Name: Infección crónica, aguda y reactivada por VIH en modelos de ratón inmunodeficientes humanizados (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprende a establecer modelos de infección crónica, aguda y reactivada por VIH en ratones inmunodeficientes humanizados. Este método permite estudiar la dinámica viral y respuestas inmunitarias en entornos preclínicos.

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Este trabajo fue apoyado por los fondos internos de la división clínica del IHV a JCZ.

<ol><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+in+translational+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunology. 7, 118-130 (2007).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Se han logrado importantes avances en el desarrollo de cepas de ratón inmunodeficientes para la humanización, con una serie de opciones diferentes que se pueden utilizar según el interés de la investigación1. Aquí se proporciona un protocolo general para la humanización de ratonesnulos de cadena NS y cepas genéticamente similares que se emplearán en tres modelos diferentes para el estudio de la infección por VIH. En el primer enfoque experimental, los ratones recién nacidos irradiados s...

El modelo de ratón humanizado NOD/SCID/interleukin (IL)-2-chain-chain null (en adelante, huNS -cadenanula)ha sido ampliamente utilizado para el estudio de la patogénesis de infecciones, autoinmunidad y cáncer, así como para estudios preclínicos de fármacos y terapias basadas en células humanas1,2. Estos ratones se basan en un fondo diabético no obeso (NOD), con la mutación scida y la mutación dirigida en el locus de cadena del receptor IL-2 (cadena común para IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21), que inducen un deterioro grave en el desarrollo de células de ratón T-, B- y natural killer (NK)1. Por lo tanto, apoyan el injerto de tejido humano, humano CD34+ células madre hematopoyéticas (HSC), y células mononucleares de sangre periférica humana (PPBM)3,4,5. Además, la expresión transgénica de factores hematopoyéticos humanos, como el factor de células madre (SCF), el factor estimulante de colonias de granulocitos/macrorófagos (GM-CSF), y la IL-3 promueve el injerto de las poblaciones mieloides humanas6,7,8.
Para los estudios sobre el VIH, se han descrito varios modelos de ratónnulo de cadena huNS, que difieren en la tensión del ratón, el tipo de células humanas utilizadas, el tipo de tejidos para el injerto y el origen de las células (es decir, sanos vs. Donante infectado por el VIH)9,10. La cepa original, sin embargo, es ampliamente utilizada debido a los altos niveles de injerto de células humanas y replicación viral después de la infección con una cepa de referencia del VIH11,12,13. Cepas similares de ratón inmunodeficientes con expresión transgénica de factores hematopoyéticos humanos (p. ej., NOG-EXL o NSG-SGM3) o con implantes de hígado humano y tejidos de timo (ratones de médula ósea-hígado-timo [BLT]) son útiles para evaluar el papel de las poblaciones mieloides en la respuesta inmune anti-VIH, los efectos del VIH en estos tejidos y su participación como reservorios virales14,15. Además, algunas cepas con expresión transgénica de moléculas de antígeno leucocito humano (HLA), así como ratones BLT, se pueden utilizar para estudiar la respuesta de las células T a la infección por VIH16,17.
En general, en estos ratones, la humanización depende del origen celular, la vía de entrega (intraperitoneal, intrahepática, intravenosa, intracardiaca) y la edad del ratón en el momento del injerto18,19,20. En cuanto al origen celular, se puede inyectar en ratones recién nacidos o jóvenes CD34+ HSC derivados de la sangre del cordón umbilical, el hígado fetal o la sangre periférica movilizada3,21. Además, los ratonesnulos de cadena adulta pueden ser humanizados por la inyección de PBMC (en este caso, conocido como ratonesnulos de cadena hu-PBL-NS), permitiendo la circulación temporal de estas células en la sangre, órganos linfoides secundarios y tejidos inflamados22,23,24.
Aquí se describe un protocolo detallado para el establecimiento de modelos de ratónnulo de cadena huNS para el estudio de la infección por VIH. El primero es el modelo crónico, en el que los CD34+ HSC humanos derivados de la sangre del cordón umbilical de un donante sano se inyectan en ratones recién nacidos, seguido de una infección con una cepa de VIH de referencia después de 14 semanas de reconstitución del sistema inmunitario humano. Este modelo permite la monitorización de ratones durante un máximo de 36 semanas después de la infección. El segundo modelo es un modelo agudo, en el que los PMAC derivados de un donante sano se inyectan en ratonesnulos adultos de cadena NS, seguidos de una infección con una cepa de VIH de referencia después de 3 semanas de expansión de células T humanas en el ratón. Por último, el tercer modelo es el modelo de reactivación, en el que se inyectan PAPI derivados de un donante infectado por el VIH bajo terapia antirretroviral supresiva (TAR) en ratonesnulos adultos de cadena NS. En este caso, un entorno libre de drogas permite la reactivación viral y el aumento de la carga viral. Los dos últimos modelos permiten la monitorización hasta 9 semanas después del injerto.
En general, estos tres modelos son útiles para estudios virológicos, estudios preclínicos de nuevos fármacos y la evaluación de los efectos de la infección por VIH en la respuesta inmunitaria global. También es importante considerar que el uso de ratones humanizados infectados por el VIH requiere la revisión y aprobación por parte del Comité Institucional de Bioseguridad (IBC), así como por el Comité Institucional de Cuidado y Uso animal (IACUC) antes de cualquier experimento. Esto garantiza que el estudio siga todas las regulaciones institucionales internas y externas para el uso de material biológico peligroso y el manejo humano de animales experimentales.

<table><tbody><tr><td>0. Tubos de microcentrífuga de 5 ml</td><td>Neptune</td><td>3735.S.X</td><td></td></tr><tr><td>1. Tubos de microcentrífuga de 5 ml</td><td>Neptune</td><td>3745.S.X</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Pipetas serológicas</td><td>stellar sceintific</td><td>VL-4090-0010</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 15 ml Stellar</td><td>scientific</td><td>T15-600</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Pipetas serológicas</td><td>stellar sceintific</td><td>VL-4090-0025</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Pipetas serológicas</td><td>stellar sceintific</td><td>VL-4090-0005</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 50 ml</td><td></td><td>Tampón de lisis Stellar scientific T50-600</td><td></td></tr><tr><td>ACK</td><td>Calidad biológica</td><td>118-156-101</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas de preparación de alcohol</td><td>Fisher scientific</td><td>06-669-62</td><td>Clon estéril</td></tr><tr><td>de CD3 antihumano UCHT1</td><td>Biolegend</td><td>300439</td><td>APC clon conjugado</td></tr><tr><td>antihumano CD4 OKT4</td><td>Biolegend</td><td>317420</td><td>AF488 conjugado</td></tr><tr><td>clon antihumano CD45 2D1</td><td>Biolegend</td><td>368522</td><td>BV421 conjugado</td></tr><tr><td>clon CD8 antihumano SK1</td><td>Biolegend</td><td>344710</td><td>PerCP-Cy5.5 conjugado</td></tr><tr><td>Gabinete Biosafaty nivel 2</td><td></td><td></td><td>Si es posible conectado a un quimeny exauste cuando se manipula Isoflurano</td></tr><tr><td></td><td>Bonnet Fisher scientific</td><td>17-100-900</td><td>Tapón de un solo uso para protección básica</td></tr><tr><td>Cavicide</td><td>Metrex</td><td>13-1000</td><td>Desinfectante de superficies</td></tr><tr><td>CD34+ células Lonza</td><td></td><td>2C-101</td><td>Tantos viales disponibles de un solo donante</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Beckman</td><td>65-6KR</td><td></td></tr><tr><td>Tarro transparente</td><td>Amazon</td><td>77977</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla</td> <td>de gasa de algodónFisher scientific</td><td>22-415-468</td><td>Batas</td></tr><tr><td>de laboratorio desechables estériles</td><td>Fisher scientific</td><td>19-472-422</td><td></td></tr><tr><td>Microtubos de EDTA</td><td>Greiner bio-one</td><td>450480</td><td></td></tr><tr><td>Mascarilla</td><td>Fisher scientific</td><td>17-100-897</td><td></td></tr><tr><td>FACS solución de lisis</td><td>BD</td><td>340202</td><td></td></tr><tr><td>FBS premium HI</td><td>Atlanta biologicals S1115OH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE health one</td><td>17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>Citómetro</td><td></td><td></td> de flujo Utilizamos tubos de citometría <td>de flujo FACS Aria II</td></tr><tr><td>Falcon</td><td></td><td>352054</td><td>5 ml de poliestireno y BaL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> VIH de fondo redondo <td>Preparado en nuestras instalaciones centrales uQUANT</td></tr><tr><td>PBMC</td><td></td><td></td> humanos <td>Voluntarios VIH positivos y negativos</td></tr><tr><td>Infrarrojos almohadilla térmica</td><td>Venet scientific</td><td>DCT-25</td><td>Almohadilla térmica temporal para animales pequeños</td></tr><tr><td>Isentress (Raltegravir)</td><td>Merck</td><td>NSC 0006-0227061</td><td>Medicamento antirretroviral para tratar el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)-Inhibidor de la integrasa</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Henry Schein</td><td>NDC 11695-6776-2</td><td></td></tr><tr><td>Mark I Irradiador</td><td></td><td></td><td>Equipo perteneciente a la Universidad de </td></tr><tr><td>Maryland Micropipetas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etiquetas de oreja de ratón</td><td>National Band & Etiqueta empresa</td><td>1005-1L1</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de extracción de sangre Natelson</td><td>Fisher scientific</td><td>02-668-10</td><td></td></tr><tr><td>NOG-EXL</td><td>Taconic</td><td>HSCFTL-13395-F</td><td></td></tr><tr><td>Ratones NSG</td><td>Jackson</td><td>5557</td><td>Tiempo hembras preñadas para el injerto de CD34 y juveniles para el injerto de PBMCs</td></tr><tr><td>NSG-SGM3</td><td>Jackson</td><td>13062</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído 16%</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>100-10-023</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri</td><td>Fisher scientific</td><td>08-757-28</td><td></td></tr><tr><td>Quantistudio Máquina qPCR</td><td>Thermo</td><td>QS3</td><td></td></tr><tr><td>Reservorios de reactivos</td><td>Costar</td><td>4870</td><td></td></tr><tr><td>RPMI media 1640 1X</td><td>Gibco</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Zapata fundas</td><td>Fisher scientific</td><td>17-100-911</td><td></td></tr><tr><td>Guantes desechables estériles</td><td>Microflex</td><td>SUF-524</td><td></td></tr><tr><td>SuperScript II Síntesis de primera hebra SuperMix</td><td>Invitrogen</td><td>10080-400 Síntesis de</td><td>ADNc</td></tr><tr><td>Jeringas 28-G x 1/2</td><td>BD</td><td>329-461</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas 29-G x 1/2</td><td>BD</td><td>324-702</td><td></td></tr><tr><td>Truvada (Emtricitabina y Tenofovir</td><td>Gilead</td><td>NDC 61958-0701-1</td><td>Medicamento antirretroviral para tratar el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)-Inhibidor de la transcriptasa análoga nicleósido</td></tr><tr><td>Azul de tripano</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td>Recuento de células y viabilidad</td></tr><tr><td>Vick Vaporub</td><td>Salud escolar</td><td>43214</td><td>Pomada a base de mentol y eucalipto</td></tr><tr><td>Grado de biología molecular del agua</td><td>Calidad biológica</td><td>351-029-131</td><td></td></tr></tbody></table>

infección crónica, aguda y reactivada por vih en modelos de ratón inmunodeficientes humanizados

Chronic, Acute, and Reactivated HIV Infection in Humanized Immunodeficient Mouse Models

Los ratonesnulos de cadena NOD/SCID/IL-2 humanizados recapitulan algunas características de la inmunidad humana, que pueden ser explotadas en la investigación básica y preclínica sobre enfermedades infecciosas. Aquí se describen tres modelos de ratones inmunodeficientes humanizados para estudiar la dinámica de la infección por VIH. La primera se basa en la inyección intrahepática de CD34+ células madre hematopoyéticas en ratones recién nacidos, lo que permite la reconstitución de varias células confinadas de sangre y tejido linfoide, seguida de una infección con una cepa de VIH de referencia. Este modelo permite la monitorización de hasta 36 semanas después de la infección y por lo tanto se llama el modelo crónico. El segundo y el tercer modelo se conocen como modelos agudos y de reactivación, en los que las células mononucleares de sangre periférica se inyectan por vía intraperitoneal en ratones adultos. En el modelo agudo, las células de un donante sano se injertan a través de la vía intraperitoneal, seguida de una infección con una cepa de VIH de referencia. Por último, en el modelo de reactivación, las células de un donante infectado por el VIH bajo tratamiento antirretroviral se injertan por vía intraperitoneal. En este caso, un entorno libre de drogas en el ratón permite la reactivación de virus y un aumento de la carga viral. Los protocolos proporcionados aquí describen el enfoque experimental convencional para los modelos de ratón humanizados e inmunodeficientes de la infección por VIH.

Como se describió anteriormente, a las 14 semanas después de la inyección de HSC (modelo crónico) o a las 3 semanas de inyección post-PBMC (modelos agudos y de reactivación), los ratones se desangran para detectar el nivel de injerto de células humanas por citometría de flujo. En la Figura 1Ase muestra una estrategia representativa de gating para la evaluación de 1) CD45humano + reconstitución de células y 2) porcentaje de células CD4+ y CD8+...

Aquí se describen tres enfoques experimentales para estudiar la dinámica de la infección por VIH en ratones humanizados. El primero permite el estudio de eventos de infección crónica, mientras que los dos últimos permiten el estudio de eventos agudos después de una infección primaria o reactivación viral.

Infección crónica, aguda y reactivada por VIH en modelos de ratón inmunodeficientes humanizados

Humanized NOD/SCID/IL-2 receptor &#947;-chainnull mice recapitulate some features of human immunity, which can be exploited in basic and pre-clinical ...

Este procedimiento describe tres modelos de ratones inmunodeficientes humanizados para el estudio de la dinámica de la infección por VIH. Los ratones humanizados NSG recapitulan las características de la inmunidad humana. En este caso, permitir el estudio de la infección por VIH crónica, aguda y reactivada en entornos preclínicos.Demostrando el procedimiento de preparación celular estará Sandra Medina-Moreno, una supervisora de investigación de laboratorio de nuestro grupo. Al realizar este procedimiento, utilice siempre equipos de protección personal desechables que incluyan exfoliantes estériles, guantes, zapatos dedicados, fundas de zapatos, máscara, gafas, gorros para el cabello y la barba, y una capa de laboratorio estéril. Para el modelo crónico, resuspendir un millón de células madre humanas CD34+congeladas en 10 mililitros de medios RPMI 1640 con 10%FBS bajo un gabinete de bioseguridad certificado y mantener condiciones estériles.Utilice 10 microlitros de la suspensión para contar y comprobar la viabilidad celular mediante la tinción de exclusión de Trypan Blue en un hemociclometro. A continuación, centrifugar la suspensión de la célula a 400 veces g durante 15 minutos a temperatura ambiente. Deseche el sobrenadante y resuspender las células en frío 1X PBS a la concentración requerida.Mantenga las células sobre hielo hasta la inyección. Frote la ropa de cama limpia entre las manos para enmascarar cualquier otro olor extraño en los cachorros receptores. A continuación, coloque los cachorros en un plato estéril de 100 milímetros cuadrados de Petri junto con una pequeña cantidad de material de cama de la jaula del criador.Ponga el plato Petri en una jaula de transporte limpia y luego coloque la jaula en una jaula de transporte de Carboy para proteger a los cachorros de la luz directa y el ruido. Cubra la jaula de transporte con una almohadilla de cubierta para evitar la exposición de los animales al medio ambiente mientras están en tránsito a la sala de irradiación. Después de la anestesia como se describe en el protocolo de texto, preparar para el injerto a través de la inyección hepática.Para minimizar el tiempo de restricción del ratón, deje que un investigador cargue la jeringa con la suspensión de la célula madre y que el segundo investigador sostenga al cachorro y administre la inyección. Cargue 50 microlitros de la suspensión de células madre humanas CD34+ en la jeringa con una aguja conectada debajo del gabinete de bioseguridad certificado. Restringir a los cachorros con el pulgar y los dedos índice y limpiar el lugar de inyección con 70%alcohol.Utilice un ángulo de aguja poco profundo para entregar 50 microlitros de células directamente en el hígado para no perforar completamente el hígado. Precalienta el plato usando una almohadilla de calentamiento infrarrojo para roedores a 20 grados Celsius para asegurar que los cachorros no estén demasiado calentados. Coloque a los cachorros en el plato de Petri cubierto con gasa estéril durante uno a cinco minutos para permitir la recuperación.Inmediatamente antes de devolver los cachorros a sus padres, aplicar una pequeña cantidad de mentol y pomada a base de eucalipto usando el pulgar y los dedos índice al hocico de ambos padres para evitar el canibalismo o el rechazo de los cachorros. Revise las jaulas todos los días y busque cualquier signo de injerto frente a enfermedad del huésped en los cachorros, como piel seca, sin alimentación, erupción cutánea o alopecia. Desteta a los cachorros a las tres semanas de edad y los alberga en diferentes jaulas.Verifique el injerto en la sangre periférica por citometría de flujo a las 14 semanas de edad. Se muestra una estrategia representativa para la evaluación de la reconstrucción humana de células CD45+cell y el porcentaje de células CD4+ y CD8+T. La tasa de éxito del injerto es de entre el 80% y el 100%Uso de células mononucleares de sangre periférica humana derivadas de un donante sano para el modelo agudo o de un paciente infectado por el VIH que estaba bajo tratamiento antirretroviral para el modelo de reactivación.Capa 15 mililitros de sangre entera en cinco mililitros de densidad estéril gradiente medio en un tubo cónico de 50 mililitros. Centrifugar a 400 veces g durante 30 minutos a temperatura ambiente sin roturas para evitar que la capa de buffy se mezcle con el medio de gradiente de densidad. Recoja cuidadosamente la fracción de células mononucleares entre el medio de gradiente de densidad y el sobrenadante.Transfiera la capa buffy a un tubo centrífugo de 15 mililitros que contenga 10 mililitros de 1X PBS. Centrifugar a 300 veces g durante 10 minutos a temperatura ambiente. Deseche el sobrenadante y retire los glóbulos rojos restantes mediante la eliminación con cinco mililitros de tónidor de lelisis ACK añadidos a las células peletadas.Incubar durante cuatro minutos a temperatura ambiente. Después de centrifugar de nuevo como antes, deseche el sobrenadante y resuspend en 10 mililitros de 1X PBS o RPMI 1640 medio. Utilice 10 microlitros de la suspensión celular para contar las células y comprobar la viabilidad mediante la tinción de exclusión de Trypan Blue en un hemocitoómetro.Típicamente, se obtienen de uno a dos millones de células por cada mililitro de sangre con más del 95% de viabilidad. Después de la centrifugación como antes, deseche el sobrenadante y ajuste el número de celda a la concentración requerida. Cargue 3,5 millones de células mononucleares de sangre periférica en 200 microlitros de 1X PBS en una jeringa con una aguja conectada debajo de un gabinete de bioseguridad certificado.Retire el ratón de la jaula y sosténgalo junto a la cola para que pueda agarrar la malla aplicando una suave tracción hacia atrás. A continuación, coloque el dedo índice y el pulgar en los hombros del animal agarrando la piel suelta del cuello y usando el dedo medio para estabilizar su espalda. Deslice la cabeza del ratón hacia atrás para que su espalda esté por encima de su cabeza.Esto permite que las vísceras de la cavidad abdominal se desplacen hacia atrás y reduce el riesgo de perforar los órganos internos durante la inyección. Limpie el lugar de inyección con 70%alcohol. Penetra la jeringa preparada a través de la pared abdominal y aspira antes de inyectar las células.Si se aspira algún material, retire la jeringa y deséchela. De lo contrario, inyecte las células lentamente en la cavidad intraperitoneal antes de extraer la jeringa y descartarla. Devolver al animal a su jaula y verificar el injerto en la sangre periférica por citometría de flujo a las tres semanas después de la inyección.Identifique los ratones mediante el etiquetado de oídos. Observe de cerca los ratones utilizados en estos experimentos, dos veces al día después de cada procedimiento para detectar signos clínicos de angustia. A continuación, proceda a la inyección de VIH como se describe en el protocolo de texto.Después de la inyección del VIH, hay un rápido aumento de la carga viral plasmática que generalmente es detectable después de dos a tres semanas después de la infección en los modelos crónicos y agudos con cinética similar en el modelo de reactivación. El aumento de la carga viral coincide con una disminución de la relación CD4:CD8. Estos cambios no se observan en ratones de control.Cabe destacar que en el modelo de ratón adulto PBMC NSG humanizado, se observa una inversión inicial de la relación CD4:CD8 y se reconstituye a lo largo del tiempo de monitoreo. Cuando se administra tratamiento antirretroviral a ratones infectados por el VIH, se produjo una supresión de la carga viral, así como la recuperación en la relación CD4:CD8 según lo previsto, alcanzando niveles similares a los de los controles no infectados. Típicamente, después de dos a tres semanas de tratamiento, se observa una disminución en la carga viral y un aumento en la relación CD4:CD8 en los modelos crónicos, agudos y de reactivación.Utilice la dosis de irradiación recomendada para evitar una sobredosis letal o el rechazo de las células trasplantadas. No perfore completamente el hígado durante la inyección y use ropa de cama para enmascarar los olores que la presa percibirá como extraños. Estos tres modelos permiten la prueba de compuestos antivirales, anticuerpos anti-VIH u otras sustancias biológicas que afectan la replicación viral.Además, permiten experimentos de transferencia adaptativa para la inmunoterapia contra el VIH. Los ratones humanizados NSG pueden reconstituirse parcialmente o en su totalidad con células humanas para responder a patógenos o fármacos, imitando la complejidad del sistema inmunitario humano. Todas las medidas biológicas básicas deben seguirse estrictamente, ya que los ratones humanizados NSG pueden infectarse con patógenos murino y humanos, particularmente en este caso que utiliza la manipulación del virus del VIH.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

La generación y caracterización de células T específicas de tumor en ratones humanizados se describe aquí. Tejido del timo humano y genéticamente modificados células madre hematopoyéticas son trasplantados en ratones inmunodeficientes. Esto da como resultado la reconstitución de una ingeniería del sistema inmune humano permitiendo examen in vivo de anti-tumor de la respuesta inmune.

Uso del ratón humanizado BLT como un modelo de células madre del tumor Terapia génica basada en

Este video muestra un ensayo para evaluar la efectividad de la terapia antirretroviral combinada oral (cART oral) en un modelo de ratón humanizado infectado con el virus de inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1). Se administra una combinación de fármacos dirigidos al VIH-1, incluidos los inhibidores de la transcriptasa inversa análogos y los inhibidores de la transferencia de la cadena de integrasa, junto con un suplemento nutricional y antibióticos. Tras el consumo de esta mezcla por parte de los...

Terapia antirretroviral oral combinada para tratar la infección por VIH-1 en un modelo de ratón humanizado

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Construcción de un modelo de ratón humanizado con inmunidad modificada contra el VIH

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-Base de células madre Inmunidad Diseñado frente a la infección por VIH en el modelo de ratón humanizado

Este protocolo proporciona un método para crear ratones humanizados (hu-NSG) vía intrahepática inyección de células madre hematopoyéticas humanas en ratones NSG neonatales radiación-condicionada. El ratón hu-NSG es susceptible a la infección por VIH y la terapia combinatoria antirretroviral (carro) y sirve como un modelo fisiopatológico adecuado para investigaciones de replicación y latencia del VIH.

(Hu-NSG) ratón humanizado del NOD/SCID/IL2rγnull modelo para estudios de latencia y replicación del VIH

Este protocolo proporciona un método confiable para establecer ratones humanizados con el sistema inmunitario humano y las células hepáticas. Los ratones inmunodeficientes duales reconstituidos logrados mediante inyección intraesplénica de hepatocitos humanos y células madre CD34+ hematopoyéticas son susceptibles a la infección por el virus de inmunodeficiencia humana-1 y al daño hepático recapitulado observado en Pacientes infectados por el VIH.

Establecimiento del modelo de ratón TK-NOG humanizado dual para la patogénesis hepática asociada al VIH

Describimos un método novedoso para generar ratones BLT dobles humanizados que cuentan con un sistema inmune humano funcional y un microbioma intestinal estable injertado similar al humano. Este protocolo se puede seguir sin necesidad de ratones libres de gérmenes o instalaciones gnotobióticas.

Un modelo de dos colores BLT humanizados con un microbioma intestinal humano estable y un sistema inmune humano

Hemos desarrollado un protocolo para la generación y evaluación de un modelo de ratón NOG infectado por el virus de inmunodeficiencia humana y humanizado basado en el trasplante de células madre, la exposición al virus de inmunodeficiencia humana intravaginal y el ARN PCR digital de gotas Cuantificación.

Ratones NOG humanizados para la exposición y tratamiento del VIH intravaginal

Este protocolo describe un método novedoso para administrar medicamentos antirretrovirales combinados orales que suprimen con éxito la replicación del ARN del VIH-1 en ratones humanizados.

Tratamiento antirretroviral combinado oral en ratones humanizados infectados con VIH-1

Este protocolo describe cómo la combinación de la infección por EcoHIV con ratones Tmem119-EGFP ofrece un valioso sistema biológico para investigar las alteraciones microgliales y los reservorios virales en modelos de roedores con trastornos neurocognitivos asociados al VIH.

Identificación de células infectadas por EcoHIV en ratones transgénicos manipulados con microglía

Aprende a establecer modelos de infección crónica, aguda y reactivada por VIH en ratones inmunodeficientes humanizados. Este método permite estudiar la dinámica viral y respuestas inmunitarias en entornos preclínicos.

Infección crónica, aguda y reactivada por VIH en modelos de ratón inmunodeficientes humanizados

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