Name: Análisis de alto rendimiento de los impactos de gotas líquidas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Aprende a analizar impactos de gotas líquidas en superficies sólidas mediante cámara de alta velocidad y MATLAB. Este protocolo optimiza la adquisición de datos y mejora la comprensión de la dinámica de fluidos.

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Este trabajo fue apoyado por el Fondo Marsden, administrado por la Royal Society of New Zealand.

1. Configuración de la cámara de alta velocidad
<ol><li>Establezca el campo de visión fijo (FOV) para la cámara y calcule el factor de conversión de píxel a mm.<ol>
<li>Coloque un marcador de alineación (por ejemplo, un marcador de longitud lateral de 4 mm con el código de análisis de imagen proporcionado) en la posición central de la etapa de muestra para que esté frente a la cámara. Ajuste el aumento de la cámara para que el marcador cuadrado se ajuste al FOV. Asegúrese de que el marcador está enfocado y capture una imagen. NOTA: El código de análisis de imágenes requiere que una gota con imágenes cubra más del 1% del FOV total, de lo contrario se clasifica como ruido. Del mismo modo, la gota no debe ocupar más del 40% del FOV, de lo contrario se identifica como un evento de procesamiento de imágenes fallido.</li>
		<li>Bloquee el aumento de la lente y asegúrese de que esto permanece inalterado durante un lote de experimentos.</li>
		<li>Cargue la interfaz gráfica de usuario (GUI) para el software de análisis de impacto de gotas haciendo clic en el icono dentro de MATLAB.</li>
		<li>Ejecute el código de análisis de imagen. En la GUI, haga clic en el botón calibrar cámara y seleccione la imagen obtenida en el paso 1.1.1. Introduzca el tamaño del cuadrado de calibración en mm y haga clic en Aceptar.</li>
		<li>Mueva el rectángulo que se muestra en la pantalla hasta que el cuadrado de calibración sea el único objeto dentro de él. Haga clic en Aceptar y el software calculará automáticamente el factor de conversión. Si la calibración automática falla, siga la guía de software para realizar la calibración manual.</li>
	</ol></li>
	<li>Alinee el sistema experimental.<ol><li>Preparar el líquido que se utiliza para la dispensación de gotas individuales.<ol>
<li>Coloque el soporte de la aguja alrededor del nivel de los ojos del usuario para facilitar la carga.</li>
			<li>Purgue manualmente el tubo para eliminar cualquier líquido empujando el aire a través de una jeringa. Asegúrese de que el tubo no esté retorcido y de que la aguja esté segura y limpia. Fije la aguja y el tubo para que la aguja sea vertical. NOTA: Si es necesario, limpie la aguja de acero con etanol en un baño ultrasónico.</li>
			<li>Llene la jeringa con el líquido que se está investigando (por ejemplo, agua) y adjúntela a la bomba de jeringa controlada por ordenador. Purgue la aguja con la bomba de jeringa (haga clic y mantenga pulsado el botón de dispensación) hasta que no haya burbujas en el líquido.</li>
			<li>Ajuste la bomba de la jeringa de modo que dispensará el volumen necesario para la liberación de una gota individual. NOTA: Para los resultados representativos, el diámetro medio de las gotas fue de 2,6 mm utilizando una tasa de dosificación de 0,5 ml/min y un volumen dispensado de 11 ml. La velocidad de bombeo debe ser lo suficientemente lenta para que las gotas se formen y liberen bajo gravedad, y esto se puede ajustar a través de la prueba y el error. El volumen de la gota se puede aproximar como14 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/60778/60778equ01.jpg"> donde D es el diámetro de la aguja,LG es la tensión de la superficie de gas líquido, y es la densidad de fluido.</li>
		</ol></li>
		<li>Alinee la muestra (por ejemplo, polidimetilsiloxano plano [PDMS]) colocándola debajo de la aguja y dispensando una sola gota con la bomba de la jeringa. Compruebe que el gota aterriza y se extiende en el área de la muestra que es de interés, y si no altera la posición de la muestra según sea necesario. NOTA: Si la alineación de las gotas está resultando difícil, compruebe que la aguja esté montada correctamente en el soporte de la aguja verticalmente y no esté doblada. La muestra ahora está alineada con respecto a los ejes X e Y y no se debe mover durante los experimentos.</li>
		<li>Alinee y enfoque la cámara.<ol>
<li>Dispensar una sola gota en la muestra. Ajuste la posición vertical (Z) del soporte de la muestra hasta que la superficie esté nivelada con el centro del FOV de la cámara.</li>
			<li>Ajuste la posición horizontal (X) de la cámara para que la gota de la muestra esté alineada en el centro del FOV. Ajuste las posiciones vertical (Z) y horizontal (X) del LED para que coincidan con la posición de la cámara, de modo que el centro de la luz aparezca en el centro del FOV. Ajuste la distancia (Y) de la cámara desde la gota para que la gota entre en foco. NOTA: El sistema ahora está alineado y calibrado. Si el posicionamiento de todos los equipos no cambia, el protocolo se puede pausar y reiniciar sin realinear. La alineación de la muestra en la dirección vertical (Z) debe repetirse para muestras de espesor variable.</li>
		</ol></li>
		<li>Establezca las condiciones de grabación de la cámara.<ol>
<li>Establezca la velocidad de fotogramas de la cámara en un valor óptimo para el objeto que se está grabando. NOTA: La velocidad de fotogramas óptima de la cámara (fps) se puede predecir utilizando31 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/60778/60778equ02.jpg"> donde N es la frecuencia de muestreo (número de imágenes capturadas como el objeto cubre la escala de longitud, normalmente 10), V es la velocidad de la gota, y j es la escala de longitud de imagen (por ejemplo, el FOV).</li>
			<li>Establezca el tiempo de exposición de la cámara en un valor lo más pequeño posible mientras conserva suficiente iluminación. En esta etapa, ajuste la apertura de la lente al ajuste más pequeño disponible mientras conserva suficiente iluminación. NOTA: Una estimación del tiempo mínimo de exposición (te) es dada por31 <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/60778/60778equ03.jpg"> donde k es la escala de longitud (por ejemplo, el tamaño de un píxel), PMAG es el aumento principal y V es la velocidad de la gota.</li>
			<li>Ajuste el gatillo de la cámara. Utilice un disparador de modo final para que la cámara almacena en búfer la grabación y, a continuación, se detenga en el desencadenador (por ejemplo, un clic del ratón del usuario). NOTA: Se puede utilizar un sistema de disparo automático para automatizar este proceso.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. Realización de experimentos
<ol><li>Prepare el sistema de archivos del equipo para un lote de experimentos.<ol>
<li>Cree una carpeta para almacenar películas para el lote actual de experimentos. Establezca esta carpeta como la ubicación de guardado para el software de la cámara siguiendo la guía del fabricante de la cámara. Asegúrese de que el formato de archivo para las imágenes capturadas es .tif.</li>
		<li>Haga clic en el botón Establecer ruta en la GUI de análisis de imágenes y elija la misma carpeta que en el paso 2.1.1, que indica al software que supervise esta carpeta en busca de nuevos vídeos.</li>
		<li>Cree la estructura de carpetas para un lote de experimentos.<ol>
<li>Haga clic en el botón Crear carpetas en la GUI de análisis de imágenes e introduzca cuatro valores como se le solicite: 1) la altura mínima de liberación de gotas, 2) la altura máxima de liberación, 3) el paso de altura entre cada experimento y 4) el número de experimentos repetidos en cada altura. NOTA: La velocidad del impacto se puede aproximar como V á (2gh)1/2, donde g es la aceleración debido a la gravedad y h es la altura de liberación de caída.</li>
			<li>Haga clic en Aceptar para ejecutar el script Crear carpetas. NOTA: Ahora se ha creado un rango de carpetas en el directorio de este experimento. Estas carpetas se denominan "height_xx" donde xx es el alto de la liberación de gotas. En cada una de estas carpetas, las carpetas vacías están listas para almacenar datos para cada experimento de repetición. Repita la sección 2.1 para cada nueva superficie o fluido que se va a estudiar.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare la superficie según sea necesario para el experimento. Para el impacto en una superficie seca y sólida, limpie la superficie con un protocolo estándar adecuado y déjela completamente seca.</li>
	<li>Registre un evento de impacto de gotas.<ol>
<li>Coloque la muestra en la etapa de la muestra. Si es necesario, gire la superficie para alinearla con la cámara. Mueva la aguja a la altura de liberación de gotas deseada.</li>
		<li>Asegúrese de que la vista de la cámara no esté obstruida y, a continuación, capture y guarde una imagen (que se utilizará más adelante durante el procesamiento de imágenes) utilizando el software de la cámara. Comience la grabación de vídeo para que la cámara esté grabando y almacenando en búfer (es decir, llenando la memoria interna de la cámara).</li>
		<li>Dispensar una sola gota en la muestra utilizando la bomba de jeringa (paso 1.2.1.4). Active la grabación para que se detenga una vez que se haya completado el evento de impacto. Retire la superficie del soporte de la muestra y séquela, según corresponda.</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare el archivo de vídeo para su posterior análisis.<ol>
<li>Recorta el video.<ol>
<li>Usando el software adecuado (por ejemplo, el software de cámara de alta velocidad), escanee a través del video para encontrar el primer fotograma en el que la gota está completamente dentro del FOV. Recorte el inicio del vídeo a este fotograma.</li>
			<li>Avance por el número de fotogramas necesarios para capturar los fenómenos de interés durante el experimento de impacto (por ejemplo, 250 fotogramas suelen ser suficientes para los impactos capturados a 10.000 fps). Recorta el final del vídeo a este fotograma.</li>
			<li>Guarde el vídeo como un archivo .avi, estableciendo la ruta de guardado en la carpeta correspondiente para el lote experimental actual, la altura de lanzamiento y el número de repetición.</li>
		</ol>
</li>
		<li>En la GUI de análisis de imágenes, haga clic en el botón Ordenar archivos. Confirme visualmente que la imagen de fondo tomada en el paso 2.3.2 ahora se muestra en la pantalla. Esto encuentra el archivo .avi guardado más reciente y el archivo .tif y los mueve a la misma carpeta, suponiendo que se tomaron al mismo tiempo.</li>
		<li>Haga clic en el botón Ejecutar seguimiento para iniciar el procesamiento de imágenes. El vídeo se mostrará con el procesamiento de imágenes resultante superpuesto. Compruebe cualitativamente que el procesamiento de imágenes funciona correctamente viendo el vídeo. NOTA: Al finalizar el procesamiento de imágenes, el código de procesamiento de imágenes mostrará una imagen de la gota al máximo pliego. Si no se calibra correctamente la cámara, se puede realizar un procesamiento de imagen incorrecto. Si es necesario, repita la calibración hasta que el procesamiento de la imagen se realice correctamente.</li>
		<li>Repita las secciones 2.3 y 2.4, ajustando la altura de la aguja según sea necesario para llevar a cabo todos los experimentos en este lote. NOTA: Cada carpeta experimental ahora contendrá una serie de archivos .mat. Estos archivos contienen los datos extraídos por el software de procesamiento de imágenes y guardados para análisis futuros, incluyendo el contorno de colocación, área, cuadro delimitador y perímetro para cada fotograma.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Análisis de datos sin procesar
<ol><li>En la GUI de análisis de imágenes, haga clic en el botón Procesar datos para iniciar el cálculo de las variables principales a partir de los datos procesados sin procesar. Si se ejecuta después de la sesión experimental, se pedirá al usuario que seleccione la carpeta que contiene el lote de experimentos que se van a procesar.</li>
	<li>Introduzca los cuatro valores que se le indiquen: 1) velocidad de fotogramas de grabación (fps), 2) densidad de fluido (kg/m3), 3) tensión de superficie fluida (N/m) y 4) viscosidad del fluido (Pas). NOTA: El software tiene una velocidad de fotogramas predeterminada de 9.300 fps y las propiedades fluidas del agua en condiciones ambientales. Los valores introducidos se utilizan para calcular los números de Weber y Reynolds.</li>
	<li>Guarde los datos en el archivo videofolders.mat y expórtelos como un archivo .csv. NOTA: El código cargará el archivo prop_data.mat para un solo experimento, calculará la posición del centro de gotas, encontrará el marco de impacto (definido como el último fotograma antes de que el centro de la gota se desacelere) y el fotograma en el que se maximiza el pliego horizontal de la gota. Los datos de salida guardados serán la velocidad de impacto (utilizando un ajuste polinómico de1a orden a la posición vertical del centro de gotas en función del tiempo), el diámetro equivalente de la gota (calculado asumiendo la simetría rotacional sobre el eje Z para encontrar el volumen de gotas, luego encontrar el diámetro de una esfera con ese volumen36),el diámetro de gota en el spread máximo y los números de Impacto weber y Reynolds.</li>
</ol>

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<li>Hugli, H., Gonzalez, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drop+volume+measurements+by+vision%5BTitle%5D)+AND+%22Machine+Vision+Applications+in+Industrial+Inspection+VIII%22%5BJournal%5D)">Drop volume measurements by vision.</a> Machine Vision Applications in Industrial Inspection VIII. 3966, 60-67 (2000).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este método depende del control de la posición y alineación de varias partes del sistema. Un requisito mínimo para utilizar este método es la capacidad de alinear la muestra, la cámara y el LED de iluminación. La alineación incorrecta de la fuente de luz con el sensor de la cámara es un problema común. Si la ruta de luz entra en la cámara en un ángulo, se producen artefactos no deseados que dificultan el procesamiento de imágenes. El usuario debe apuntar a lograr una ruta de iluminación horizontal casi perfecta entre el LED y el sensor de la cámara. Los controles de posicionamiento precisos (por ejemplo, etapas de micrómetros) son útiles para este aspecto del método.
La elección de la lente depende del FOV requerido para el experimento. Aunque las lentes de zoom variables comúnmente disponibles permiten que el sistema se adapte sobre la marcha, a menudo sufren de otros problemas. Si utiliza lentes de zoom variables, el usuario debe asegurarse de que la ampliación total no cambie durante un lote de experimentos (una vez calibrado el sistema, sección de protocolo 1). Este problema se puede evitar mediante el uso de lentes de aumento fijas. Con el aumento fijo, la posición del plano focal de cualquier tipo de lente se puede modificar moviendo la cámara en relación con la muestra.
Al alinear el sistema es aconsejable utilizar una muestra en blanco del mismo espesor que las muestras a investigar. Esto evita que las muestras de interés se dañen o se mojen antes de los experimentos. Si el grosor de la muestra cambia durante un lote de experimentos, el sistema debe realinearse en la dirección Z.
Aunque no es necesario, la adición de un sistema de posicionamiento de aguja controlado por ordenador puede aumentar enormemente la velocidad y la resolución del método. Se pueden utilizar sistemas de rielde de motor paso a paso comúnmente disponibles que permiten el posicionamiento de la aguja con precisión de micrómetro. El control digital de la aguja también permite al usuario poner a cero la altura en relación con la superficie con mayor precisión. Este paso adicional garantiza que la configuración experimental se puede restaurar con precisión al inicio de una nueva sesión de laboratorio.
Se recomienda que el usuario aprenda a utilizar el software de control para la cámara de alta velocidad. La mayoría de los sistemas modernos pueden utilizar un disparador de imagen. Este método utiliza la electrónica interna de alta velocidad de la cámara para monitorear un área del FOV en busca de cambios. Si se calibra cuidadosamente, esto se puede utilizar para activar la cámara automáticamente a medida que la gota afecta a la superficie. Este método reduce el tiempo dedicado a encontrar los fotogramas correctos del vídeo para recortar después de grabar un vídeo.
Este método se puede ampliar para utilizar más de una cámara para el análisis de fenómenos dependientes direccionalmente. Si utiliza varias cámaras, se recomienda que el usuario utilice la activación y sincronización de hardware. La mayoría de los sistemas de cámaras de alta velocidad permiten la sincronización de varias cámaras para grabar a la misma velocidad de fotogramas. Usando un disparador de hardware compartido (por ejemplo, pulso de lógica transistor-transistor [TTL]), el usuario puede grabar vistas simultáneas del mismo experimento. Este método podría adaptarse aún más para registrar el mismo evento en dos aumentos variables.
Este protocolo tiene como objetivo permitir la recopilación y el procesamiento rápidos de datos de vídeo de alta velocidad para gotas que afectan a superficies. Como se ha demostrado, es versátil en una amplia gama de condiciones de impacto. Con alteraciones relativamente menores en el código de análisis, podría ampliarse para proporcionar más datos (por ejemplo, perfiles de dependencia del tiempo y salpicaduras) o para estudiar diferentes geometrías de impacto. Otras mejoras podrían implicar el recorte automático de videos para incluir los fotogramas clave de interés. Este paso, junto con la automatización de la altura de la aguja, permitiría que los videos por lotes se recopilen de una manera totalmente automática, solo requiriendo que el usuario cambie la muestra entre impactos.

Los impactos de caída de líquido en superficies son de gran interés tanto para la comprensión de los fenómenos fundamentales1 como para los procesos industriales2. Los impactos de caída según se han estudiado durante más de 100 años3,pero aún no se han investigado completamente muchos aspectos. La fotografía de alta velocidad se utiliza casi universalmente para estudios de impactos de caída4 porque proporciona datos ricos y accesibles que permiten realizar mediciones analíticas con una buena resolución de tiempo. Los resultados de un impacto de caída en una superficie sólida5,6,7 van desde la simple deposición hasta salpicaduras8. Los impactos en superficies superhidrofóbicas se estudian a menudo ya que pueden generar resultados particularmente interesantes, incluyendo el rebote de caída9,10,11,12. El protocolo descrito aquí fue desarrollado para estudiar los impactos de las gotas de agua en las superficies de polímeros con patrones de microescala, y en particular la influencia del patrón en los resultados de impacto de caída13,14.
El resultado de un experimento de impacto de caída puede verse afectado por una amplia gama de variables posibles. El tamaño y la velocidad de la gota pueden variar, junto con las propiedades del fluido, como la densidad, la tensión superficial y la viscosidad. La gota puede ser newtoniana15 o no newtoniana16. Se ha estudiado una gran variedad desuperficies de impacto, incluyendo líquido7,17,sólido18,y elástico19 superficies. Varias configuraciones experimentales posibles fueron descritas previamente por Rein et al.17. La gota puede tomar diferentes formas. Puede oscilar, girar o impactar en un ángulo con respecto a la superficie. La textura de la superficie y factores ambientales como la temperatura pueden variar. Todos estos parámetros hacen que el campo de impactos de gotas sea extremadamente amplio.
Debido a esta amplia gama de variables, los estudios de fenómenos dinámicos de humectación líquida a menudo se limitan a centrarse en temas relativamente específicos o estrechos. Muchas de estas investigaciones utilizan un número moderado de experimentos (por ejemplo, 50-200 puntos de datos) obtenidos de vídeos de alta velocidad procesados manualmente10,20,21,22. La amplitud de estos estudios está limitada por la cantidad de datos que puede obtener el investigador en un período de tiempo razonable. El procesamiento manual de vídeos requiere que el usuario realice tareas repetitivas, como medir el diámetro de las gotas impactantes, a menudo logradas con el uso de software de análisis de imágenes (Fiji23 y Tracker24 son opciones populares). La medida más utilizada para caracterizar los impactos de caída es el diámetro de una caída de esparcimiento25,26,27,28.
Debido a las mejoras en el procesamiento de imágenes, los métodos automáticos asistidos por ordenador están empezando a mejorar la eficiencia de la recopilación de datos. Por ejemplo, ahora están disponibles algoritmos de análisis de imágenes para la medición automática del ángulo de contacto29 y la tensión superficial mediante el método de caída colgante30. Se pueden obtener mejoras de eficiencia mucho mayores para la fotografía de alta velocidad de impactos de caídas, que produce películas que consisten en muchas imágenes individuales para el análisis, y de hecho algunos estudios recientes han comenzado a utilizar el análisis automatizado15,18, aunque el flujo de trabajo experimental no ha cambiado claramente. Otras mejoras en el diseño experimental para experimentos de impacto de caída han surgido de los avances en fuentes de luz LED disponibles comercialmente, que se pueden combinar con cámaras de alta velocidad a través de la técnica de sombras31,32,33,34.
En este artículo se describe un método estandarizado para la captura y el análisis de películas de impacto de caída. El objetivo principal es permitir una recopilación eficiente de grandes conjuntos de datos, que deberían ser generalmente útiles para la amplia variedad de estudios de impacto de caída descritos anteriormente. Con este método, se puede obtener el contorno digitalizado y resuelto en el tiempo de una caída que afecta para 100 experimentos al día. El análisis calcula automáticamente los parámetros de impacto de gotas (tamaño, velocidad, números de Weber y Reynolds) y el diámetro de dispersión máximo. El protocolo es directamente aplicable para cualquier parámetro básico de gotas (incluyendo líquido, tamaño y velocidad de impacto), material de sustrato o condiciones ambientales. Los estudios que escanean una amplia gama de parámetros experimentales se pueden llevar a cabo en un período de tiempo relativamente corto. El método también fomenta estudios de alta resolución, cubriendo una pequeña gama de variables, con múltiples experimentos repetidos.
Las ventajas de este método las proporciona el experimento estandarizado y una estructura de datos y un flujo de trabajo claros. La configuración experimental produce imágenes con propiedades coherentes (espaciales y de contraste) que se pueden pasar a un código de análisis de imágenes personalizado (incluido como un archivo de codificación suplementario que se ejecuta en MATLAB) para el procesamiento rápido de vídeos grabados inmediatamente después del experimento. La integración del procesamiento y la adquisición de datos es una razón principal para mejorar la velocidad general de la recopilación de datos. Después de una sesión de adquisición de datos, cada vídeo se ha procesado y todos los datos sin procesar relevantes se almacenan para su posterior análisis sin necesidad de volver a procesar el vídeo. Además, el usuario puede inspeccionar visualmente la calidad de cada experimento inmediatamente después de que se lleva a cabo y repetir el experimento si es necesario. Un paso de calibración inicial garantiza que la configuración experimental se pueda reproducir entre diferentes sesiones de laboratorio con buena precisión.
Se supone que para implementar este método el usuario tiene acceso a una cámara de alta velocidad dispuesta para que visualique la superficie desde un punto de vista horizontal (de lado). En la Figura 1se muestra una representación esquemática de esta disposición, incluida la definición de ejes cartesianos. El sistema debe tener la capacidad de posicionar con precisión la cámara y la muestra en tres dimensiones (X, Y y Z). Se implementa un método de sombreado para iluminar la gota y se coloca a lo largo de la trayectoria óptica de la cámara. El sistema debe utilizar un sistema de iluminación LED de corriente directa (DC) de alta calidad (incluyendo una lente de condensador de colisión) que se puede mover en direcciones X y Z para alinear la trayectoria óptica con la cámara. También se supone que el usuario tiene acceso a una bomba de jeringa que puede programar para producir gotas individuales de volumen deseado cuando se conecta a una aguja en particular35. La gota cae bajo gravedad de modo que su velocidad de impacto es controlada por la posición de la aguja por encima de la superficie. Aunque esta configuración es bastante genérica, la Tabla de Materiales enumera equipos específicos utilizados para obtener los resultados representativos, y observa algunas restricciones potenciales impuestas por la elección del equipo.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60778/60778fig1a.jpg"> Figura 1: Representación esquemática de la configuración experimental mínima. Una cámara de alta velocidad se coloca en las gotas de imagen que impactan verticalmente en una muestra de lado a lado. Una fuente de luz LED está alineada con la línea de visión de la cámara para la sombra. Se utiliza una aguja para la producción individual de gotas y se definen ejes cartesianos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60778/60778fig1alarge.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
La descripción del método se centra en la medición de los bordes de las gotas líquidas a medida que caen e impactan. Las imágenes se obtienen desde el punto de vista lateral comúnmente utilizado. Es posible investigar la propagación de gotas desde vistas laterales y de abajo hacia arriba utilizando dos cámaras de alta velocidad13,14, pero la vista de abajo hacia arriba no es posible para materiales opacos, y una vista de arriba hacia abajo produce complicaciones de alineación. El flujo de trabajo básico podría utilizarse para mejorar la investigación de cualquier objeto pequeño (de 2 a 3 mm de diámetro) que afecte a las superficies, y podría utilizarse para objetos más grandes o más pequeños con cambios menores adicionales. Las mejoras y alternativas a la configuración experimental y al método se consideran más adelante en la sección de discusión.

<table><tbody><tr><td>Aguja de punta roma calibre 24</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CAD7930</td><td></td></tr><tr><td>escuadra de alineación de 4 x 4 mm (cromado sobre vidrio)</td><td></td><td></td><td>Realizada internamente mediante litografía.</td></tr><tr><td>Jeringa de 5 ml</td> <td>~</td><td>~</td> <td>Debe ser compatible con la bomba de jeringa. Los conectores de bloqueo Leur unen la jeringa a la aguja.</td></tr><tr><td>Lente de condensador asférico</td><td>Thor Labs ACL5040U</td><td></td><td>Determina el ancho del haz, que debe cubrir el campo de visión.</td></tr><tr><td>Cable ethernet Cat 5e</td> <td>~</td><td>~</td> <td>Una conexión de datos rápida entre la cámara de alta velocidad y la PC, adecuada para cámaras Photron.</td></tr><tr><td>Software de análisis de impacto de gotas</td> <td>~~</td><td></td> <td>Proporcionado como archivo de codificación complementario. Los datos de esquema se almacenan en archivos .mat. Los cálculos se generan como archivos .csv.</td></tr><tr><td>LED de alta potencia de la superficie frontal</td><td>Luminus</td><td>CBT-40-G-C21-JE201 LED</td><td>La fuente de alimentación separada debe ser de CC para evitar parpadeos.</td></tr><tr><td>Cámara de alta velocidad</td><td>Photron</td><td>Photron SA5</td><td>Por lo general, funciona a ~ 10,000 fps para impactos de caída.</td></tr><tr><td>El protocolo</td><td>Photron</td><td>Fastcam Viewer</td><td>asume que la cámara tiene un disparador final; que los archivos de película se pueden guardar en formato .avi y las capturas de pantalla en formato .tif, en una carpeta designada; y que las películas se pueden recortar.</td></tr><tr><td>Etapas de traslación lineal</td><td>Thor Labs</td><td>DTS25/M</td><td>Se utiliza para posicionar el LED, la muestra y la cámara.</td></tr><tr><td>Lente de cámara con montura F macro</td><td>Nikon</td><td>Nikkor 105mm f/2.8 Lente</td><td>La elección de la lente determina el campo de visión.</td></tr><tr><td>PC que ejecuta Matlab 2018b,</td><td>Matlab</td><td>~</td><td>PC, la potencia de procesamiento y la RAM pueden afectar la velocidad del protocolo y, por lo tanto, la eficiencia.</td></tr><tr><td>Polidimetilsiloxano (PDMS)</td><td>Dow</td><td>SYLGARD&trade; 184 sustratos de elastómero de silicona</td><td>fabricados con una proporción de 10:1 (monómero:reticulante).</td></tr><tr><td>Tubo de PTFE</td> <td>~</td><td>~</td><td></td></tr> <tr><td>Bomba de jeringa</td><td>Pump Systems Inc</td><td>NE-1000</td><td>El protocolo asume que esto se puede configurar para dispensar un volumen específico.</td></tr></tbody></table>

análisis de alto rendimiento de los impactos de gotas líquidas

High Throughput Analysis of Liquid Droplet Impacts

Los estudios experimentales de impactos de gotas líquidas en superficies a menudo están restringidos en su alcance debido a la amplia gama de posibles parámetros experimentales como las propiedades de los materiales, las condiciones de impacto y las configuraciones experimentales. En forma de esto, los impactos de caída según la información a menudo se estudian utilizando fotografías de alta velocidad ricas en datos, por lo que es difícil analizar muchos experimentos de manera detallada y oportuna. El propósito de este método es permitir el estudio eficiente de los impactos de gotas con fotografía de alta velocidad mediante el uso de un enfoque sistemático. El equipo está alineado y calibrado para producir videos que pueden ser procesados con precisión por un código de procesamiento de imágenes personalizado. Además, la configuración de la estructura de archivos y el flujo de trabajo descritos aquí garantizan la eficiencia y la organización clara del procesamiento de datos, que se lleva a cabo mientras el investigador todavía está en el laboratorio. El método de procesamiento de imágenes extrae el contorno digitalizado de la gota que afecta en cada fotograma del vídeo, y los datos procesados se almacenan para su posterior análisis según sea necesario. El protocolo asume que una gota se libera verticalmente bajo gravedad, y el impacto es grabado por una cámara que se ve de lado a lado con la gota iluminada usando la sombra. Muchos experimentos similares que implican el análisis de imágenes de eventos de alta velocidad podrían abordarse con un ajuste menor al protocolo y al equipo utilizado.

La conversión de distancias medidas de imágenes en píxeles a milímetros se logra con el uso de un cuadrado de referencia conocido. Este cuadrado debe estar despejado en el FOV de la cámara y en el foco(Figura 2A). El enfoque incorrecto del cuadrado de referencia(Figura 2B) producirá un error sistemático en las variables calculadas, por ejemplo, la velocidad. Para reducir el error al calcular el factor de conversión, el cuadrado de referencia debe cubrir la mayor cantidad posible del FOV. La longitud lateral del cuadrado debe ser conocida por una precisión tan alta como sea posible, dado el límite de resolución de la cámara.
El software de identificación de gotas se basa en la superficie de la muestra que se presenta horizontalmente a la cámara, como se muestra en la Figura 2C. Las superficies dobladas o mal resueltas(Figura 2D) producirán errores de procesamiento de imágenes. El software se puede utilizar para analizar gotas que afectan a superficies planas que no son horizontales, siempre y cuando el borde de la superficie produzca un contraste agudo contra el fondo.
Para asegurarse de que el software rastrea todo el pliego de gotas, la gota debe aterrizar en el centro de la muestra(Figura 2E). Si el sistema está alineado incorrectamente, la gota puede desviarse de la posición central y estará desenfocada(Figura 2F). Si la gota está desenfocada, el tamaño calculado será incorrecto. Este efecto es a menudo causado por una mala alineación del sistema utilizado para mover la aguja verticalmente lejos de la superficie, lo que producirá una deriva en la ubicación del impacto en función de la altura. Se sugiere que el usuario implemente un sistema de placa de pan óptico (o similar) para garantizar la alineación paralela y perpendicular.
Para garantizar que los bordes de imagen de la gota impactante aparezcan nítidos, se sugiere que se debe utilizar el menor tiempo de exposición posible con la fuente de luz disponible(Figura 2G). La alineación incorrecta de la trayectoria de iluminación en relación con la cámara a menudo conduce a un ajuste de otros ajustes, como la apertura de la cámara y el tiempo de exposición. Esto produce un borde difuso a la gota viajeana (Figura 2H)
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60778/60778fig02.jpg"> Figura 2: Problemas comunes con la calibración incorrecta del sistema. (A) Cuadrado de calibración correctamente alineado y enfocado. (B) Cuadrado de calibración fuera de foco, produciendo un factor de calibración incorrecto. (C) La superficie de la muestra es horizontal y proporciona un alto contraste entre la superficie de la muestra y el fondo. (D) La muestra está en un ángulo con respecto a la cámara, produciendo una superficie reflectante. (E) Gota aterriza en el centro de la muestra en el plano de enfoque. (F) Gota aterriza fuera del centro y no está en foco debido a la amplia apertura utilizada. (G) Se realiza una imagen con bordes afilados debido a un corto tiempo de exposición (10 s). (H) La iluminación subóptima y un tiempo de exposición más largo (99 s) producen desenfoque de movimiento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60778/60778fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
La iluminación y alineación incorrectas de la muestra pueden producir deslumbramiento y sombras en las imágenes grabadas. A menudo producen artefactos en las etapas de procesamiento de imágenes, lo que puede reducir el número de puntos de datos de buena calidad recopilados. El deslumbramiento es común para fluidos transparentes si la trayectoria de iluminación no está alineada horizontalmente. El software debe ser capaz de rastrear todo el contorno de la gota en las imágenes de vídeo(Figura 3A). Si no se completa el seguimiento, los valores medidos, como la longitud de la gota de propagación, serán incorrectos(Figura 3B).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60778/60778fig3a.jpg"> Figura 3: Longitud de una gota que afecta en función del número de fotograma de vídeo (fotograma de impacto 0). Cada punto de datos azul corresponde a las imágenes de inserción. (A) La iluminación correcta permite que el software trace todo el contorno de la gota (línea amarilla). Los puntos de contacto (cruces verdes) se identifican correctamente, y la longitud registrada de la gota de dispersión es una función suave del número de fotograma. (B) La iluminación deficiente produce deslumbramiento en el líquido y el borde izquierdo de la gota no se traza correctamente. La longitud registrada de la gota de propagación demuestra imprecisiones en los datos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60778/60778fig3alarge.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Archivo de codificación suplementario. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60778/Supplementary_Coding_File.zip" target="_blank">Haga clic aquí para descargar este archivo.</a>

Este protocolo permite la recopilación eficiente de imágenes experimentales de alta velocidad de impactos de caída de líquido, y un análisis rápido de esos datos en lotes. Para simplificar estos procesos, el método describe cómo calibrar y configurar el aparato, generar una estructura de datos adecuada e implementar un script de análisis de imágenes.

Análisis de alto rendimiento de los impactos de gotas líquidas

Experimental studies of liquid drop impacts on surfaces are often restricted in their scope due to the large range of possible experimental parameters ...

Este protocolo permite el estudio eficiente de los impactos de caída de líquidos en superficies sólidas, un fenómeno cotidiano que es realmente importante en la industria. Los resultados pueden ser muy complejos y depender de muchos parámetros experimentales diferentes. A medida que se coordinan la adquisición y el análisis de datos, muchos experimentos se pueden llevar a cabo en un corto período de tiempo, y la calidad de los datos se puede evaluar con prontitud.Este método es útil para estudiar cualquier parámetro básico de impacto de caída. Cualquier líquido, tamaño de caída, velocidad de impacto de caída, cualquier material de sustrato y bajo cualquier condición ambiental. Este método es realmente eficiente, pero hay una serie de pasos importantes necesarios para configurarlo correctamente.Después de una demostración es la mejor manera de evitar errores. Para configurar la cámara de alta velocidad, coloque un marcador de alineación en la posición central del escenario de muestra, frente a la cámara, y ajuste la ampliación de la cámara para que el marcador cuadrado se ajuste al campo de visión. Cuando el marcador esté enfocado, capture una imagen.Cargue la interfaz gráfica de usuario para el software de análisis de impacto de gotas en MATLAB, haga clic en Calibrar cámara y seleccione la imagen capturada para ejecutar el código de análisis de imagen. Introduzca el tamaño del cuadrado de calibración en milímetros y haga clic en Aceptar. Mueva el rectángulo hasta que el cuadrado de calibración sea el único objeto dentro del rectángulo y haga clic en Aceptar. El software calculará automáticamente el factor de conversión.Para alinear el sistema experimental, coloque el soporte de la aguja a nivel de los ojos para facilitar la carga y compruebe que el tubo no esté torcido. Con una jeringa con una aguja limpia y segura, purgue manualmente el tubo de cualquier fluido residual, mientras mantiene el tubo y la aguja en posición vertical. Y llene la jeringa con el líquido de interés.Coloque la jeringa en la bomba de jeringa controlada por ordenador y mantenga pulsado el botón de dispensación de la bomba de la jeringa para purgar la aguja hasta que no haya burbujas dentro del fluido. Ajuste la bomba para dispensar el volumen adecuado para la liberación de gotas de fluido individuales y alinee la muestra debajo de la aguja. A continuación, utilice la bomba para dispensar una sola gota en la muestra, y confirme que la gota aterriza y se extiende por el área de interés en la muestra.Cuando se hayan confirmado los ajustes de gota, ajuste la posición vertical del portógrafo hasta que la superficie esté nivelada con el centro del campo de visión de la cámara y ajuste la posición horizontal de la cámara para que la gota de la muestra esté alineada en el centro del campo de visión. A continuación, ajuste las posiciones verticales y horizontales del LED para que coincidan con la posición de la cámara de modo que el centro de la luz aparezca en el centro del campo de visión. Y ajuste la distancia de la cámara desde la gota para que la gota entre en foco.Una vez que el sistema se haya alineado y calibrado, establezca la velocidad de fotogramas de la cámara en un valor óptimo para el objeto que se está grabando. Ajuste el tiempo de exposición de la cámara a un valor lo más pequeño posible mientras conserva una iluminación suficiente. Y ajuste la apertura de la lente al ajuste más pequeño disponible mientras conserva suficiente iluminación.A continuación, ajuste el gatillo de la cámara mediante un disparador de modo final, de modo que la cámara establezca la grabación antes de detenerse en el gatillo. Para llevar a cabo un experimento, cree una carpeta para almacenar las películas para el lote actual de experimentos y establezca esta carpeta como la ubicación de guardado para el software de la cámara de acuerdo con la guía del fabricante para la cámara. Asegúrese de que el formato de archivo de las imágenes capturadas esté establecido en TIFF.Haga clic en Establecer ruta en la interfaz de usuario gráfica de análisis de imágenes y seleccione la carpeta guardar ubicación para que el software supervise esta carpeta en busca de nuevos vídeos. Para crear la estructura de carpetas para experimentos por lotes, haga clic en Crear carpetas e introduzca la altura mínima de liberación de gotas, la altura máxima de liberación, el paso de altura entre cada experimento y el número de experimentos de repetición a cada altura. Y haga clic en Aceptar para ejecutar el script de crear carpetas.Para el impacto en una superficie seca y sólida, limpie la superficie de acuerdo con un protocolo estándar adecuado y deje que la superficie se seque por completo. Para grabar un evento de impacto de gota, coloque la muestra en la etapa de muestra de modo que esté alineada con la cámara y mueva la aguja a la altura de liberación de gotas deseada. Confirme que la vista de la cámara no está obstruida antes de capturar y guardar una imagen en el software de la cámara.Comience la grabación de vídeo para que la cámara esté grabando y almacenando en búfer, y utilice la bomba de jeringa para dispensar una sola gota en la muestra. A continuación, active la grabación para que se detenga una vez que se haya completado el evento de impacto. Retire la superficie del soporte de la muestra y seque la superficie según corresponda.Para preparar el archivo de vídeo capturado para su análisis, en el software de cámara de alta velocidad, escanee el vídeo para encontrar el primer fotograma en el que la gota está completamente dentro del campo de visión, y recorte el inicio del vídeo a este fotograma. Avance por el número de fotogramas necesarios para capturar los fenómenos de interés durante el experimento de impacto y recorte el final del vídeo a este fotograma. A continuación, guarde el vídeo como un archivo AVI y la ruta de guardado en la carpeta correspondiente para el lote experimental actual, la altura de liberación y el número de repetición.En la interfaz de análisis de imágenes, haga clic en Ordenar archivos y confirme visualmente que la imagen de fondo obtenida se muestra ahora en pantalla. A continuación, haga clic en Ejecutar seguimiento para iniciar el procesamiento de imágenes. El vídeo se mostrará con el procesamiento de imágenes resultante superpuestado.Compruebe cualitativamente que el procesamiento de imágenes funciona correctamente viendo el vídeo. Para el análisis de datos sin procesar, en la interfaz de usuario gráfica de análisis de imágenes, haga clic en Procesar datos para comenzar el cálculo de las variables principales a partir de los datos de proceso sin procesar. A continuación, introduzca la velocidad de fotogramas de la grabación, la densidad del fluido, la tensión de la superficie del fluido y los valores de viscosidad del fluido, y haga clic en Aceptar. Los datos se guardarán en el archivo MAT de la carpeta de vídeo y se exportarán como un archivo CSV.El cuadrado de referencia debe estar sin obstáculos en el campo de visión de la cámara y en el foco. Un enfoque incorrecto del cuadrado de referencia producirá un error sistemático en los valores calculados. El software de identificación de gotas se basa en la superficie de la muestra que se presenta horizontalmente a la cámara, como se observa en esta imagen.Las superficies dobladas o mal resueltas producirán errores de procesamiento de imágenes. Para asegurarse de que el software rastrea todo el spread de gotas, la gota debe aterrizar en el centro de la muestra. Si el sistema está alineado incorrectamente, la gota puede desviarse de la posición central y estará fuera de foco.Para garantizar que los bordes con imagen de la gota impactante aparezcan nítidos, se debe utilizar el menor tiempo de exposición posible con la fuente de luz disponible. La alineación incorrecta de la trayectoria de iluminación en relación con la cámara a menudo afecta a otros ajustes, como la apertura de la cámara y el tiempo de exposición, lo que da como resultado un borde difuso a la gota de desplazamiento. El software debe ser capaz de rastrear todo el contorno de la gota en las imágenes de vídeo.Si el seguimiento no se completa, los valores medidos, como la longitud de la gota de propagación, serán incorrectos. Es esencial que la cámara esté correctamente enfocada y alineada con la muestra, y que el video guardado coincida con la ruta proporcionada en el software. De lo contrario, se producirá un error en el análisis.Hemos sido capaces de explorar variaciones en los resultados de impacto en una gama de parámetros experimentales. Por ejemplo, al determinar la velocidad de cuándo una gota comienza a salpicar.

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Research

Investigación

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Engineering

Ingeniería

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Ensayo de citotoxicidad basado en gotas para evaluar las células T receptoras de antígenos quiméricos a nivel de una sola célula

Este protocolo presenta un flujo de trabajo estándar de cribado de alto rendimiento para microorganismos industriales. Consiste en construir una biblioteca mutante mediante mutagénesis ARTP, realizar cribado positivo de gotas con microfluidica automatizada y, posteriormente, verificar los resultados. La fiabilidad del flujo de trabajo se validó mediante el cribado de cepas de B. coagulans de alto rendimiento.

Cribado de alto rendimiento de mutantes de Bacillus coagulans hiperproductores de ácido L-láctico utilizando una plataforma microfluídica automatizada de gotas

Aprende a analizar impactos de gotas líquidas en superficies sólidas mediante cámara de alta velocidad y MATLAB. Este protocolo optimiza la adquisición de datos y mejora la comprensión de la dinámica de fluidos.

Análisis de alto rendimiento de los impactos de gotas líquidas

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