Modelo de carcinogénesis de piel inducida por productos químicos utilizando Dimethylbenz[a]Anthracene y 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Este modelo de cáncer de piel de dos pasos permite el estudio del papel de la inflamación en el cáncer de piel y permite el estudio de la iniciación del tumor como un proceso separado de la progresión tumoral. La formación tumoral en este modelo es inducida químicamente y permite el uso de cepas eliminatorias para estudiar los efectos de factores ambientales o candidatos terapéuticos. El modelo es adecuado para estudiar el papel del sistema inmunitario y la angiogénesis en el cáncer.

Demuestra una patología de enfermedad similar al carcinoma de células escamosas en pacientes humanos. Aunque este método es relativamente fácil de llevar a cabo, la sincronización precisa es esencial. También es importante tomar las medidas de seguridad adecuadas al manipular DMBA, que es un carcinógeno.

Antes de comenzar el experimento, alberga a cualquier ratón agresivo de siete a nueve semanas de edad en jaulas separadas para evitar peleas y lesiones en la piel. Para la inducción del papiloma de la piel, primero afeite las pieles de la espalda de los animales experimentales y pese los ratones individualmente. 48 horas después del afeitado, utilice una pipeta para aplicar 50 microgramos de DMBA en 200 microlitros de acetona en el área afeitada de cada ratón anestesiado.

Para la promoción del papiloma de la piel, siete días después de la aplicación de DMBA tratar la piel con cinco microgramos de TPA en 200 microlitros de acetona dos veces a la semana hasta el final del experimento. Examine a los animales en busca de papilomas y fotografíes y registre el tamaño de cada papiloma individual en un mapa cada semana. Una masa palpable superior a un milímetro de diámetro se considera un papiloma si permanece más de una semana.

Cuando la respuesta tumoral alcance una meseta, recoja el material de muestra apropiado de los animales 24 horas después de la última aplicación de TPA y recoja trozos de piel de espesor completo para el análisis inmunohistoquímico. Usa un punzón de biopsia para recolectar trozos de piel de muestras de piel de papiloma y no papiloma para la expresión génica o anaylses de proteínas y usa un bisturí para recolectar piezas de papiloma y piel no papilloma para el análisis inmunohistoquímico. A continuación, recoja los ganglios linfáticos que drenan la piel y una parte del bazo para el análisis citométrico de flujo como desee.

Una diferencia estadísticamente significativa en el tiempo libre del papiloma y en el número de papilomas entre los grupos experimentales se observa típicamente en el modelo tumoral DMBA TPA. Los análisis histológicos son adecuados para estudiar la estructura de los papilomas, la morfología de la piel o la infiltración de células inmunitarias de interés. Es esencial aplicar el DMBA y el TPA uniformemente sobre la piel y aplicar TPA en intervalos constantes.

También es importante contar los papilomas regularmente. Los mecanismos que afectan el número y la hora de la formación de tumores se pueden estudiar utilizando diferentes métodos, incluyendo inmunohistoquímica, citometría de flujo, PCR cuantitativo y análisis de proteínas. Esta técnica convencional se puede adaptar y aplicar fácilmente para estudiar los efectos de diferentes genes, factores ambientales o terapias de interés en la iniciación y progresión del tumor.

Se requiere precaución al realizar la técnica ya que DMBA es cancerígeno y la acetona se evapora rápidamente. Se recomienda una máscara de respiración adecuada y el uso de gabinete de flujo.