Name: Preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Aprenda a preparar propagaciones de cromosomas meióticos a partir de espermatocitos de Danio rerio. Este protocolo de extensión nuclear permite visualizar la arquitectura cromosómica durante la profase I mediante microscopía de súper resolución con menos residuos.

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Agradecemos a Trent Newman y Masuda Sharifi por sus comentarios sobre el manuscrito y An Nguyen por ayudar a optimizar los métodos para difundir y manchar cromosomas de meiocitos de peces cebra. Este trabajo fue apoyado por NIH R01 GM079115 otorgado a S.M.B.

<ol><li>Nagaoka, S. I., Hassold, T. J., Hunt, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+aneuploidy%3A+mechanisms+and+new+insights+into+an+age-old+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Human aneuploidy: mechanisms and new insights into an age-old problem.</a> Nature Reviews Genetics. 13, 493-504 (2012).</li>
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<li>Feitsma, H., Leal, M. C., Moens, P. B., Cuppen, E., Schulz, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mlh1+Deficiency+in+Zebrafish+Results+in+Male+Sterility+and+Aneuploid+as+Well+as+Triploid+Progeny+in+Females%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Mlh1 Deficiency in Zebrafish Results in Male Sterility and Aneuploid as Well as Triploid Progeny in Females.</a> Genetics. 175, 1561-1569 (2007).</li>
<li>Dia, F., Strange, T., Liang, J., Hamilton, J., Berkowitz, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Meiotic+Chromosome+Spreads+from+Mouse+Spermatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Mouse Spermatocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e55378(2017).</li>
<li>Moens, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+chiasmata+and+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Genome%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: chiasmata and interference.</a> Genome. 49, 205-208 (2006).</li>
<li>Lisachov, A. P., Zadesenets, K. S., Rubtsov, N. B., Borodin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+chromosome+synapsis+and+recombination+in+male+guppies%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Sex chromosome synapsis and recombination in male guppies.</a> Zebrafish. 12 (2), 174-180 (2015).</li>
<li>Ocalewicz, K., Mota-Velasco, J. C., Campos-Ramos, R., Penman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FISH+and+DAPI+staining+of+the+synaptonemal+complex+of+the+Nile+tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+allow+orientation+of+the+unpaired+region+of+bivalent+1+observed+during+early+pachytene%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Research%22%5BJournal%5D)">FISH and DAPI staining of the synaptonemal complex of the Nile tilapia (Oreochromis niloticus) allow orientation of the unpaired region of bivalent 1 observed during early pachytene.</a> Chromosome Research. 17 (6), 773(2009).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Aquí describimos métodos para sondear la ubicación de los telómeros y las proteínas asociadas al cromosoma en las propagaciones de superficies nucleares de espermatocitos aislados de los testículos de peces cebra. Esperamos que estos métodos sean aplicables para el análisis de espermacitos en otras especies de teleost con ajuste al tamaño de los testículos.
Mientras que sólo unos pocos anticuerpos han sido elevados a las proteínas meióticas de pez cebra, hemos tenido éxito utilizando los sigui...

La reproducción sexual procede a través de la combinación de dos gametos haploides, cada uno llevando la mitad del complemento cromosómico de una célula somática. La meiosis es una división celular especializada que produce gametos haploides a través de una ronda de replicación del ADN y dos rondas sucesivas de segregación cromosómica. En la profase I, los cromosomas homólogos (homólogos) deben someterse a emparejamiento, recombinación y sinapsis, el último de los cuales se caracteriza por la formación del complejo sinntántmal que comprende dos ejes homólogos puenteados por el filamento transversal, Sycp1(Figura 1A,B). La falta de ejecución adecuada de estos procesos puede conducir a la producción de gametos aneuploides, que son una causa principal de abortos espontáneos en los seres humanos1. Nuestro conocimiento de la coordinación entre emparejamiento, recombinación y sinapsis ha sido facilitado por estudios en una amplia gama de organismos, como levadura, C. elegans,ratón, y Drosophila,entre otros2. Si bien el proceso general de emparejamiento cromosómico homólogo seguido de segregación está bien conservado, su dependencia de la recombinación y la sinapsis y el orden de estos eventos varía.
La formación meiotica de rotura de doble cadena (DSB), que inicia una recombinación homóloga, se produce cerca de telómeros agrupados en el ramo durante el leptoteno y la sinapsis se produce poco después de3,4. Esta configuración de la formación DSB y la iniciación de la sinapsis es también una característica de la meiosis masculina en los seres humanos pero no en el ratón5,6,7,8, lo que sugiere que el pez cebra puede servir como modelo para la espermatogénesis humana. También hay varias ventajas prácticas de estudiar la meiosis de pez cebra. Tanto los machos como las hembras se someten a gametogénesis a lo largo de la edad adulta, sus gónadas son fácilmente accesibles, y cientos de crías se generan a partir de una sola cruz. Además, los embriones son transparentes y se desarrollan externamente, lo que facilita la detección precoz de aberraciones en el desarrollo embrionario debido a los gametos aneuploides3,9. Las desventajas de utilizar peces cebra son que son lentos para alcanzar la madurez sexual (60 días) y la cantidad de material necesario para las propagaciones de superficie nuclear debe recogerse de 10-20 animales adultos, dependiendo de su tamaño.
Las preparaciones de propagación cromosómica meiótica son una herramienta vital para estudiar la dinámica cromosómica en todos los organismos modelo, ya que se pueden sondear las firmas clave de la dinámica cromosómica meiótica. En el pez cebra, se han diseccionado aspectos clave de la progresión del programa meiótico y de la organización nuclear mediante sondeos de propagaciones superficiales nucleares, denominadas aquí diseminas cromosómicas, con anticuerpos para la detección de inmunofluorescencia de proteínas y/o ácidos nucleicos por FISH3,4,9,10,11,12. De hecho, la localización polarizada de telómeros agrupados en el ramo se puede conservar en la preparación de propagación(Figura 1C). Recientemente, hemos utilizado propagaciones cromosómicas de espermacitos de peces cebra junto con métodos de detección de fluorescencia y microscopía de superresolución para dilucidar la progresión detallada de la dinámica de los telómeros de pez cebra, el emparejamiento de cromosomas homólogos, la localización de roturas de doble cadena y la sinapsis en transiciones meióticas clave3. Aquí presentamos métodos para preparar las propagaciones cromosómicas de los espermismocitos de los testículos de peces cebra y posteriormente mancharlos con sondas de ácido nucleico péptido fluorescente (AnP) a secuencias repetidas de telómeros y detección de inmunofluorescencia de proteínas asociadas al cromosoma.

<table><tbody><tr><td>Tubos de centrífuga de 1,5 mL Varias</td><td>marcas comerciales disponibles</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bastidor de tubos de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>Varias marcas comerciales disponibles</td><td></td><td></td></tr><tr><td>16% de formaldehído, sin metanol</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>2 mL</td><td>Varias marcas comerciales disponibles</td><td></td><td></td></tr><tr><td>24 cubreobjetos de vidrio de 50 mm</td><td>Corning</td><td>2980-245</td><td></td></tr><tr><td>Cubreobjetos de vidrio de 24 x 60 mm</td><td>VWR International</td><td>16004-312</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cónicos de 50 ml</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>363696</td><td></td></tr><tr><td>Bolsa para autoclave</td><td>Varias marcas comerciales disponibles</td><td></td><td>Se utiliza para fabricar cubreobjetos de plástico.</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1605-100</td><td>Prepare una solución madre de 100 mg/ml en agua destilada estéril.</td></tr><tr><td>Filtro de células, 100 y micro; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>CF405M cabra anti-pollo IgY (H+L), altamente adsorbido</td><td>cruzado Biotium</td><td>203775-500uL</td><td>Uso a 1:1000</td></tr><tr><td>Pollo anti-zfSycp1</td><td>Generado por Burgess lab</td><td>N/A</td><td>Uso a 1:100</td></tr><tr><td>Colagenasa de Clostridium histolyticum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0130-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Frasco Coplin</td><td>Varios Marcas comerciales disponibles</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNasa I, grado II del páncreas bovino</td><td>Roche Diagnostics</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td></td><td>Pinzas de Fisher Scientific</td> MT10014CV <td></td></tr><tr><td>Dumont No. 5 Fine</td><td>Science Tools</td><td>11252-30</td> Se <td>requieren dos para diseccionar los testículos.</td></tr><tr><td>Tubos Eppendorf, 5 mL</td><td>VWR International</td><td>89429-308</td><td></td></tr><tr><td>Formamida</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP228-100</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario IgY (H+L) anti-pollo en cabra, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11039</td><td>Uso a 1:1000</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario IgY (H+L) antipollo en cabra, Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11042</td><td>Uso en 1:1000</td></tr><tr><td>Anti-hDMC1</td><td>de cabra Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-8973</td><td>No funciona en nuestras manos</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario de adsorción cruzada IgG (H+L) anti-conejo de cabra, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>Uso a 1:1000</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario de adsorción cruzada de IgG (H+L) anticonejo de cabra, Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>Uso a 1:1000</td></tr><tr><td>Suero</td> <td>de cabraSigma-Aldrich</td><td>G9023-10mL</td><td></td></tr><tr><td>Sal sódica de heparina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393-100KU</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de humedad</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-112-3683</td><td></td></tr><tr><td>Horno de hibridación</td><td>VWR International</td><td>230401V (Modelo 5420)</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de incubadora</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Model Classic C25</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimerbly-Clark Professional</td><td>34155</td><td>Se utiliza para la cámara de humedad</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher Microscopio Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Varias marcas comerciales disponibles</td><td></td><td>Cualquier microscopio estándar capaz de un aumento de al menos ~1,65X es suficiente.</td></tr><tr><td>Portaobjetos de microscopio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-7</td><td></td></tr><tr><td>Ratón anti-hámsterSCP3</td><td>Abcam</td><td>ab97672</td><td>No funciona en nuestras manos</td></tr><tr><td>Ratón anti-hMLH1</td><td>BD Biosciences</td><td>550838</td><td>No funciona en nuestras manos</td></tr><tr><td>Ratón anti-hRPA</td><td>Sigma-Alrich</td><td>MABE285</td><td>No funciona en nuestras manos</td></tr><tr><td>Na2HPO4 &middot; 7 H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S373-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td></td></tr><tr><td>Photo-Flo 200</td><td>solución Electrónica Microscopy Sciences</td><td>74257</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia de plástico Varias</td><td>marcas comerciales disponibles</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PNA TelC-Alexa647</td><td>PNA Bio Inc</td><td>F1013</td><td>Preparar según el fabricante' s instrucciones.</td></tr><tr><td>PNA TelC-Cy3</td><td>PNA Bio Inc</td><td>F1002</td><td>Prepare según las instrucciones del fabricante.</td></tr><tr><td>ProLong Diamond Mountant Anti-Fade Mountant</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36970</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond Antifade Mountant con DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36971</td><td></td></tr><tr><td>Conejo anti-hRPA</td><td>Bethyl</td><td>A300-244A</td><td>Uso a 1:300</td></tr><tr><td>Conejo anti-hSCP3</td><td>Abcam</td><td>ab150292</td><td>Uso a 1:200</td></tr><tr><td>Conejo anti-hRad51</td><td>GeneTex</td><td>GTX100469</td><td>Uso a 1:300</td></tr><tr><td>Citrato de sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>S279-500</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5-500</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras Supercut, ángulo de 30 grados, 10 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-822-353</td><td>También puede usar cualquier par de tijeras pequeñas.</td></tr><tr><td>Kit Sylgard</td><td>Fisher Scientific NC9897184</td><td></td><td>Prepare según las instrucciones del fabricante.</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100</td><td>Diluir en agua destilada estéril para hacer una solución de trabajo al 20%. Almacene a temperatura ambiente. Triton X-100 forma un precipitado cuando se diluye en agua; El precipitado se disuelve durante la noche.</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS003708</td><td></td></tr><tr><td>Inhibidor de tripsina de la clara de huevo de gallina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9253-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td>Diluir en agua destilada estéril para hacer una solución de trabajo al 20%. Almacene a temperatura ambiente.</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas - 4 mm (micro tijeras)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr></tbody></table>

preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra

Preparation of Meiotic Chromosome Spreads from Zebrafish Spermatocytes

La meiosis es el proceso celular clave necesario para crear gametos haploides para la reproducción sexual. Los organismos modelo han sido fundamentales para comprender los eventos cromosómicos que tienen lugar durante la profase meiótica, incluidos los eventos de emparejamiento, sinapsis y recombinación que aseguran la segregación cromosómica adecuada. Mientras que el ratón ha sido un modelo importante para entender los mecanismos moleculares subyacentes a estos procesos, no todos los eventos meióticos en este sistema son análogos a la meiosis humana. Recientemente demostramos el emocionante potencial del pez cebra como modelo de espermatogénesis humana. Aquí describimos, en detalle, nuestros métodos para visualizar cromosomas meióticos y proteínas asociadas en preparaciones de propagación cromosómica. Estas preparaciones tienen la ventaja de permitir el análisis de alta resolución de las estructuras cromosómicas. En primer lugar, describimos el procedimiento para disección de testículos de peces cebra adultos, seguido de disociación celular, lisis y propagación de los cromosomas. A continuación, describimos el procedimiento para detectar la localización de proteínas cromosómicas meióticas, mediante la detección de inmunofluorescencia, y secuencias de ácido nucleico, mediante hibridación in situ por fluorescencia (FISH). Estas técnicas comprenden un conjunto útil de herramientas para el análisis citológico de la arquitectura de la cromatina meiótica en el sistema de peces cebra. Los investigadores de la comunidad de peces cebra deben ser capaces de dominar rápidamente estas técnicas e incorporarlas a sus análisis estándar de la función reproductiva.

Hemos descrito un método para preparar y visualizar las preparaciones de propagación de espermatocitos de peces cebra. Cuando se realiza correctamente, nuestro procedimiento produce núcleos bien diseminados y no superpuestos. Para recuperar estos núcleos, es importante tener la cantidad adecuada de material de partida (es decir, testículos), tratar los testículos durante un período de tiempo suficiente en trippsina y un número adecuado de tratamientos DNase I. Estos diseminados se pueden ...

Las propagaciones de superficies nucleares son una herramienta indispensable para estudiar los eventos cromosómicos durante la meiosis. Aquí demostramos un método para preparar y visualizar cromosomas meióticos durante la profase I a partir de espermacitos de peces brabra.

Preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra

Meiosis is the key cellular process required to create haploid gametes for sexual reproduction. Model organisms have been instrumental in understanding ...

El pez cebra está emergiendo como un excelente modelo de vertebrados para estudiar los eventos cromosómicas de la meiosis, incluyendo el emparejamiento cromosómica homóloga, la sinapsis y la recombinación. Este protocolo de propagación de la superficie nuclear nos ha permitido visualizar las características clave de la arquitectura cromosómica meyótica utilizando una microscopía de super resolución. Los investigadores pueden esperar cientos de núcleos bien extendidos por diapositiva con menos escombros que otros protocolos de propagación de peces cebra.La parte técnicamente más difícil de este procedimiento es la disección de los testículos de pez cebra ya que está cerca de la piel y también se une a otros órganos. Visualizar el procedimiento de disección permitirá a los investigadores saber qué esperar cuando vean la gónada incrustada en el tejido del animal. Después de eutanasiar el pez cebra macho, decapitar un pez a la vez con tijeras pequeñas y luego utilizar micro tijeras para cortar a lo largo de la línea media ventral para exponer la cavidad del cuerpo.Coloque el pescado en un plato de Petri recubierto de silicona y cúbralo junto a una piscina poco profunda de 1X PBS. Bajo

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Research

Investigación

JoVE Journal

Genetics

Genética

Este es un método para la generación de embriones de pez cebra gynogenetic diploide (embriones, cuya única contribución genética proviene de la madre) por el bloqueo de la segunda división meiótica inmediatamente después de la fertilización con luz ultravioleta inactiva los espermatozoides. EP embriones no son totalmente homocigotos debido a la recombinación en la primera división meiótica, sin embargo, son homocigotos en todos los lugares que no han sido separados de sus centrómero por...

Hacer pez cebra Gynogenetic diploides por presión inicial

Se describe un protocolo para la preparación de distribuciones de cromosomas de plantas mitóticas de alta calidad mediante un método rápido de secado al aire adecuado para la detección FISH de sondas de ADN de copia única y alta.

Una caída Cromosoma Aire seco Rápido Método de preparación adecuados para FISH en Plantas

La mitosis es crítica para todo organismo vivo y los defectos a menudo conducen al cáncer y trastornos del desarrollo. Utilizando este protocolo de imagen y el pez cebra como sistema modelo, los investigadores pueden visualizar la mitosis en un organismo vertebrado vivo y la multitud de defectos que surgen cuando los procesos mitóticos son defectuosos.

La observación de la división mitótica y dinámica en un embrión de pez cebra en vivo

Un protocolo modificado para la manipulación de ploidía utiliza un choque de calor para inducir una parada de un ciclo en la citocinesis en el embrión temprano. Este protocolo se demuestra en el pez cebra, pero puede ser aplicable a otras especies.

La manipulación de ploidía de embriones de pez cebra con el Heat Shock Treatment 2

La meiosis es el proceso de desarrollo por que los gametos se forman a través de una sola ronda de replicación del ADN y dos series sucesivas de segregación cromosómica. Meiosis mamífera pueden examinarse mediante la utilización de una técnica para preparar extensiones de cromosoma meiótico. Aquí, demostramos un método de preparación de superficie de extensión núcleos de espermatocitos de ratón.

Preparación del cromosoma meiótico se extiende desde ratón espermatocitos

El objetivo principal de este estudio fue adaptar la aguja inmerso en procedimiento de vitrificación (NIV) para criopreservar los testículos todo pez cebra. Además, se evaluó la repetibilidad del método en cinco cepas diferentes de pez cebra.

Criopreservación de espermatogonios de pez cebra por todo los testículos aguja inmerso enfriamiento ultra rápido

Ovogénesis en mamíferos es conocido por ser errores, particularmente debido a protooncogenes del cromosoma. Este manuscrito describe métodos de preparación de cromatina extensión de profase de ratón, metafase I y II etapas ovocitos. Estas técnicas fundamentales permiten el estudio de las proteínas de la cromatina-limite y morfología cromosómicas en mamíferos Oogénesis.

Cromatina difundir preparados para el análisis de progresión de ovocitos de ratón de profase a metafase II

Aquí presentamos un método simple y eficiente para aislar células germinales meíticas y post-meyóticas vivas de los testículos de ratón adultos. Usando un tinte de unión de ADN excitado por violeta y clasificación celular activada por fluorescencia, se pueden aislar poblaciones de células espermatogénicas altamente enriquecidas para muchas aplicaciones posteriores.

Aislamiento de células espermatogénicas murinas usando un tinte de unión de ADN permeable a células violetas-excitado

Aquí, presentamos un método simple para separar células foliculares y ocitos en folículos ováricos de pez cebra, lo que facilitará las investigaciones del desarrollo ovárico en peces cebra.

Separación de células foliculares y ocitos en folículos ováricos de pez cebra

Las tecnologías CRISPR-Cas han revolucionado el campo de la edición del genoma. Sin embargo, encontrar y aislar la edición de la línea germinal deseada sigue siendo un cuello de botella importante. Por lo tanto, este protocolo describe un método robusto para examinar rápidamente el esperma de pez cebra inyectado con CRISPR F0 para ediciones de la línea germinal utilizando técnicas estándar de PCR, digestión de restricción y electroforesis en gel.

Detección de espermatozoides para el aislamiento rápido de ediciones de la línea germinal en el pez cebra

Los errores meióticos en las sinapsis y la recombinación son comunes en los ovocitos de mamíferos. El análisis riguroso de las proteínas involucradas en estos procesos es esencial para comprender cómo y por qué la ovogénesis a menudo sale mal. Las técnicas aquí presentadas permiten un seguimiento exhaustivo de la recombinación y las sinapsis para evaluar la calidad de los ovocitos en ratones.

Preparación de distribuciones de cromosomas meióticos de ovocitos de ratón para la evaluación de la sinapsis y la recombinación

Aprenda a preparar propagaciones de cromosomas meióticos a partir de espermatocitos de Danio rerio. Este protocolo de extensión nuclear permite visualizar la arquitectura cromosómica durante la profase I mediante microscopía de súper resolución con menos residuos.

Preparación de las propagaciones del cromosoma meiótico a partir de espermacitos de peces cebra

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