismo tiempo que proporciona una base de datos en línea para la presentación de datos y la exploración del almanaque de Gravidity. La técnica no es letal y no afecta sustancialmente a la capacidad de un mejillón femenino para permanecer gravid después de tomar muestras de las branquias, por lo tanto, el método se puede aplicar tanto a especies comunes como protegidas. Esta metodología se puede aplicar a organismos caracterizados en las familias Bivalvia de Hyriidae, Margaritiferidae y Unionidae, que se distribuyen en ecosistemas de agua dulce en todos los continentes excepto en la Antártida.

Es importante abrir mejillones con cuidado, recopilar información de ubicación y asegurarse de que los datos se recopilan correctamente. Si las identificaciones son cuestionables, uno debe tomar fotos y ponerse en contacto con los expertos apropiados. Comience por recoger mejillones vivos del campo utilizando métodos visuales táctiles.

Evalúe la gravedad femenina mediante la inspección visual durante o después de la recolección haciendo palanca suavemente para abrir las válvulas lo suficiente como para mirar dentro y ver si las branquias están infladas. Si utiliza un espécimen conservado de un museo, realice una inspección visual abriendo las válvulas e inspeccionando las branquias. Para probar el contenido de branquias, prepare un tubo de recolección de microcentrífuga de plástico de 1,5 mililitros con aproximadamente un mililitro de agua o etanol, dependiendo de la rapidación de la evaluación.

Desenvuelva una aguja estéril de punta biselada de 30 calibres en una jeringa de 10 mililitros, desenrosque la tapa para exponer la aguja y empuje el mango de la jeringa hacia abajo para que el tapón esté en la línea de cero mililitros. Recoge a la hembra gravid y abre suavemente las dos válvulas usando las puntas de los pulgares. Utilice la punta de la aguja para penetrar suavemente un solo tubo de agua de la branquia marsupial inflada, luego saque suavemente el contenido de la branquia con la punta biselada de la aguja.

Almacenarlos en el tubo de microcentrífuga preparado para su posterior evaluación. Registre información relevante, como la identificación de especies de género, la información de ubicación de la recopilación y el estado de la gravedad en la hoja de datos y registre un identificador único en cada recipiente de recolección para garantizar registros de datos precisos durante el transporte. Oriente correctamente el mejillón para fotografiar la válvula adecuada para la validación de la identidad, árguela y tome la fotografía, asegurándose de incluir el tubo de muestra etiquetado en la imagen.

Para evaluar el contenido de la branquia, transfiéralas a un plato de Petri y llene el fondo del plato con agua. Revuelva suavemente el plato para recoger el contenido en el centro para una vista más concentrada de la muestra. Coloque el plato Petri bajo un microscopio de disección para evaluar la muestra y, si es posible, tome una fotografía de la muestra bajo el microscopio.

Registre los resultados de las etapas de desarrollo que están presentes en cada muestra de branquias. Si las hembras están meditando larvas en múltiples etapas del desarrollo, informe cada etapa del desarrollo observada en una muestra dada. Si se identifican glochidias completamente desarrolladas y no se utilizó etanol para la preservación, evalúe su viabilidad añadiendo un cristal de cloruro de sodio a un subconjunto de gotas de la muestra de branquias.

Glochidia viable responderá abriendo y cerrando sus válvulas o simplemente cerrándolas desde una posición abierta. Informe de cualquier glochidia probada con sal con una T al final de la designación cuando se registren datos. Para informar de los datos, acceda a la página FMGA o a la aplicación móvil y registre los resultados en el formulario de entrada de datos mediante menús desplegables y campos de entrada de texto.

Para grandes conjuntos de datos preexistentes, póngase en contacto con los autores de la hoja de cálculo de plantilla. Introduzca los datos registrados en los encabezados de columna apropiados, teniendo en cuenta que cada fila de la hoja de cálculo representa observaciones de una muestra de branquias de un individuo gravid, luego envíe los resultados y se agregarán a la base de datos de FMGA después de ser validados por un administrador, que puede ponerse en contacto con el recopilador para solicitar más detalles o fotos. La base de datos FMGA compila toda la información enviada y permite al usuario visualizar datos de gravididad temporal para todas las especies de la base de datos.

El almanaque de gravididad de mejillón de agua dulce es una herramienta de investigación diseñada para estandarizar la recopilación de datos de gravididad al tiempo que facilita futuros esfuerzos de investigación, conservación y recuperación. El protocolo de muestreo de branquias se evaluó etiquetando y recapturando a las hembras a intervalos mensuales durante todo el año. Aunque los tamaños de las muestras en el estudio son desiguales entre las especies, los resultados ponen de relieve las aplicaciones beneficiosas y prácticas de este protocolo.

El calendario de gravididad para Villosa lienosa muestra que las hembras gravíditas que meditan glochidia completamente desarrollada se encontraron en casi todos los meses del año, excepto en agosto, cuando sólo se encontraron hembras que meditaban masas de huevo. Las hembras Hamiota australis fueron encontradas no gravid en julio, agosto y diciembre. Una mayor proporción de las hembras estaban meditando glochidia completamente desarrollada en enero y febrero y en octubre y noviembre.

No se encontraron individuos de Elliptio pullata criando glochidia completamente desarrollada, aunque las hembras estaban meditando masas de huevos de mayo a junio. Sólo una hembra Strophitus williamsi fue encontrada y recapturada tres veces. Esta hembra fue encontrada meditando glochidia completamente desarrollada en marzo, no gravid en mayo, reportó gravid en junio, y huevos inquietos en agosto.

Las hembras de Villosa vibex que crían glochidia completamente desarrollada se encontraron entre febrero y junio. Los mejillones de agua dulce son un grupo de organismos altamente en peligro. Esta metodología es importante porque proporciona una forma no letal de evaluar las características reproductivas de las especies en peligro.

Es fundamental manejar los mejillones con cuidado. Las condiciones ambientales, como la temperatura del agua y los flujos de los arroyos, se pueden medir en el campo para determinar qué condiciones desencadenan el desove y el desarrollo larvario en los mejillones de agua dulce. La recopilación de datos de gravididad temporal para todas las especies de mejillones de agua dulce puede ayudar a los estudios en epidemiología, morfología glochidial, historia de la vida, filogenética, propagación y translocación.