Name: Modelo de dolor crónico post-ischemia para el síndrome de dolor regional complejo tipo I en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Aprende a establecer el modelo de dolor crónico post-isquemia en ratas para estudiar el síndrome de dolor regional complejo tipo I. Evalúa hipersensibilidad mecánica, térmica y comportamientos nocifensivos inducidos por capsaicina.

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Este proyecto fue patrocinado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81873365 y 81603676), los Fondos Provinciales de Ciencias Naturales de Zhejiang para Académicos Jóvenes Distinguidos (LR17H270001) y fondos de investigación de la Universidad Médica China de Zhejiang ( Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19).

Los protocolos de los animales fueron aprobados por el Comité de ética animal de la Universidad Médica China de Zhejiang.
1. Animales
<ol><li>Obtener ratas macho Sprague-Dawley (SD) (280–320 g, 8-10 semanas de edad) de Shanghai Laboratory Animal Center. Casa de los animales en Zhejiang Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad Médica China. Tenga en cuenta que las condiciones de reproducción deben incluir ciclos de luz/oscuridad de 12 h/ 2h y mantener la temperatura constante a 24 oC. Proporcionar agua y alimentos ad libitum. Tenga en cuenta que un total de 48 ratas se utilizan en este estudio. Una nota, en este modelo, tenemos que observar la respuesta del dolor durante todo el proceso. Si se aplican analgésicos, entonces no podemos establecer con éxito el modelo de dolor. Después de los experimentos, las ratas son sacrificadas.</li>
</ol>2. Establecimiento de modelos CPIP
<ol><li>Anestetizar todas las ratas (incluidos los grupos de modelos falsos y CPIP) con fenobarbital sódico (50 mg/kg, inyección intraperitoneal [i.p.]). Mantenga la anestesia con hasta 20 mg/kg/h fenobarbital [i.p.], si es necesario. Compruebe los reflejos de cada animal pellizcando su pata trasera o la punta de la cola usando fórceps. Asegúrese de que las ratas no son sensibles antes del establecimiento del modelo. Coloque pomada de veterinario en los ojos para evitar la sequedad durante el procedimiento. Colocar las ratas anestesiadas sobre una almohadilla calentada mantenida a 37oC para el siguiente procedimiento.</li>
	<li>
Isquemia y reperfusión de la pata trasera
	<ol>
<li>Lubricar la pata trasera derecha y el tobillo con glicerol una vez anestesiada.</li>
		<li>Deslice una placa tórica de nitrilo 70 durómetro con un diámetro interno de 7/32" (5,5 mm) en el lado más grande de un tubo Eppendorf de 1,5 ml (con la tapa a presión cortada antes de su uso). Inserte cuidadosamente la pata trasera en el tubo hueco de Eppendorf hasta llegar a la parte inferior.</li>
		<li>Deslice gradualmente la junta tórica desde el tubo hasta la extremidad posterior derecha cerca de la articulación del tobillo y colóquela durante 3 h. Aplicar el mismo tratamiento a un grupo falso de ratas, excepto que una junta tórica rota, que se corta y no debe inducir isquemia, debe colocarse alrededor del tobillo.</li>
		<li>Cortar la tórtela 3 h después del paso de isquemia. Vigila cuidadosamente a la rata hasta que recupere suficiente conciencia para mantener la recumbencia esternal. Tenga en cuenta que la rata que recibió anestesia no debe ser colocada de nuevo a la compañía de otras ratas hasta que se recupere por completo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Pruebas de comportamiento nocifensivas
<ol><li>Coloque la rata en una cámara transparente de plexiglás que esté sentada sobre un suelo de malla. Habitua rrata durante 0,5 horas antes de cualquier prueba de comportamiento.</li>
	<li>
Alodinia mecánica
	<ol>
<li>Utilice filamentos von Frey (filamentos de 0,4, 0,6, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 8.0, 15,0 y 26,0 g) para la prueba. Comience la prueba desde el filamento medio (4,0 g). Aplicar verticalmente los filamentos a la superficie plantar media de la pata trasera. Aplique ligeramente una fuerza adecuada para doblar el filamento durante un máximo de 5 s. Una retracción repentina de la pata trasera en respuesta a los estímulos se considera un comportamiento nocifensivo. Realizar la prueba de alodynia mecánica en los días -3, -2, -1, y cada dos días hasta el día 13.</li>
		<li>Aplique el método de prueba descendente para probar el umbral. Aplicar el método Dixon para calcular el umbral de retirada de pata del 50% (PWT)13,14,15.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hiperalgesia térmica
	<ol>
<li>Utilice el método de Hargreaves para examinar la hiperalgesia térmica. Apunte directamente el haz de luz emitido desde una bombilla (50 W) a la pata trasera para medir la latencia de retirada de la pata (PWL). Establecer 20 s como umbral de corte para evitar lesiones excesivas de la calefacción.</li>
		<li>Repita cada prueba 3 veces en intervalos de 5 minutos para cada pata trasera. Tome el promedio de estas tres pruebas como el PWL de cada rata16. Realizar la prueba de hiperalgesia térmica en los días -3, -2, -1, y cada dos días hasta el día 13.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Comportamiento nocifensivo agudo inducido por la capsaicina
	<ol>
<li>Preparar la solución de stock de capsaicina (200 mM) utilizando dimetil sulfóxido (DMSO) y diluir aún más a 1:1000 en solución salina estéril con fosfato (PBS) para la inyección de pata trasera. La concentración final de DMSO en PBS es del 0,1% (el vehículo contiene 0,1% dmso solo en PBS). Inyectar capsaicina o vehículo en la pata trasera (inyección intraplantar) a un volumen de 50 ml utilizando una aguja de 30 G unida a la jeringa de 1 ml.</li>
		<li>Registre el comportamiento nocifensivo (es decir, lamer, morder o estremecer la pata inyectada) utilizando una cámara de vídeo durante 10 minutos justo después de la inyección y cuantificado posteriormente como se describió anteriormente17,18,19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Evaluación del edema de pata trasera: Evalúe el edema de pata trasera midiendo el aumento del diámetro de la pata. Mida con una pinza digital y calcule la diferencia entre el valor basal y el valor de prueba observado en diferentes puntos de tiempo. Evaluar los cambios en el espesor de la pata a 15 min, 24 h, 48 h, y 72 h después del establecimiento del modelo.</li>
</ol>

<ol><li>Goh, E. L., Chidambaram, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+recent+update%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%2C+Trauma%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a recent update.</a> Burns, Trauma. 5 (1), 2(2017).</li>
<li>Birklein, F., Ajit, S. K., Goebel, A., Rsgm, P., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome+-+phenotypic+characteristics+and+potential+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome - phenotypic characteristics and potential biomarkers.</a> Nature Reviews Neurology. 14 (5), (2018).</li>
<li>Shim, H., Rose, J., Halle, S., Shekane, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+a+narrative+review+for+the+practising+clinician%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: a narrative review for the practising clinician.</a> British Journal of Anaesthesia. , (2019).</li>
<li>Urits, I., Shen, A. H., Jones, M. R., Viswanath, O., Kaye, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+Regional+Pain+Syndrome%2C+Current+Concepts+and+Treatment+Options%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain%2C+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Complex Regional Pain Syndrome, Current Concepts and Treatment Options.</a> Current Pain, Headache Reports. 22 (2), 10(2018).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+complex+regional+pain+syndrome+to+mice+via+human+autoantibodies+is+mediated+by+interleukin-1-induced+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+National+Academy+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transfer of complex regional pain syndrome to mice via human autoantibodies is mediated by interleukin-1-induced mechanisms.</a> Proceedings of National Academy Sciences of the United States of America. 116 (26), 13067-13076 (2019).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-Type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-Type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1), 94-105 (2004).</li>
<li>Coderre, T. J., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hypothesis+for+the+cause+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28reflex+sympathetic+dystrophy%29%3A+pain+due+to+deep-tissue+microvascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Medicine%22%5BJournal%5D)">A hypothesis for the cause of complex regional pain syndrome-type I (reflex sympathetic dystrophy): pain due to deep-tissue microvascular pathology.</a> Pain Medicine. 11 (8), 1224-1238 (2010).</li>
<li>Klafke, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+nociceptive+phases+observed+in+a+rat+hind+paw+ischemia%2Freperfusion+model+depend+on+different+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic nociceptive phases observed in a rat hind paw ischemia/reperfusion model depend on different mechanisms.</a> Pflugers Archiv European Journal of Physiology. 468 (2), 229-241 (2015).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+astrocytic+colony+stimulating+factor+and+its+receptor+on+microglia+mediates+central+sensitization+and+behavioral+hypersensitivity+in+chronic+post+ischemic+pain+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behavioral+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interaction between astrocytic colony stimulating factor and its receptor on microglia mediates central sensitization and behavioral hypersensitivity in chronic post ischemic pain model.</a> Brain Behavioral Immunology. 68, 248-260 (2018).</li>
<li>Kim, J. H., Kim, Y. C., Nahm, F. S., Lee, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Therapeutic+Effect+of+Vitamin+C+in+an+Animal+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Produced+by+Prolonged+Hindpaw+Ischemia-Reperfusion+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The Therapeutic Effect of Vitamin C in an Animal Model of Complex Regional Pain Syndrome Produced by Prolonged Hindpaw Ischemia-Reperfusion in Rats.</a> International Journal of Medical Sciences. 14 (1), 97-101 (2017).</li>
<li>Yin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+profiling+of+dorsal+root+ganglia+in+a+rat+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type-I+reveals+potential+mechanisms+involved+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptome profiling of dorsal root ganglia in a rat model of complex regional pain syndrome type-I reveals potential mechanisms involved in pain.</a> Journal of Pain Research. 12, 1201-1216 (2019).</li>
<li>Hu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+Channel+Contributes+to+the+Behavioral+Hypersensitivity+in+a+Rat+Model+of+Complex+Regional+Pain+Syndrome+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">TRPV1 Channel Contributes to the Behavioral Hypersensitivity in a Rat Model of Complex Regional Pain Syndrome Type 1.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 453(2019).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+analysis+of+experimental+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Chai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroacupuncture+Alleviates+Pain+Responses+and+Inflammation+in+a+Rat+Model+of+Acute+Gout+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Electroacupuncture Alleviates Pain Responses and Inflammation in a Rat Model of Acute Gout Arthritis.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2018, 2598975(2018).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Fang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameter-specific+analgesic+effects+of+electroacupuncture+mediated+by+degree+of+regulation+TRPV1+and+P2X3+in+inflammatory+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Parameter-specific analgesic effects of electroacupuncture mediated by degree of regulation TRPV1 and P2X3 in inflammatory pain in rats.</a> Life Sciences. 200, 69-80 (2018).</li>
<li>Tai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+Transient+Receptor+Potential+Cation+Channel+Member+A1+activation+in+the+irritation+and+pain+response+elicited+by+skin-lightening+reagent+hydroquinone%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Involvement of Transient Receptor Potential Cation Channel Member A1 activation in the irritation and pain response elicited by skin-lightening reagent hydroquinone.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7532(2017).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM8+is+the+principal+mediator+of+menthol-induced+analgesia+of+acute+and+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">TRPM8 is the principal mediator of menthol-induced analgesia of acute and inflammatory pain.</a> Pain. 154 (10), 2169-2177 (2013).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+Phospholipid+OxPAPC+Activates+TRPA1+and+Contributes+to+Chronic+Inflammatory+Pain+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidized Phospholipid OxPAPC Activates TRPA1 and Contributes to Chronic Inflammatory Pain in Mice.</a> PLoS One. 11 (11), 0165200(2016).</li>
<li>Terkelsen, A. J., Gierthmuhlen, J., Finnerup, N. B., Hojlund, A. P., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+hypersensitivity+to+capsaicin%2C+thermal%2C+and+mechanical+stimuli+in+unilateral+complex+regional+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Bilateral hypersensitivity to capsaicin, thermal, and mechanical stimuli in unilateral complex regional pain syndrome.</a> Anesthesiology. 120 (5), 1225-1236 (2014).</li>
<li>Drummond, P. D., Morellini, N., Finch, P. M., Birklein, F., Knudsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regional+pain+syndrome%3A+intradermal+injection+of+phenylephrine+evokes+pain+and+hyperalgesia+in+a+subgroup+of+patients+with+upregulated+alpha1-adrenoceptors+on+dermal+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Complex regional pain syndrome: intradermal injection of phenylephrine evokes pain and hyperalgesia in a subgroup of patients with upregulated alpha1-adrenoceptors on dermal nerves.</a> Pain. 159 (11), 2296-2305 (2018).</li>
<li>Minert, A., Gabay, E., Dominguez, C., Wiesenfeld-Hallin, Z., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+pain+following+spinal+nerve+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous pain following spinal nerve injury in mice.</a> Experimental Neurology. 206 (2), 220-230 (2007).</li>
<li>Kingery, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsaicin+sensitive+afferents+mediate+the+development+of+heat+hyperalgesia+and+hindpaw+edema+after+sciatic+section+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Capsaicin sensitive afferents mediate the development of heat hyperalgesia and hindpaw edema after sciatic section in rats.</a> Neuroscience Letters. 318 (1), 39-43 (2002).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+cannabinoid+receptor+2+attenuates+mechanical+allodynia+and+neuroinflammatory+responses+in+a+chronic+post-ischemic+pain+model+of+complex+regional+pain+syndrome+type+I+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Activation of cannabinoid receptor 2 attenuates mechanical allodynia and neuroinflammatory responses in a chronic post-ischemic pain model of complex regional pain syndrome type I in rats.</a> European Journal of Neuroscience. 44 (12), 3046-3055 (2016).</li>
<li>Coderre, T. J., Xanthos, D. N., Francis, L., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+post-ischemia+pain+%28CPIP%29%3A+a+novel+animal+model+of+complex+regional+pain+syndrome-type+I+%28CRPS-I%3B+reflex+sympathetic+dystrophy%29+produced+by+prolonged+hindpaw+ischemia+and+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Chronic post-ischemia pain (CPIP): a novel animal model of complex regional pain syndrome-type I (CRPS-I; reflex sympathetic dystrophy) produced by prolonged hindpaw ischemia and reperfusion in the rat.</a> Pain. 112 (1-2), 94-105 (2004).</li>
<li>Weissmann, R., Uziel, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+complex+regional+pain+syndrome%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Rheumatology+Online+Journal%22%5BJournal%5D)">Pediatric complex regional pain syndrome: a review.</a> Pediatric Rheumatology Online Journal. 14 (1), 29(2016).</li>
<li>Kim, H., Lee, C. H., Kim, S. H., Kim, Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+complex+regional+pain+syndrome+in+Korea%3A+An+electronic+population+health+data+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of complex regional pain syndrome in Korea: An electronic population health data study.</a> PLoS One. 13 (6), 0198147(2018).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+complex+regional+pain+syndrome+type+I+%28CRPS-I%29+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">Sex differences in complex regional pain syndrome type I (CRPS-I) in mice.</a> Journal of Pain Research. 10, 1811-1819 (2017).</li>
</ol>

Los autores no declaran conflictos de intereses en esta obra.

Este protocolo describe los métodos detallados para establecer un modelo CPIP de rata mediante la aplicación de isquemia/reperfusión a las extremidades posteriores de las ratas. Implica la evaluación de la apariencia de las extremidades posteriores, edema, hipersensibilidades mecánicas / térmicas, y comportamientos nocifensos agudos en respuesta a la inyección de capsaicina.
La isquemia/reperfusión de extremidades es un factor común que contribuye a CRPS-I en pacientes humanos<sup class="xref"...

El síndrome de dolor regional complejo (CRPS) retrata los síntomas de dolor complejo y crónico resultantes de fracturas, traumatismos, cirugía, isquemia o lesión nerviosa1,2,3. CRPS se clasifica en 2 subcategorías: CRPS tipo-I y tipo II (CRPS-I y CRPS-II)4. Los estudios epidemiológicos revelaron que la prevalencia de CRPS fue de aproximadamente 1:20005. CRPS-I, que no muestra ningún daño nervioso obvio, puede resultar en dolor crónico y afecta dramáticamente la calidad de vida de los pacientes. Los tratamientos disponibles actuales muestran efectos terapéuticos inadecuados. Por lo tanto, crPS-I sigue siendo un problema clínico importante y desafiante que debe abordarse.
Establecer un modelo animal preclínico que imite CRPS-I es crucial para explorar los mecanismos subyacentes a CRPS-I. Para abordar esta cuestión, Coderre et al. diseñaron un modelo de rata aplicando isquemia prolongada y reperfusión a la extremidad posterior para recapitular CRPS-I6. Se sabe que la isquemia/lesión por reperfusión es una de las principales causas de CRPS-I7. El modelo CPIP de rata presenta muchos síntomas similares a CRPS-I, que incluyen edema en las extremidades posteriores e hiperemia en la etapa temprana después del establecimiento del modelo, seguido con hipersensibilidades térmicas y mecánicas persistentes6. Con la ayuda de este modelo, se propone que la sensibilización central del dolor, la activación periférica del canal TRPA1 y la generación reactiva de especies de oxígeno, etc. contribuyan a CRPS-I8,9,10. Recientemente establecimos con éxito el modelo de rata CPIP y realizamos la secuenciación de ARN de los ganglios de raíz dorsal (DRG) que inervan la pata trasera afectada11. Descubrimos algunos mecanismos potenciales que posiblemente están involucrados en la mediación de las hipersensibilidades del dolor de CRPS-I11. Además, identificamos el canal vanilloide potencial del receptor transitorio 1 (TRPV1) en las neuronas DRG como un importante contribuyente a las hipersensibilidades mecánicas y térmicas de CRPS-I12.
En este estudio, describimos los procedimientos detallados involucrados en el establecimiento del modelo de ratas del CPIP. Evaluamos aún más el modelo CPIP de rata midiendo las hipersensibilidades mecánicas y térmicas, así como su capacidad de respuesta al desafío de la capsaicina aguda. Proponemos que el modelo CPIP de rata pueda ser un modelo animal fiable para una investigación ulterior de los mecanismos involucrados en el CRPS-I.

<table><tbody><tr><td>Tubo Eppendorf de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1435</td><td></td></tr><tr><td>Capsaicina</td><td>APEXBIO</td><td>A3278</td><td></td></tr> Pinza <tr><td>digital</td><td>Meinaite</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Junta tórica</td><td>Juntas tóricas</td><td>Nitrilo Oeste 70 Durómetro</td><td>7/32 pulg. diámetro interno</td></tr><tr><td>Aparato de prueba plantar</td><td>UGO Basile, Italia</td><td>37370</td><td></td></tr><tr><td>filamentos von Frey</td><td>UGO Basile, Italia</td><td>NC12775</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de dolor crónico post-ischemia para el síndrome de dolor regional complejo tipo i en ratas

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

El síndrome de dolor regional complejo tipo I (CRPS-I) es una enfermedad neurológica que causa dolor intenso entre los pacientes y sigue siendo una condición médica no resuelta. Sin embargo, los mecanismos subyacentes del CRPS-I aún no se han revelado. Se sabe que la isquemia/reperfusión es uno de los principales factores que causa CRPS-I. Mediante la isquemia prolongada y la reperfusión de la extremidad posterior, se ha establecido el modelo de dolor post-isquemia crónico de rata (CPIP) para imitar el CRPS-I. El modelo CPIP se ha convertido en un modelo animal bien reconocido para estudiar los mecanismos de CRPS-I. Este protocolo describe los procedimientos detallados involucrados en el establecimiento del modelo de rata de CPIP, incluida la anestesia, seguido de la isquemia/reperfusión de la extremidad posterior. Las características del modelo CPIP de rata se evalúan además midiendo las hipersensibilidades mecánicas y térmicas de la extremidad posterior, así como las respuestas nocifensivas a la inyección de capsaicina aguda. El modelo CPIP de rata exhibe varias manifestaciones CRPS-I-como, incluyendo edema en las extremidades posteriores e hiperemia en la etapa temprana después del establecimiento, hipersensibilidades térmicas y mecánicas persistentes, y el aumento de las respuestas nocifensivas a la inyección aguda de capsaicina. Estas características lo convierten en un modelo animal adecuado para una investigación ulterior de los mecanismos involucrados en el CRPS-I.

Después de colocar la tela tórica en el tobillo, la piel ipsilateral de la pata trasera mostró cianosis, una indicación de hipoxia tisular(Figura 1A). Después de cortar la tela tórica, la pata trasera ipsilateral comenzó a llenarse de sangre y mostró hinchazón robusta, lo que demostró un intenso signo de hiperemia(Figura 1A). La hinchazón de la pata disminuyó gradualmente y volvió a la normalidad 48 h después del procedimiento i...

Aquí se proporciona un protocolo que detalla los pasos para establecer un modelo animal de dolor crónico post-isquemia (CPIP). Este es un modelo bien reconocido que imita el síndrome de dolor regional complejo humano tipo I. Se evalúan más a fondo las hipersensibilidades mecánicas y térmicas, así como los comportamientos nocifensos inducidos por la capsaicina observados en el modelo de rata CPIP.

Modelo de dolor crónico post-ischemia para el síndrome de dolor regional complejo tipo I en ratas

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

El mecanismo subyacente a CRPS I sigue sin estar claro. Establecer un modelo animal preclínico que miite el CRPS I será crucial para explorar los mecanismos subyacentes a CRPS I.El modelo CPIP de rata exhibe muchos CRPS I como simitance, que incluyen edema de la extremidad posterior e hiperemia en la etapa temprana. Después del establecimiento del modelo, seguido de hipersensibilidades térmicas y mecánicas persistentes.Comience por anestesiar a todas las ratas con fenobarbital sódico. Asegúrese de que las ratas estén correctamente anestesiadas pellizcando su pata trasera o cola con fórceps. Y coloca la pomada veterinaria en los ojos.Mantenga a la rata en una almohadilla calentada de 37 grados Celsius durante el procedimiento. Lubricar la pata trasera derecha y el tobillo con glicerol. A continuación, deslice un anillo de nitrilo 70 durómetro O en el lado más grande de un tubo de un punto de cinco mililitros con la tapa de presión cortada.Inserte cuidadosamente la pata trasera en el tubo hueco hasta que llegue a la parte inferior. Deslice gradualmente el anillo O del tubo hacia la extremidad posterior derecha cerca de la articulación del tobillo. Y déjalo ahí por tres horas.Aplicar el mismo tratamiento al grupo falso de ratas, excepto con un anillo O roto que no debe inducir isquemia. Después de tres horas, corta el anillo O y monitorea a la rata hasta que recupere la conciencia suficiente para mantener la reclinación esternal. No coloque la rata en compañía de otras ratas hasta que esté completamente recuperada de la anestesia.Coloque la rata en una cámara de plexiglás transparente en un piso de malla, y habituar a la rata al medio ambiente durante 30 minutos antes de cualquier prueba de comportamiento. Utilice filamentos von frey para probar la rata en busca de alodinia mecánica. Comience la prueba desde el filamento medio aplicándolo verticalmente a la superficie plantar media de la pata trasera.Aplique la fuerza adecuada para doblar el filamento durante un máximo de cinco segundos. Una retracción repentina de la pata se considera un comportamiento nocifensivo. Realice la prueba de alodinia mecánica en los días tres, dos, uno y cada dos días hasta el día 13.Aplique el método de prueba arriba hacia abajo para probar el umbral y un método dickson para calcular el umbral de retirada de la pata del 50 por ciento. Para probar la hiperalgesia térmica, utilice el método hargreaves apuntando directamente el haz de luz emitido desde una bombilla de 50 vatios a la pata trasera. Mida la latencia de retirada de la pata, estableciendo 20 segundos como umbral de corte para evitar lesiones excesivas.Repita cada prueba tres veces en intervalos de cinco minutos para cada pata trasera, y tome el promedio como latencia de retirada de la pata. Realice la prueba de hiperalgesia térmica en los días tres, dos, uno y cada dos días hasta el día 13. Para probar el comportamiento nocifensivo agudo inducido por capsaicina, preparar la solución de 200 cápsulas de capsaicina milimolar con DMSO, y diluir aún más uno a 1,000 en PBS para inyección.La capsaicina es un reactivo, que puede causar irritación articular en la piel, los ojos y la respiración. Es importante usar una máscara y gafas al preparar la solución de capsaicina. A continuación, inyecte 50 microlitros de la capsaicina o un vehículo en la pata trasera con una aguja de calibre 30 unida a una jeringa de un mililitro.Grabe el comportamiento nocifensivo, como lamer, morder o esmerzar la pata inyectada con una cámara de video durante 10 minutos después de la inyección. Evalúe el edema de pata trasera midiendo el aumento en el diámetro de la pata a 15 minutos, 24 horas, 48 horas y 72 horas después del establecimiento del modelo. Después de colocar el anillo O en el tobillo, la piel ipsilateral de la pata trasera mostró cianosis, una indicación de hipoxia tisular.Después de cortar el anillo O, la pata comenzó a llenarse de sangre y mostró una hinchazón robusta, lo que indica una hiperemia intensa. La hinchazón disminuyó gradualmente y volvió a la normalidad 48 horas después del procedimiento. Un día después del establecimiento del modelo, la pata trasera ipsilateral del grupo CPIP exhibió alodinia mecánica obvia que persistió durante 13 días del período de tiempo de observación.La pata trasera contralateral del grupo CPIP también mostró hiperalgesia mecánica durante 13 días. Cuando se midió la hiperalgesia térmica, las patas traseras bilaterales de ratas CPIP mostraron una latencia de abstinencia significativamente menor en respuesta a estímulos térmicos nocivos, en comparación con las ratas del grupo falso. La hiperalgesia térmica de la pata trasera ipsilateral persistió hasta el final del marco de tiempo de observación, mientras que la hiperalgesia térmica de la pata trasera contralateral duró siete días.Los grupos falsos y CPIP se analizaron para detectar el comportamiento nocifensivo con la inyección de capsaicina. Cuando se inyectó un vehículo, el grupo falso mostró una ligera respuesta nocifensiva y el grupo CPIP mostró una respuesta significativamente mayor. Más importante aún, ratas CPIP mostraron respuestas significativamente más altas a la inyección de capsaicina que el grupo falso, lo que sugiere que las ratas CPIP exhiben un fenómeno similar a los pacientes humanos con CRPS I.By este procedimiento, las ratas son anestesiadas antes y durante el establecimiento modelo.El modelo de rata CPIP descrito en este protocolo establecido por isquemia y CRPS I humano como simitance. Familias de estos modelos, más mecanismo sobre CRPS I se puede explorar.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Behavior

Comportamiento

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