La incubación del miedo utilizando un protocolo de acondicionamiento del miedo extendido para ratas

Describimos un protocolo de acondicionamiento de miedo extendido que produce sobreentrenamiento e incubación del miedo en ratas. Este protocolo implica una sola sesión de entrenamiento con 25 emparejamientos de choque de tono (es decir, sobreentrenamiento) y una comparación de las respuestas de congelación condicionadas durante las pruebas de contexto y cue 48 h (corto plazo) y 6 semanas (a largo plazo) después del entrenamiento.

La memoria es un proceso psicológico que implica varias fases de adquisición, consolidación y recuperación de información. Durante la fase de consolidación, se produce el establecimiento de nuevas conexiones sinápticas y la modificación de las conexiones preexistentes. Esta fase de consolidación depende del valor de los estímulos con un rastro de memoria más fuerte cuando los estímulos son emocionalmente relevantes.

La mayoría de los estudios sobre la memoria emocional se han centrado en el núcleo de la amígdala y la relación con otras estructuras cerebrales. Este fenómeno ha estudiado principalmente con paramentos de condición de miedo. La condición del miedo es una forma de aprendizaje que permite aprender las relaciones entre los eventos aversivos y los estímulos neutros.

Uno de los procedimientos más utilizados es el acondicionamiento clásico o Pavloviano en mamíferos. Incluyendo roedores y humanos. En el caso de los roedores, los símbolos de condiciones o EE.UU. es típicamente una imagen que se presenta una o varias veces a través de una o varias sesiones.

Los protocolos de acondicionamiento del miedo suelen implicar choques de una a dos toneladas varían. Sin embargo, otra aversión menos utilizada implica rodamientos extensos no quemados. Esto se llama entrenamiento averso que resulta en un efecto de memoria de larga duración llamado una incubación del miedo.

La incubación del miedo implica el aumento de la intensidad de la respuesta condicionada con el tiempo. Estos en el malestar de la exposición adicional a otro evento de este tipo o estímulos condicionados. La comprensión reciente de la incubación del miedo en los nervios conductuales y neurobiológicos ha mostrado aislamiento a otros roedores y fenómenos psicológicos, incluyendo la respuesta retrasada para ciertos trastornos Aquí describimos una condición de miedo que se extiende en primer lugar en la que probamos memoria contextual y Cue durante 48 horas y seis semanas después y más de 20 sesiones.

Esto nos permite probar la fuerza de la memoria emocional con el tiempo. Selecciona 12 ratas Wistar machos y adultos y alojarlas en grupos de cuatro en una jaula, con acceso gratuito al agua durante todo el experimento. Mantener a las ratas en el 85% de su peso libre de alimentación, dando comida restringida en el mismo día, hora todos los días.

Asignar aleatoriamente sujetos a los siguientes grupos:Pruebas emocionales, seis semanas después del entrenamiento. Pruebas emocionales, 48 horas después del entrenamiento. Limpie todas las superficies internas de la cámara experimental y el suelo de rejilla con una solución de etanol al 10%.

Conecte los clips rojos y negros del calibrador de intensidad de choque a dos varillas en el suelo de la rejilla. Conecte el cable USB al puerto correspondiente del ordenador. Inicie el software calibrador de intensidad de choque.

Elija una intensidad de milimperios en la aplicación haciendo clic en el botón. A continuación, cambie el interruptor run/stop para ejecutarlo. Utilice el estimulador aversivo y observe la intensidad de choque que se muestra en el panel de la aplicación.

Si es necesario, ajuste la intensidad a un miliamperio con la perilla del estimulador aversivo. Cierre la cámara experimental y suene la caja de narración. Inicie el software del sistema de detección de congelación y abra la ventana de diálogo experimental.

Introduzca los detalles de cada asunto y cargue el archivo de protocolo de entrenamiento. Elija la cámara correspondiente y marque la opción de vídeo lateral. Establezca el umbral de movimiento en 100 y una relación de congelación mínima en 13 fotogramas.

Compruebe que la transmisión en directo de la cámara elegida aparezca en la pantalla. Junto con el gráfico de umbral de movimiento y la línea de tiempo de los diferentes estímulos que se presentan durante el entrenamiento. Haga clic en la opción de calibrar tres veces mientras comprueba que el índice de movimiento permanece por debajo de 100 A continuación, seleccione el equipo que desea bloquear haciendo clic en el botón correspondiente en la pantalla.

Introducir el sujeto experimental a la cámara. Comience la sesión haciendo clic en el botón de grabación, 25 emparejamientos de choque de tono o pruebas se entregan con un intervalo de prueba entre pruebas de 60 segundos. Comenzando en el minutario de la sesión.

El tono se presenta durante los últimos 10 segundos de cada intervalo de prueba y el choque durante los dos últimos segundos de cada intervalo de prueba. Retire la rata de la cámara experimental cuando termine la sesión de 28 minutos. Devuelva a los animales a su respectiva jaula de origen.

Transporte a la rata en su armario de jaulas de casa. Desde la sala de entrenamiento conductual hasta el centro de cuidado de animales. Las ratas permanecen 48 horas o seis semanas sin ningún tratamiento dependiendo del grupo al que se les haya asignado.

Durante este período los animales descansan en sus jaulas de origen y se alojan individualmente. Controlar el peso de los animales dos veces por semana durante las seis semanas del período de incubación. Manipula suavemente a cada animal durante dos minutos mientras se pesan.

Seis animales pueden ser probados 48 horas después del tiempo. Esos seis animales deben ser probados seis semanas después. Repita la calibración del sistema de detección de congelación.

Cargue el nombre de archivo, el protocolo de prueba contextual. Inicie la sesión haciendo clic en el botón de grabación. Durante esta única sesión de prueba de contexto de 10 minutos, no se presentan estímulos.

Un día después de la prueba de contexto, repita los siguientes pasos con cada animal, dependiendo del grupo. Para cambiar el contexto visual, se insertó una pared envolvente de plástico en la cámara experimental. Para cambiar el contexto olfativo, se aplicó un uno por ciento de ácido acético a nuestro hisopo con cinta de algodón.

Que se colocó en la bandeja de metal, debajo del piso de la rejilla. Repita la calibración del sistema de detección de congelación utilizando un archivo diferente. Cargue el archivo denominado Protocolo de prueba Cue'Iniciar la sesión haciendo clic en el botón de grabación.

Durante esta sola sesión de prueba Cue de 15 minutos, el tono de estímulo condicionado se presenta 10 veces a partir del minuto tres de la sesión. Eso es 10 Pruebas Cue y el reinicio con el mismo entre las paredes de prueba en ausencia de choques. Utilice programación personalizada adicional para obtener:Un porcentaje de congelación a los tonos durante las sesiones de entrenamiento y Prueba de Cue.

B porcentaje de congelación para cada uno de los ocho contenedores de tres minutos de la sesión de entrenamiento. C porcentaje de congelación durante los primeros tres minutos de la sesión de entrenamiento. Considere esta última medida como congelación basal ya que no se presentaron choques ni huesos durante ese período de tres minutos.

Para obtener estos datos, abra el software del sistema de detección de congelación y siga estos pasos. Seleccione el archivo, los informes, el resumen de los componentes del banco. Seleccione el archivo cmd disponible en el repositorio gratuito Open Science Framework'Name y, a continuación, abra el archivo.

Cambie el umbral de movimiento a 100 y haga clic en Seleccionar archivos para analizar. Los archivos abiertos se pueden abrir en Microsoft Excel. Para su posterior análisis.

Por último, calcula la duración media de cada episodio de congelación. Para cada sesión dividiendo la duración total de congelación sobre el número total de episodios de congelación. Los animales fueron activos y exploraron la cámara experimental durante el período basal de tres minutos.

El tiempo de congelación de línea base fue significativamente menor en comparación con el resto de la sesión. Esto es un indicio de adquisición de miedo. La segmentación de la sesión de prueba en bandejas de tres minutos muestra que el porcentaje de tiempo asignado a la congelación alcanzó una asintota durante los tres primeros ensayos de choque.

Este hallazgo ha sido coherente en investigaciones anteriores e indicación de otra formación. El porcentaje de congelación de todos los animales durante el período de entrenamiento fue significativamente mayor que el período basal. Los animales analizados seis semanas después del entrenamiento mostraron porcentajes significativamente más altos de congelación durante la prueba de contexto que los animales probados a las 48 horas.

No se observaron diferencias en el tiempo de congelación entre las pruebas de entrenamiento y de memoria. La respuesta de congelación de los diferentes grupos de sujetos durante la prueba de contexto se examinó más a fondo con otras medidas. El nivel de actividad de los sujetos que se probaron seis semanas después del entrenamiento fue significativamente menor que el de los animales probados 48 horas después de la sección de acondicionamiento.

Los tiempos de congelación de los animales probados poco después del entrenamiento, fueron significativamente más bajos que los de los animales probados seis semanas después. Estos resultados indican un efecto de incubación del miedo. Un análisis de la reacción aversa de cada episodio de congelación indicó que los animales probados 48 horas de su sesión de acondicionamiento mostraron episodios de congelación más largos que los animales probados 48 horas después del entrenamiento.

Los porcentajes de congelación de todos los animales durante el inicio de la sesión de entrenamiento y la prueba de Cue fueron significativamente más bajos que durante el período de prueba de la prueba de Cue. Sólo la línea de base del animal analizado seis semanas más tarde en la prueba de Cue fue significativamente diferente del período de prueba de la prueba de Cue. La congelación media durante el entrenamiento de Cue fue significativamente menor que la congelación media durante la prueba de Cue después de seis semanas.

La congelación media durante el intervalo de pruebas en la prueba de Cue fue significativamente menor que la congelación media durante el intervalo de pruebas en el entrenamiento después de 48 horas. Aquí describimos un protocolo de condicionamiento de miedo extendido que produjo sobre el entrenamiento en la rata de incubación del miedo. Es un enfoque eficiente y válido para evaluar la memoria emocional a través de cortos 48 horas y períodos a largo plazo de seis semanas.

Existe una evidencia farmacológica, fisiológica y anatómica de montaña que apoya su validez para evaluar fenómenos de memoria emocional. Entre las diferentes ventajas de este protocolo se encuentran las siguientes: En primer lugar, los dos primeros tipos de prueba de memoria, a saber, contextual y Cue. Esta prueba permite identificar el efecto diferencial de la prueba de la línea para el contexto y Cue.

En segundo lugar, requiere una sola sesión de entrenamiento de 28 minutos que a su vez produce un efecto a largo plazo que va más allá de varias semanas. Esta ventaja es notable teniendo en cuenta que alguna persona esperaba que el condicionamiento del miedo necesita al menos 100 choques en 10 sesiones de entrenamiento. El miedo ofrece varias alternativas de medición que se calculan automáticamente.

En comparación con otros paradigmas de condicionamiento del miedo con breves sesiones de entrenamiento. Los protocolos extendidos que producen efectos de entrenamiento reacios han recibido menos atención. Un efecto relevante asociado con un entrenamiento tan reacio es la incubación del miedo que recientemente comenzó a entenderse a nivel conductual y neurobiológico.

Y parece estar relacionado con otros fenómenos, incluyendo el retraso en la aparición del trastorno de estrés postraumático. Recomendaciones finales para las mejores implementaciones e investigación de estos protocolos incluye:limpieza correcta de la cámara experimental, especialmente el suelo de agarre. Calibración, la intensidad del choque antes de encender el amortiguador y calibrar el sistema de detección de congelación.

Este protocolo podría ser probado con todas las razas de ratas u otros roedores. En esos casos es importante ajustar el umbral de movimiento y la intensidad del choque.