Name: Medición de la velocidad de propagación de pulsos, la distensión y la tensión en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Aprenda a medir la velocidad de propagación de pulsos, la distensibilidad y la tensión radial en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal mediante ultrasonido de alta frecuencia. Esta técnica no invasiva permite monitorear cambios sutiles en la función aórtica.

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Este trabajo fue apoyado por R01HL124155 (CPH) y la financiación del Instituto de Investigación de la Universidad de Missouri a CPH.

El protocolo para el manejo de ratones e imágenes por ultrasonido fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Missouri (protocolo animal número 8799) y se llevó a cabo de acuerdo con AAALAC International.
1. Configuración y preparación de equipos de ratones
<ol><li>Configuración del equipo<ol>
<li>Encienda el instrumento de ultrasonido, el calentador de gel ultrasónico y la almohadilla de calentamiento.</li>
		<li>Abra el programa de ultrasonido e introduzca el nombre del estudio y la información descriptiva para cada ratón.</li>
		<li>Seleccione la aplicación como Imágenes generales.</li>
		<li>Elija el transductor adecuado para la toma de imágenesabdominales (Figura 1B,C). En este experimento, se utiliza el transductor MS400.</li>
		<li>Asegúrese de que la anestesia isoflurano y los niveles de oxígeno sean adecuados para cada sesión experimental.</li>
		<li>Limpie la plataforma de imágenes de animales de ultrasonido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparación del ratón<ol>
<li>Coloque la jaula del ratón encima de una almohadilla de calentamiento (36,5 a 38,5 oC).</li>
		<li>Sujete suavemente el ratón por su base de cola y colóquelo en la cámara de isoflurano llena de oxígeno.</li>
		<li>Dirija el flujo de isoflurano y oxígeno a la cámara de inducción.</li>
		<li>Encienda el vaporizador de isoflurano y ajuste el nivel de isoflurano a 1-2% vol/vol. Encienda la presión del tanque de oxígeno a 1-2 L/min.</li>
		<li>Después de 2 min, confirme la profundidad adecuada de la anestesia por la ausencia de reflejos de abstinencia al pellizcar la almohadilla del pie del ratón.</li>
		<li>A continuación, apague la rama de suministro de la cámara de inducción y encienda la rama dirigida al cono nasal de anestesia.</li>
		<li>Transfiera el ratón de la cámara de inducción a la etapa de imágenes por ultrasonido y coloque el cono de anestesia sobre la nariz del animal.</li>
		<li>Incline la plataforma de imágenes de animales alrededor de 10o a la esquina inferior derecha para un escaneo óptimo(Figura 1B).</li>
		<li>Ponga una gota de solución oftálmica estéril en ambos ojos de ratones para evitar el secado bajo anestesia.</li>
		<li>Coloque el ratón en posición supina con la nariz insertada en el cono de anestesia.</li>
		<li>Aplique el gel de electrodo a las cuatro patas usando un hisopo de algodón y pegue las patas a los cables de cobre en la plataforma de imágenes de animales para lecturas de electrocardiogramas(Figura 1C).</li>
		<li>Use cortadoras para afeitar el cabello en el sitio de imágenes y luego aplique crema depilatoria para eliminar el pelaje restante. Dejar actuar durante menos de 1 min.</li>
		<li>Limpie suavemente la crema y el cabello con una toalla de papel húmeda.</li>
		<li>Supervise la respiración y asegúrese de que la frecuencia cardíaca se mantenga entre 450-550 latidos/min. Si está por debajo de este nivel, reduzca el flujo de isoflurano y espere hasta que la frecuencia cardíaca se recupere.</li>
		<li>Aplicar gel ultrasónico precalentado (37 oC) en el sitio de la piel preparado y fijar el transductor a su soporte y bajar hacia abajo hasta que toque el gel(Figura 1C).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Imágenes por ultrasonido de la aorta abdominal
<ol><li>Coloque el transductor horizontalmente (es decir, perpendicular a la línea media del ratón).</li>
	<li>Suaviza el gel ultrasónico y elimina las burbujas usando el palo de madera de un hisopo de algodón.</li>
	<li>Baje el transductor y coloque 0,5 - 1 cm por debajo del diafragma después de tocar el gel. Ahora empieza a observar las imágenes.</li>
	<li>Visualice la aorta abdominal en la vista de eje corto(Figura 1C). NOTA: El modo B es el modo predeterminado y más eficaz para localizar anatómicamente la aorta y colocar el transductor. La aorta abdominal se identifica por la presencia de flujo pulsátil utilizando los modos Doppler de color y Doppler de potencia en el eje corto (es decir, la sección transversal circunferencial de la aorta). Ajuste los micromanipuladores en el escenario animal y el transductor para llevar la sección transversal de la aorta al centro de la imagen.</li>
	<li>Gire suavemente el transductor 90o en el sentido de las agujas del reloj y ajuste lentamente la perilla del micromanipulador del eje X para visualizar la aorta en la vista de eje largo (sección longitudinal de la aorta). NOTA: En muchos casos, los gases gastrointestinales pueden interferir con la imagen, o la aorta puede no estar en el ángulo óptimo para permitir una vista clara del eje largo. Ajuste el ángulo del transductor lenta y horizontalmente hasta obtener una vista de eje largo aceptable. Si los problemas persisten, eleve el transductor, compruebe si hay burbujas de aire debajo del transductor, ajuste ligeramente el ángulo de inclinación de la etapa animal, vuelva a aplicar los geles y repita todos los pasos de nuevo.</li>
	<li>Establezca la zona de enfoque y la profundidad en la región de la aorta mediante las alternancias Zona de enfoque y Profundidad de enfoque, respectivamente. Ajuste el control deslizante de compensación de ganancia de tiempo manualmente para oscurecer el lumen de la aorta para lograr un contraste óptimo de la pared de la aorta.</li>
	<li>Ajuste el manipulador del eje Y para visualizar los puntos de ramificación de las arterias renales superiores y derechas. Utilice la arteria renal derecha como punto de referencia para capturar la imagen de la aorta suprarrenal(Figura 2A).</li>
	<li>Grabe al menos 100 fotogramas de imágenes en modo B en la aorta suprarrenal.</li>
	<li>Pulse cinestore para guardar las imágenes en modo B.</li>
	<li>Pulse el botón de modo M en el teclado del instrumento para activar la grabación en modo M. Enrolle la bola del cursor para llevar la línea indicadora amarilla a una sección aorta normal con una imagen clara de la pared del recipiente, o a las secciones donde se observa el diámetro máximo del aneurisma.</li>
	<li>Presione el interruptor SV/gate y ajuste la bola del cursor para asegurarse de que las paredes del recipiente están incluidas en el soporte de medición. Pulse Actualizar para grabar mediciones en modo M y pulse cinestore para capturar(Figura 2A,B). NOTA: Es posible que el diámetro máximo del aneurisma no esté en el mismo plano de imagen que la vista óptima del eje largo de la aorta. Ajuste ligeramente la perilla del manipulador del eje X para cada medición en modo M para asegurarse de que se captura el MILD de cada sección.</li>
	<li>Para obtener imágenes de la visualización de Kilohertz (EKV) cerradas por ECG, pulse el botón de modo B para volver a la grabación en modo B. NOTA: Si las imágenes no son nítidas, ajuste el manipulador del eje X para lograr la imagen más nítida de la pared superior del lumen sobre una longitud de sección (es decir, > 6 mm).</li>
	<li>Pulse el botón Physio Settings (Ajustes físicos) en el teclado y seleccione Respiration Gating. Ajuste el retardo de gating y la ventana manualmente para registrar los datos solo durante las partes más planas de la onda de respiración. Las secciones de grabación se mostrarán como bloques de color en el trazado de la onda de respiración. NOTA: Sin el ajuste de la respiración, las imágenes EKV se desenfocarán debido al movimiento normal del animal durante la respiración.</li>
	<li>Pulse el botón EKV para activar el modo EKV. En el menú correspondiente, seleccione Resolución estándar y velocidad de fotogramas 3000 o superior. Seleccione continuar para grabar imágenes EKV. Pulse cinestore para guardar las imágenes. Utilice la imagen en modo EKV para obtener mediciones de la velocidad de propagación del pulso (PPV), la distensibilidad y la tensión radial. NOTA: La grabación de EKV puede fallar si hay fluctuaciones anormales en la respiración, el animal está respirando demasiado rápido o los ajustes de las velocidades de fotogramas son demasiado altos. En esos casos, establezca la velocidad de fotogramas más baja y espere a que la respiración animal se estabilice. Establecer la velocidad de fotogramas en 3000 suele ser adecuado tanto para ratones como para ratas.</li>
</ol>3. Pasos posteriores a la toma de imágenes
<ol><li>Limpie suavemente el gel ultrasónico de la zona abdominal del ratón con una toalla de papel humedecida con agua tibia.</li>
	<li>Coloque el ratón de nuevo en su jaula de casa en una almohadilla de calefacción.</li>
	<li>Apague la máquina de isoflurano, limpie la plataforma de imágenes de animales y el transductor con toallitas húmedas.</li>
	<li>Transfiera los datos de imagen recopilados durante la ecografía al disco duro.</li>
	<li>Apague el instrumento de ultrasonido.</li>
	<li>Después de que el ratón se recupere de la anestesia y esté alerta, retire la almohadilla de calentamiento y devuelva la jaula al estante de la carcasa del animal.</li>
</ol>4. Análisis de imágenes de la aórtica abdominal
<ol><li>Análisis de imágenes en modo M para medir MILD<ol>
<li>Abra el programa de ultrasonido e introduzca el nombre del estudio y la información descriptiva para cada ratón.</li>
		<li>Abra los datos de ultrasonido en el software de análisis y abra la imagen en modo M y detenga el latido del corazón.</li>
		<li>Haga clic en Medidas.
</li>
		<li>Seleccione el paquete vascular en las opciones desplegables. Haga clic en Profundidad y dibuje una línea a través del lumen aórtico que se extiende desde la pared interior hasta la pared(Figura 2C,D). NOTA: Para la consistencia, las mediciones deben tomarse en la fase sistólica del ciclo cardíaco cuando la aorta se expande al máximo. Dibuje tres líneas a través de tres latidos diferentes para obtener mediciones precisas y medias de MILD. En AAA, las mediciones se toman a la dilatación máxima de la aorta. También es aconsejable ayunar los animales 4-6 h antes de recoger imágenes para evitar interferencias de la motilidad intestinal y garantizar la claridad de la imagen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Análisis de la velocidad de propagación del pulso (PPV)<ol>
<li>Abra la imagen EKV y detenga el latido del corazón.</li>
		<li>Abra una nueva ventana en el software de análisis (por ejemplo, Vevo Vac) haciendo clic en el icono de nombre.</li>
		<li>Haga clic en la opción PPV (flecha en el cuadro 3D). Una pequeña ventana aparecerá con la imagen de la aorta.</li>
		<li>Dibuje una caja rectangular haciendo clic en la pared superior del recipiente y arrastrando el puntero durante unos 4 mm cubriendo ambas paredes de la aorta suprarrenal. NOTA: Mantenga la longitud de la caja consistente (4 mm) para todas las imágenes. El usuario puede ajustar el cuadro rectangular girando para alinear la caja y seleccionando la línea y luego arrastrando a una nueva posición en el recipiente que se está analizando para obtener la inflexión más adecuada y clara de la onda de pulso. Las líneas verticales de datos del rectángulo se mostrarán e identificarán como izquierda (imagen superior) y derecha (imagen inferior) en el ROI. Para una mejor visualización de la inflexión de la onda de pulso, a veces es útil para el cuadro de dibujo sólo en la pared superior como se muestra en la Figura 3. El software calculará automáticamente el PPV (m/s). Sin embargo, siempre es mejor ajustar manualmente las líneas púrpuras para establecer el punto de inflexión exacto en las ondas de pulso y el PPV cambiará en consecuencia.</li>
		<li>Por último, seleccione el comando Aceptar para guardar los valores PPV. Exporte las cifras y los datos a la unidad de almacenamiento de datos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Análisis de distensibilidad y deformación radial<ol>
<li>Abra la imagen EKV y detenga el latido del corazón.</li>
		<li>Haga clic en el icono del software. El software abrirá una nueva ventana.</li>
		<li>Haga clic en el nuevo ROI de traza y dibuje una caja rectangular en las dos paredes del buque. El software rastreará automáticamente las paredes superior e inferior del recipiente. El usuario puede ajustar el trazado para alinearen en la pared haciendo clic en puntos verdes(Figura 4A,B).</li>
		<li>Ahora acepte el rastreo. El software calculará la distensibilidad (1/Mpa) en el ROI seleccionado.</li>
		<li>Para la medición de deformación unitaria radial, seleccione la opción de deformación unitaria adecuada en las barras de menú de la parte superior izquierda. Se abrirán las imágenes de la deformación radial y la deformación tangencial tangencial.</li>
		<li>Obtener el valor de la deformación radial (%) moviendo el cursor en el pico de la curva. Exporte los datos como imágenes o en formato de vídeo(Figura 4A,B).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Las imágenes por ultrasonido proporcionan una técnica poderosa para determinar las propiedades funcionales de la aorta a través de mediciones de PPV, distensibilidad y tensión radial. Estas mediciones son particularmente instructivas para el estudio de los modelos de ratón de AAA y el enfoque in vivo permite la recopilación de datos longitudinales que son potencialmente importantes para entender el desarrollo temporal de la patología aórtica. Específicamente, las mediciones de rigidez aórtica in vivo se determinan localm...

Un aneurisma de la aorta abdominal (AAA) representa una enfermedad cardiovascular significativa caracterizada por una dilatación localizada permanente de la aorta que supera el diámetro del vaso original en 1,5 veces1. AAA se encuentra entre las 13 principales causas de mortalidad en los Estados Unidos2. La progresión de la AAA se atribuye a la degeneración de la pared aórtica y la fragmentación de la elastina, lo que en última instancia conduce a la ruptura aórtica. Estos cambios en la pared aórtica pueden ocurrir sin un aumento significativo en el diámetro intraluminal máximo (MILD), lo que sugiere que MILD por sí solo no es suficiente para predecir la gravedad de la enfermedad3. Por lo tanto, es necesario identificar factores adicionales para detectar cambios iniciales en la pared aórtica, que pueden guiar las opciones de tratamiento temprano. El objetivo general de este protocolo es proporcionar una guía práctica para evaluar las propiedades funcionales aórticas utilizando imágenes por ultrasonido caracterizadas por mediciones de la velocidad de propagación del pulso (PPV), la distensibilidad y la tensión radial.
Un modelo experimental bien caracterizado para estudiar AAA, descrito por primera vez por Daugherty y sus colegas, implica la infusión subcutánea de angiotensina II (AngII) a través de bombas osmóticas en Apoe-/- ratones4. La medición precisa de MILD mediante imágenes por ultrasonido ha sido fundamental para caracterizar AAA en este modelo de ratón5. Aunque los cambios histológicos durante el desarrollo de AAA han sido ampliamente estudiados, los cambios en las propiedades funcionales de la pared del recipiente como la rigidez aórtica no se han caracterizado bien. Este protocolo hace hincapié en el uso de ultrasonidos de alta frecuencia en combinación con los sofisticados análisis como potentes herramientas para estudiar la progresión temporal de AAA. Específicamente, estos enfoques nos permiten evaluar las propiedades funcionales de la pared del recipiente medida por PPV, distensibilidad y deformación radial.
Estudios clínicos recientes en seres humanos con AAA, así como en el modelo AAA inducido por el aslastasa murina, sugieren una correlación positiva entre rigidez aórtica y diámetro aórtico6,7. El PPV, un indicador de rigidez aórtica, se acepta como una excelente medición para cuantificar los cambios en la rigidez en la pared del recipiente6,8. El VPP se calcula midiendo el tiempo de tránsito de la forma de onda del pulso en dos sitios a lo largo de la vasculatura, proporcionando así una evaluación regional de la rigidez aórtica. Recientemente hemos demostrado que el aumento de la rigidez aórtica medida por el VPP, y a nivel celular según se determina mediante la microscopía de fuerza atómica, se correlaciona positivamente con el desarrollo del aneurisma9. Además, la literatura sugiere que la rigidez aórtica puede preceder a la dilatación aneurisma y por lo tanto puede proporcionar información útil sobre las propiedades intrínsecas regionales de la pared del recipiente durante el desarrollo de AAA10. Del mismo modo, las mediciones de distensibilidad y deformación unitaria son las herramientas de cuantificación para medir los cambios anteriores de la aptitud arterial. Las arterias sanas son flexibles y elásticas, mientras que con mayor rigidez y menos elasticidad, se reduce la distensibilidad y la tensión. Aquí, proporcionamos una guía práctica y un protocolo paso a paso para el uso de un sistema de ultrasonido de alta frecuencia para medir MILD, PPV, distensibilidad y tensión radial en ratones. El protocolo proporciona enfoques técnicos que deben utilizarse junto con la información básica proporcionada por los manuales para instrumentos de imágenes de ultrasonido específicos y el tutorial de vídeo adjunto. Es importante destacar que en nuestras manos el protocolo de imagen descrito proporciona datos reproducibles y precisos que parecen valiosos en el estudio del desarrollo y progresión de la AAA experimental.
Para demostrar aún más la utilidad de las imágenes por ultrasonido, proporcionamos imágenes de ejemplo y mediciones tomadas de nuestros propios estudios destinados al uso de enfoques farmacológicos para prevenir la AAAexperimental 11. Específicamente, se ha propuesto que la señalización de muesca participe en múltiples aspectos del desarrollo vascular y la inflamación12. Utilizando haploinización genética y enfoques farmacológicos, hemos demostrado previamente que la inhibición de la muesca reduce el desarrollo de AAA en ratones al prevenir la infiltración de macrófagos en el lugar de la lesión vascular13,14,15. Para el artículo actual, utilizando el enfoque farmacológico para la inhibición de la muesca nos centramos en la relación entre la rigidez aórtica y los factores relacionados con AAA. Estos estudios ilustran que la inhibición de la muesca reduce la rigidez aórtica, que es una medida de la progresión AAA11.

<table><tbody><tr><td>Angiotensina II</td><td>Sigma</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Apoe-/- ratones</td><td>The Jackon lab</td><td><img src="/files/ftp_upload/60515/60515mateq.jpg"></td><td></td></tr><tr><td>Clippers</td><td>WAHL</td><td>1854</td><td></td></tr><tr><td>Bastoncillo de algodón</td><td>Q-tips</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPT</td><td>Sigma</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>Crema depilatoria</td><td>Nair</td><td>LL9038</td><td></td></tr><tr><td>Crema de electrodos</td><td>Sigma</td><td>17-05</td><td></td></tr><tr><td>Calentador de gel</td><td>Thermasonic (Parker)</td><td>82-03 (LED)</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td><td>Stryker</td><td>T/pump professional</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>VetOne</td><td>Fluriso TM</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano</td><td>Visualsonics</td><td>VS4244</td><td></td></tr><tr><td>Pomada</td> <td>oftálmica lubricanteLacri-lube</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bombas osmóticas</td><td>Alzet</td><td>Modelo 2004</td><td></td></tr><tr><td>Tanque de oxígeno</td><td>Transmisor de gas</td><td></td><td></td>de aire</tr><tr><td></td><td>Visualsonics</td><td>MS-400 o MS550D</td><td></td></tr><tr><td>Gel ultrasónico</td><td>Parker</td><td>Aquasonic transparente</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagen por ultrasonido</td><td>Visualsonics</td><td>Vevo 2100</td><td></td></tr><tr><td>Vevo Vasc Software</td><td>Visualsonics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

medición de la velocidad de propagación de pulsos, la distensión y la tensión en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

Un aneurisma de la aorta abdominal (AAA) se define como una dilatación localizada de la aorta abdominal que supera el diámetro intraluminal máximo (MILD) en 1,5 veces de su tamaño original. Estudios clínicos y experimentales han demostrado que los pequeños aneurismas pueden romperse, mientras que una subpoblación de aneurismas grandes puede permanecer estable. Por lo tanto, además de la medición del diámetro intraluminal de la aorta, el conocimiento de los rasgos estructurales de la pared del recipiente puede proporcionar información importante para evaluar la estabilidad de la AAA. El endurecimiento aórtico ha surgido recientemente como una herramienta confiable para determinar los primeros cambios en la pared vascular. La velocidad de propagación del pulso (VPP) junto con la distensibilidad y la tensión radial son métodos altamente útiles basados en ultrasonidos relevantes para evaluar la rigidez aórtica. El objetivo principal de este protocolo es proporcionar una técnica integral para el uso del sistema de imágenes por ultrasonido para adquirir imágenes y analizar las propiedades estructurales y funcionales de la aorta según lo determinado por MILD, PPV, distensibilidad y tensión radial.

Las imágenes representativas en modo M de la aorta abdominal normal y aneurisma de ratones se muestran en la Figura 2A y la Figura 2B,respectivamente. La aorta abdominal suprarrenal se identifica por su ubicación junto a la arteria renal derecha y la arteria mesentérica superior(Figura 2A). Las imágenes representativas utilizadas para el cálculo de MILD, en tres latidos cardíacos di...

Este manuscrito describe un protocolo detallado para el uso de imágenes por ultrasonido de alta frecuencia para medir el diámetro luminal, la velocidad de propagación del pulso, la distensibilidad y la tensión radial en un modelo de ratón de aneurisma de la aorta abdominal.

Medición de la velocidad de propagación de pulsos, la distensión y la tensión en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

Las imágenes por ultrasonido y el análisis funcional son técnicas muy poderosas para determinar el crecimiento y la estabilidad de los aneurismas de la aorta abdominal, más allá de los métodos tradicionales de tamaño y diámetro aórticos. Esta técnica no invasiva mide la velocidad de la onda de pulso, la capacidad de distancia y la distancia de la aorta para monitorear cambios sutiles en las funciones aórticas junto con el diámetro aórtico. La rigidez aórtica es un indicador de la progresión del aneurisma de la aorta abdominal y la estabilidad puede ser útil para evaluar los efectos de los agentes terapéuticos de interés en ensayos preclínicos.Además, las mediciones de velocidad y tensión también se pueden correlacionar con los cambios vasculares que se producen durante el desarrollo de diversas enfermedades cardiovasculares, como la hipertensión, la diabetes, la obesidad y la aterosclerosis. Demostrando el procedimiento estará el Dr. Sun, un profesor asistente de investigación de las instalaciones de Imaging Core. Para preparar el ratón para el procedimiento de diagnóstico por imágenes, después de confirmar la falta de respuesta al reflejo del pedal, aplique la solución opthalmica a los ojos del ratón anestesiado y coloque el ratón en la posición supina en la plataforma de imágenes de animales inclinada 10 grados hacia la parte inferior derecha.Aplique gel de electrodo a las cuatro patas y pegue las patas en los cables del electrocardiograma de cobre en la plataforma de imágenes. Use cortadores para afeitar el cabello en el sitio de imágenes y aplique crema depilatoria en la piel expuesta. Después de menos de un minuto, utilice una toalla de papel húmeda para quitar la crema y el cabello, y aplicar 37 grados Celsius gel ultrasónico en el sitio preparado.A continuación, utilice el extremo de madera de un hisopo de algodón para suavizar el gel y eliminar cualquier burbuja. Para imágenes de aorta abdominal, conecte el transductor a su soporte y coloque el transductor perpendicular a la línea media del ratón. Baje el transductor hasta que toque el gel y coloque la punta 0,5 a un centímetro por debajo del diafragma.Cuando el transductor esté en su lugar, visualice la aorta abdominal en la vista de eje corto. A continuación, gire suavemente el transductor 90 grados en el sentido de las agujas del reloj y ajuste lentamente la perilla del micromantenerador del eje X para visualizar la aorta en la vista de eje largo. Utilice los conmutadores de zona de enfoque y profundidad de enfoque para establecer la zona de enfoque y la profundidad en la región de la aorta.Ajuste manualmente el control deslizante de compensación de ganancia de tiempo para oscurecer el lumen de la aorta para lograr un contraste óptimo de la pared de la aorta. Ajuste el manipulador del eje Y para visualizar los puntos de ramificación de las arterias renales superiores y mesentéricas derechas. La arteria renal derecha se puede utilizar como un punto de referencia para capturar una imagen de la aorta súper renal.Después de grabar al menos 100 fotogramas de imágenes en modo B en la aorta súper renal, guarde las imágenes y seleccione el modo final. Enrolle la bola del cursor para llevar la línea del indicador amarillo a una sección de aorta normal con una imagen de pared clara del recipiente o a las secciones donde se observa el diámetro máximo del aneurisma. Haga clic en el interruptor de la puerta SV y ajuste la bola del cursor para asegurarse de que las paredes del recipiente están incluidas en el soporte de medición.A continuación, pulse actualizar para registrar las mediciones del modo M y enviar a almacenar para capturar las mediciones. Para obtener imágenes EKV pulse el botón de modo B para volver a la grabación en modo B y pulse el botón Ajustes de Physio para permitir la selección de gating de respiración. Ajuste manualmente el retardo de medición y la ventana para registrar los datos solo durante las partes más planas de la onda de respiración.Las secciones de grabación se mostrarán como bloques de color en el trazado de la onda de respiración. Pulse el botón EKV para activar el modo EKV. En el menú correspondiente, establezca el Tipo de adquisición en Resolución estándar, la Velocidad de fotogramas en 3.000 o superior y haga clic en Escanear para grabar las imágenes EKV.A continuación, pulse Enviar para almacenar para guardar las imágenes y utilice la imagen de modo EKV para obtener mediciones del PPV, distensión y tensión radial. Para medir el suave, abra el programa de ultrasonido e introduzca el nombre del estudio y la información descriptiva de cada ratón. Abra los datos de ultrasonido y la imagen del modo M y detenga el latido del corazón.Haga clic en mediciones y seleccione el Paquete vascular y la Profundidad en las opciones desplegables. A continuación, dibuje una línea a través del lumen aórtico que se extiende desde la pared interior hasta la pared. Para el análisis PPV abra la imagen EKV y detenga el latido del corazón.Haga clic en el icono para abrir una nueva ventana en el software de análisis y seleccione la opción PPV. Aparecerá una pequeña ventana con la imagen de la aorta. Haga clic en la pared superior del recipiente y arrastre el puntero para cubrir ambas paredes de la aorta súper renal con un cuadro de aproximadamente cuatro milímetros y, a continuación, haga clic en Aceptar para guardar los valores PPV.Para el análisis de distensión en la imagen EKV abierta, haga clic en el icono de software y seleccione Trazar nueva región de interés para dibujar una caja rectangular en ambas paredes del recipiente. El software rastreará automáticamente las paredes superior e inferior del recipiente. Haga clic en los puntos verdes para ajustar la alineación de seguimiento si es necesario y haga clic en Aceptar.El software calculará la distensión dentro de la región de interés seleccionada. Para obtener la medición de deformación unitaria radial, seleccione la opción de deformación unitaria adecuada en el menú y haga clic en Deformación unitaria. Se abrirán las imágenes para la deformación unitaria radial y la tensión tangencial.A continuación, mueva el cursor al pico de la curva para obtener el valor de la deformación unitaria radial. Para una reproducibilidad y detección óptimas de ciertas etapas, las imágenes deben ser analizadas por la misma persona en el mismo lugar anatómico para garantizar la coherencia dentro de los datos. Aquí, se muestran imágenes representativas en modo M de aortas abdominales normales y aneurismas.La aorta abdominal súper renal se puede identificar por su ubicación junto a la rama derecha de la arteria renal y la arteria mesentérica superior. Como se ilustra en estas imágenes, leve se puede calcular utilizando tres latidos cardíacos diferentes del ciclo cardíaco sistólico tanto en aortas normales como aneurismas. En el caso de un aneurisma aórtico, el diámetro luminal se puede determinar dibujando una línea amarilla perpendicular entre los dos bordes internos del lumen en el área de máxima dilatación.En este análisis representativo, las imágenes por ultrasonido transabdominal revelaron un aumento progresivo de la EPP suave y PPV y una disminución de la distensión y la tensión radial en respuesta a la angiotensina II en el día 28. La perfusión de angiotensina II aumentó marginalmente leve desde el día 28 hasta 56, mientras que el tratamiento con un inhibidor de la muesca no afectó significativamente a la angiostatina II solo. Es importante tener en cuenta que el VPP se correlacionó fuertemente con leve en el día 28, mientras que en el día 56, la correlación fue relativamente débil.Histológicamente, la infusión de angiotensina II aumentó la degradación del colágeno y la actividad proteolítica en la capa mediática de la aorta. Sin embargo, el tratamiento con inhibidores de la muesca redujo al mínimo estos cambios en la degradación adicional de la matriz celular. Realmente configurar el animal y la sonda e identificar la aorta abdominal son los pasos más críticos.Principiantes aconsejo utilizar la perilla micromaniprógrafo para hacer ajustes finos. Usando este método también podemos medir el flujo de bloque en la aorta o la arteria renal, evaluar la función cardíaca y monitorear la enfermedad vascular periférica. Después de alcanzar cierto tamaño, los aneurismas de la aorta abdominal no crecen excesivamente.En estas circunstancias, estas técnicas detectan rápidamente ciertos cambios de estructura en respuesta a agentes farmacológicos u otras manipulaciones. Durante la administración de la anestesia asegúrese de utilizar el carbón y el disolvente para isofluorent, y el desgaste del escape. También asegúrese de que no haya fugas en el orificio de la nariz.

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Inmunología e Infección

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Medición ascendente aórtica Rigidez En Vivo En ratones usando ultrasonido

La rigidez arterial representa un factor clave en cardiovascular velocidad de la onda de la enfermedad y del pulso (VOP) puede ser considerado como un índice de sustituto de la rigidez arterial. Este protocolo describe un algoritmo de procesamiento de imágenes para calcular la VOP en ratones basados ​​en el procesamiento de imágenes de ultrasonido que es aplicable en diferentes sitios arteriales.

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Inserción de catéter de poliuretano en la luz aórtica y ligadura de la sutura de la aorta inducir hipoxia crónica debido a la hipoperfusión de los adventitial de la vasa vasorum. Este artículo describe un nuevo modelo animal de aneurisma aórtico abdominal (AAA) de características similares a los de la AAA en los seres humanos.

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Imágenes por ultrasonido se ha convertido en una modalidad común para determinar las dimensiones luminales de aneurismas de aorta torácicas y abdominales en ratones. Este protocolo describe el procedimiento para adquirir imágenes de ultrasonido bidimensional confiable y reproducible de la aorta ascendente y abdominal en ratones.

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Modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa

Este protocolo describe un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal (AAA) inducido por fosfato de calcio para estudiar las características patológicas y los mecanismos moleculares de los AAA.

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Este manuscrito presenta un protocolo para establecer un modelo de aneurisma de aorta abdominal en ratón utilizando cloruro de calcio y elastasa, combinando las ventajas de los métodos de modelado anteriores. Este modelo se puede utilizar para investigar los mecanismos fisiopatológicos subyacentes a los aneurismas de aorta abdominal.

Un modelo de aneurisma de aorta abdominal de ratón por infiltración periadventicial de cloruro de calcio y elastasa

Este protocolo describe un enfoque quirúrgico metódico para modelar aneurismas de aorta abdominal avanzados en ratones mediante una combinación de aplicación directa de elastasa a la aorta infrarrenal y administración de ß-aminopropionitrilo a través del agua potable.

Modelado avanzado de aneurisma de aorta abdominal en ratones mediante combinación de elastasa tópica y ß-aminopropionitrilo oral

Este protocolo proporciona un método repetible y fiable para inducir aneurismas de la aorta abdominal (AAA) en ratones C57BL/6 mediante sensibilización con elastina y aplicación de elastasa perivascular, como un modelo AAA que incorpora un componente de sensibilización inmune.

Creación fiable de un modelo de aneurisma aórtico abdominal murino utilizando sensibilización con elastina y elastasa perivascular

Aprenda a medir la velocidad de propagación de pulsos, la distensibilidad y la tensión radial en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal mediante ultrasonido de alta frecuencia. Esta técnica no invasiva permite monitorear cambios sutiles en la función aórtica.

Medición de la velocidad de propagación de pulsos, la distensión y la tensión en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal (Video) | JoVE Journal

Medición de la velocidad de propagación de pulsos, la distensión y la tensión en un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal

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