Name: Producción de plasma autólogo rico en plaquetas para impulsar la expansión in vitro de fibroblastos humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Aprende a producir plasma autólogo rico en plaquetas para expandir fibroblastos humanos in vitro de forma segura y eficiente. Este método estandarizado impulsa terapias celulares autólogas en medicina regenerativa.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Damos las gracias al Sr. Grégory Schneiter por su asistencia técnica con los datos de citometría de flujo; la profesora Muriel Cuendet (Laboratorio de Farmacognosia, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Universidad de Ginebra) por permitir el uso del citómetro de flujo Attune y el microscopio de alto rendimiento Citation 3; Profesora Brigitte Pittet para consejos científicos.

El protocolo del estudio cumplió con la Declaración de Helsinki, y todos los pacientes proporcionaron su consentimiento informado por escrito antes de participar en el estudio. Se obtienen muestras de piel de mujeres sanas sometidas a abdominoplastia en el Departamento de Cirugía Plástica, Reconstructiva y Estética de los Hospitales Universitarios de Ginebra (Ginebra, Suiza). El procedimiento se ajusta a los principios de la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el comité de ética institucional local (protocolo #3126).
1. Preparación del PRP
NOTA: Los tubos CuteCell-PRP (Tabla de materiales) están diseñados para la preparación rápida de PRP a partir de un pequeño volumen de sangre del paciente en un sistema de circuito cerrado.
<ol><li>Recolección de sangre total NOTA: Recolecte sangre autóloga de una vena periférica del brazo utilizando una aguja de mariposa conectada directamente al tubo PRP, de acuerdo con el protocolo de recolección del instituto médico. La sangre se puede extraer directamente a través de la cánula venosa si el paciente está bajo anestesia.<ol><li>Abra el blíster tubular. Realice la punción venosa y llene el número deseado de tubos de PRP con sangre entera. El vacío dentro de los tubos permitirá la recolección automática del volumen necesario de sangre (~ 10 ml).</li>
		<li>Gire cuidadosamente los tubos boca abajo varias veces para mezclar la sangre con anticoagulante.</li>
		<li>Dentro de un gabinete de bioseguridad (clase 2), extraiga 100 μL de sangre total total usando una jeringa de 1 ml para obtener más recuentos de células sanguíneas.</li>
	</ol></li>
	<li>Centrifugación NOTA: Asegúrese de que la centrífuga esté correctamente equilibrada antes de iniciarla.<ol><li>Una vez que la sangre se recoge en los tubos de PRP, si es necesario, prepare un tubo de contrapeso (suministrado por separado) con agua al mismo nivel que la sangre en el tubo de PRP. Coloque los tubos llenos en la centrífuga uno frente al otro, asegurándose de que la máquina esté equilibrada.</li>
		<li>Centrifugar muestras a 1.500 x g durante 5 min. NOTA: Ajuste la velocidad de rpm correspondiente de acuerdo con las instrucciones del fabricante de la centrífuga. Después de la centrifugación, la sangre se fraccionará. Los glóbulos rojos y blancos quedan atrapados debajo del gel, y las plaquetas se depositan en la superficie del gel (Figura 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Invierta suavemente el tubo de PRP 20x para resuspender el depósito de plaquetas en el sobrenadante plasmático. NOTA: Asegúrese de que las plaquetas estén completamente separadas del gel. El plasma debe cambiar de claro y transparente a turbio. Si hay agregados plaquetarios, deben recogerse con el plasma.</li>
	<li>Para recolectar PRP, tome la solución plasmática del tubo usando un dispositivo de transferencia de jeringa conectado a una jeringa de 10 ml. NOTA: Se obtendrán aproximadamente 5 ml de PRP de cada tubo. La solución PRP ahora está lista para mezclar en la preparación final del medio. La solución se puede mantener a temperatura ambiente (RT) debajo del gabinete de seguridad hasta los pasos futuros que involucran el analizador de hematología y el uso.</li>
	<li>Antes de usar el PRP, determine la concentración de plaquetas, el volumen medio de plaquetas y el número de glóbulos rojos y blancos utilizando un analizador hematológico automatizado (Tabla de materiales). Para ello, retire con cuidado 100 μL de la solución y transfiérala a un tubo de 1,5 ml. NOTA: El PRP se utiliza como suplemento de cultivo autólogo a una concentración entre 5-20% v/v. La concentración óptima de PRP debe determinarse para cada línea celular. Para prevenir la formación de coágulos de fibrina, los medios de cultivo finales deben complementarse con 2 U/ml de heparina.</li>
</ol>2. Aislamiento de fibroblastos autólogos y cultivo en medios suplementados con FBS o PRP
<ol><li>Lave las muestras de piel en solución salina tamponada con fosfato (PBS) agitando suavemente en un tubo de polipropileno de 50 ml.</li>
	<li>Si la muestra de piel es relativamente grande (>10 cm 2), coloque la muestra en la tapa de una placa de cultivo de tejido de 150 cm2 (lado epidérmico hacia abajo). Retire el tejido graso subcutáneo con un par de fórceps y tijeras. Para evitar que el tejido se seque, enjuague el tejido cada pocos minutos en PBS. NOTA: Utilice una placa de cultivo de tejidos más pequeña para muestras más pequeñas.</li>
	<li>Cuando se complete el recorte de grasa, corte el tejido en tiras de aproximadamente 0,5 cm x 1,5 cm con un bisturí estéril.</li>
	<li>Agregue 5 ml de mezcla de colagenasa-dispasa (tabla de materiales; 14 unidades de Wünsch/ml) a un tubo estéril de 15 ml.</li>
	<li>Transfiera el tejido cortado al tubo, asegurándose de que las piezas de tejido se sumerjan en la solución. Tapa el tubo de forma segura.</li>
	<li>Colocar los tubos en una incubadora a 37 °C con agitación orbital durante 150 min. Después de la incubación, coloque el tubo que contiene el tejido en el gabinete de bioseguridad.</li>
	<li>Coloque la tapa de una placa de cultivo estéril de 100 mm boca abajo en el gabinete de bioseguridad. Transfiera la solución de tejido digerido al fondo de la placa de cultivo de 100 mm, sin salpicaduras. Si queda algún pedazo de tejido en el tubo, use una pipeta estéril de 1 ml o pinzas estériles para transferir las piezas de tejido al fondo de la placa de cultivo de 100 mm.</li>
	<li>Con la tira de la epidermis hacia arriba, separe la hoja de epidermis intacta de la dermis usando dos pares de fórceps. Sostenga la dermis de la tira de tejido con un par de fórceps y el borde de la epidermis con otro par de fórceps. Separe la dermis y la epidermis en dos piezas, manteniendo las piezas separadas en la misma tapa. Intente realizar este paso rápidamente y repita la manipulación para cada pieza de tejido.</li>
	<li>Transfiera las piezas dérmicas a una nueva placa de cultivo de 100 mm que contenga PBS.</li>
	<li>Usando pinzas de laboratorio, coloque las piezas dérmicas en un tubo de polipropileno de 15 ml con 3 ml de tripsina/PBS al 0,3%. Incubar durante 10-20 min en un baño maría a 37 °C e invertir el tubo varias veces cada 2-3 min.</li>
	<li>Para detener la reacción enzimática, agregue 3-5 ml de medio de crecimiento completo helado (medio Eagle modificado de Dulbecco [DMEM] o RPMI que contiene 10% de FBS). Vortex el tubo vigorosamente varias veces. Filtre la suspensión de fibroblastos a través de una malla de nylon de 85 μm (colocada sobre la parte superior de un tubo de 50 ml) para eliminar los residuos dérmicos.</li>
	<li>Centrifugar durante 10 min a 150 x g, a 4 °C. Aspirar el sobrenadante y resuspender el pellet en 100−1.000 μL de medio de crecimiento completo.</li>
	<li>Usando azul de tripano (factor de dilución de x2) mezclado con la suspensión celular, contar el número de células totales y viables llenando la cámara del hemocitómetro. NOTA: La viabilidad celular depende de las condiciones utilizadas para la digestión enzimática. Para aumentar la recuperación celular y la viabilidad celular, la muestra de piel se puede cortar en trozos más pequeños.</li>
	<li>Placa 3−10 x 104 células en 5 ml de medio de cultivo completo de FBS (DMEM, 10% FBS inactivado térmicamente durante 60 min a 56 °C, solución tampón HEPES 1% 1 M, mezcla de aminoácidos no esenciales 100x 100x, 1% L-glutamina 100x, 1% 100x penicilina/estreptomicina, 1% piruvato sódico 100x) en un matraz de cultivo tisular de 25 cm2 . Incubar a 37 °C. NOTA: Los fibroblastos viables se adherirán al matraz dentro de las 24 h y comenzarán a exhibir la forma del huso en 2-3 días.</li>
	<li>En el día 2, aspirar el medio que contiene células no adherentes y añadir medio fresco. NOTA: Como las células muertas en el medio de cultivo afectan el crecimiento de fibroblastos viables, las células muertas no adherentes deben eliminarse del cultivo.</li>
	<li>Cambiar el medio cada 3−4 días hasta que el cultivo alcance el 70−80% de confluencia.</li>
	<li>Para cosechar fibroblastos, lavar con PBS e incubar con solución de tripsina/EDTA durante 3 min a 37 °C en la incubadora.</li>
	<li>Para detener la reacción, agregue 3-5 ml de medio de crecimiento completo caliente (DMEM o RPMI que contiene 10% de FBS). Tomar una alícuota de la suspensión celular para contar las células con el hemocitómetro. Centrifugar la suspensión durante 5 min a 200 x g y retirar el medio por aspiración.</li>
	<li>Cultivar el fibroblasto en medio PRP (DMEM, 20% PRP, 1% 1 M solución tampón HEPES, 1% 100x mezcla de aminoácidos no esenciales, 1% 100x L-glutamina, 1% 100x penicilina/estreptomicina, 1% 100x piruvato de sodio, 2 U/ml de heparina) en la incubadora a 37 °C. NOTA: La densidad celular mínima recomendada es de 4.000 células viables/cm2.</li>
	<li>Evaluar los efectos del PRP sobre la proliferación de fibroblastos, fibroblastos de semilla (paso 2) en 24 placas de pocillos a una densidad de 8 x 103 células por pocillo en medio de PRP con diferentes concentraciones de PRP (1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% y 50%) y con 2 U/ml de heparina o en condiciones de medio de cultivo clásico (10% FBS). Después de 7 días de cultivo, añadir un colorante vital (proliferación celular violeta) a las células y evaluar la proliferación por citometría de flujo.</li>
	<li>Para estudiar los reordenamientos citoesqueléticos, las células semilla en 96 placas de fondo plano bien negro/claro a una concentración de 1 x 10 5 células/ml en DMEM de crecimiento FBS completo (ver paso 2.14) suplementadas con FBS al0,5 % durante 24 h. Trate las células con 10% de FBS o diferentes concentraciones de PRP (1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% y 50%) durante 7 días.<ol><li>Fijar los fibroblastos con paraformaldehído al 4% durante 10 min y permeabilizar con Triton X-100 al 0,1% durante 5 min en RT. Colorear los fibroblastos con 50 mL de faloidina 5 U/mL, lavar 2x con PBS y marcar con 50 mL de 1 mg/mL 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) durante 5 min. Se utilizó el lector multimodo de imágenes celulares de 3 células de citación (BioTek) para visualizar la tinción de faloidina.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Kumar, S., Mahajan, B. B., Kaur, S., Singh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+therapies+in+dermatology%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+and+Aesthetic+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Autologous therapies in dermatology.</a> The Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology. 7 (12), 38-45 (2014).</li>
<li>Martin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+survey+on+cellular+and+engineered+tissue+therapies+in+Europe+in+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">The survey on cellular and engineered tissue therapies in Europe in 2009.</a> Tissue Engineering. Part A. 17 (17-18), 2221-2230 (2011).</li>
<li>Stunova, A., Vistejnova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dermal+fibroblasts-A+heterogeneous+population+with+regulatory+function+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+%26+Growth+Factor+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dermal fibroblasts-A heterogeneous population with regulatory function in wound healing.</a> Cytokine & Growth Factor Reviews. 39, 137-150 (2018).</li>
<li>Thangapazham, R. L., Darling, T. N., Meyerle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+skin+properties+with+autologous+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Alteration of skin properties with autologous dermal fibroblasts.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (5), 8407-8427 (2014).</li>
<li>Costa-Almeida, R., Soares, R., Granja, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+as+maestros+orchestrating+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts as maestros orchestrating tissue regeneration.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 240-251 (2018).</li>
<li>Weiss, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+cell+therapy%3A+will+it+replace+dermal+fillers%5BTitle%5D)+AND+%22Facial+Plastic+Surgery+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Autologous cell therapy: will it replace dermal fillers.</a> Facial Plastic Surgery Clinics of North America. 21 (2), 299-304 (2013).</li>
<li>Ichim, T. E., O'Heeron, P., Kesari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+as+a+practical+alternative+to+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts as a practical alternative to mesenchymal stem cells.</a> Journal of Translational Medicine. 16 (1), 212(2018).</li>
<li>Gstraunthaler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatives+to+the+use+of+fetal+bovine+serum%3A+serum-free+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Alternatives to the use of fetal bovine serum: serum-free cell culture.</a> ALTEX. 20 (4), 275-281 (2003).</li>
<li>Karnieli, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+consensus+introduction+to+serum+replacements+and+serum-free+media+for+cellular+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">A consensus introduction to serum replacements and serum-free media for cellular therapies.</a> Cytotherapy. 19 (2), 155-169 (2017).</li>
<li>van der Valk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+Bovine+Serum+%28FBS%29%3A+Past+-+Present+-+Future%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Fetal Bovine Serum (FBS): Past - Present - Future.</a> ALTEX. 35 (1), 99-118 (2018).</li>
<li>Cavallo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-Rich+Plasma%3A+The+Choice+of+Activation+Method+Affects+the+Release+of+Bioactive+Molecules%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Platelet-Rich Plasma: The Choice of Activation Method Affects the Release of Bioactive Molecules.</a> BioMed Research International. 2016, 6591717(2016).</li>
<li>Peng, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-Rich+Plasma+for+Skin+Rejuvenation%3A+Facts%2C+Fiction%2C+and+Pearls+for+Practice%5BTitle%5D)+AND+%22Facial+Plastic+Surgery+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Platelet-Rich Plasma for Skin Rejuvenation: Facts, Fiction, and Pearls for Practice.</a> Facial Plastic Surgery Clinics of North America. 27 (3), 405-411 (2019).</li>
<li>Fadadu, P. P., Mazzola, A. J., Hunter, C. W., Davis, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+concentration+yields+in+commercially+available+platelet-rich+plasma+%28PRP%29+systems%3A+a+call+for+PRP+standardization%5BTitle%5D)+AND+%22Regional+Anesthesia+and+Pain+Medicine%22%5BJournal%5D)">Review of concentration yields in commercially available platelet-rich plasma (PRP) systems: a call for PRP standardization.</a> Regional Anesthesia and Pain Medicine. 44, 652-659 (2019).</li>
<li>Berndt, S., Turzi, A., Pittet-Cuenod, B., Modarressi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+Platelet-Rich+Plasma+%28CuteCell+PRP%29+Safely+Boosts+In+Vitro+Human+Fibroblast+Expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Autologous Platelet-Rich Plasma (CuteCell PRP) Safely Boosts In Vitro Human Fibroblast Expansion.</a> Tissue Engineering. Part A. 25 (21-22), 1550-1563 (2019).</li>
<li>Zeng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+safety+studies+on+autologous+cultured+human+skin+fibroblast+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Preclinical safety studies on autologous cultured human skin fibroblast transplantation.</a> Cell Transplantation. 23 (1), 39-49 (2014).</li>
<li>Lee, E. C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Autologous+Cultured+Fibroblast+Cells+as+a+Treatment+for+Patients+with+Facial+Contour+Defects%3A+A+Clinical+Replication+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cosmetics%2C+Dermatological+Sciences+and+Applications%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Autologous Cultured Fibroblast Cells as a Treatment for Patients with Facial Contour Defects: A Clinical Replication Study.</a> Journal of Cosmetics, Dermatological Sciences and Applications. 7, 306-317 (2017).</li>
<li>Eca, L. P., Pinto, D. G., de Pinho, A. M., Mazzetti, M. P., Odo, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+fibroblast+culture+in+the+repair+of+aging+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatologic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Autologous fibroblast culture in the repair of aging skin.</a> Dermatologic Surgery. 38 (2), 180-184 (2012).</li>
<li>Nilforoushzadeh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+fibroblast+suspension+for+the+treatment+of+refractory+diabetic+foot+ulcer%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Dermatology%2C+Venereology+and+Leprology%22%5BJournal%5D)">Autologous fibroblast suspension for the treatment of refractory diabetic foot ulcer.</a> Indian Journal of Dermatology, Venereology and Leprology. 82 (1), 105-106 (2016).</li>
<li>Cowper, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Platelet+Lysate+as+a+Functional+Substitute+for+Fetal+Bovine+Serum+in+the+Culture+of+Human+Adipose+Derived+Stromal%2FStem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Human Platelet Lysate as a Functional Substitute for Fetal Bovine Serum in the Culture of Human Adipose Derived Stromal/Stem Cells.</a> Cells. 8 (7), 724(2019).</li>
<li>Atashi, F., Jaconi, M. E., Pittet-Cuenod, B., Modarressi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+platelet-rich+plasma%3A+a+biological+supplement+to+enhance+adipose-derived+mesenchymal+stem+cell+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Autologous platelet-rich plasma: a biological supplement to enhance adipose-derived mesenchymal stem cell expansion.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 21 (3), 253-262 (2015).</li>
<li>Martinez-Zapata, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+platelet-rich+plasma+for+treating+chronic+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cochrane+Database+of+Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">Autologous platelet-rich plasma for treating chronic wounds.</a> The Cochrane Database of Systematic Reviews. (5), (2016).</li>
<li>Cervelli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+platelet-rich+plasma+and+hyaluronic+acid+in+the+loss+of+substance+with+bone+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Skin+%26+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Use of platelet-rich plasma and hyaluronic acid in the loss of substance with bone exposure.</a> Advances in Skin & Wound Care. 24 (4), 176-181 (2011).</li>
<li>Nicoli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+hidradenitis+suppurativa+treatment+using+platelet-rich+plasma+gel+and+Hyalomatrix%5BTitle%5D)+AND+%22International+Wound+Journal%22%5BJournal%5D)">Severe hidradenitis suppurativa treatment using platelet-rich plasma gel and Hyalomatrix.</a> International Wound Journal. 12 (3), 338-343 (2015).</li>
<li>Gentile, P., Bottini, D. J., Spallone, D., Curcio, B. C., Cervelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+platelet-rich+plasma+in+maxillofacial+surgery%3A+clinical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Craniofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Application of platelet-rich plasma in maxillofacial surgery: clinical evaluation.</a> The Journal of Craniofacial Surgery. 21 (3), 900-904 (2010).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjunctive+Platelet-Rich+Plasma+%28PRP%29+in+Infrabony+Regenerative+Treatment%3A+A+Systematic+Review+and+RCT%27s+Meta-Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Adjunctive Platelet-Rich Plasma (PRP) in Infrabony Regenerative Treatment: A Systematic Review and RCT's Meta-Analysis.</a> Stem Cells International. 2018, 9594235(2018).</li>
<li>Everts, P. A., Pinto, P. C., Girao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+pure+platelet-rich+plasma+injections+for+facial+skin+rejuvenation%3A+Biometric+instrumental+evaluations+and+patient-reported+outcomes+to+support+antiaging+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cosmetic+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Autologous pure platelet-rich plasma injections for facial skin rejuvenation: Biometric instrumental evaluations and patient-reported outcomes to support antiaging effects.</a> Journal of Cosmetic Dermatology. 18 (4), 985-995 (2019).</li>
<li>Fiaschetti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+and+ultrasound+evaluation+after+breast+autologous+fat+grafting+combined+with+platelet-rich+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging and ultrasound evaluation after breast autologous fat grafting combined with platelet-rich plasma.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 498-509 (2013).</li>
<li>Gentile, P., Scioli, M. G., Orlandi, A., Cervelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+Reconstruction+with+Enhanced+Stromal+Vascular+Fraction+Fat+Grafting%3A+What+Is+the+Best+Method%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Breast Reconstruction with Enhanced Stromal Vascular Fraction Fat Grafting: What Is the Best Method.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 3 (6), 406(2015).</li>
<li>Modarressi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platlet+Rich+Plasma+%28PRP%29+Improves+Fat+Grafting+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Platlet Rich Plasma (PRP) Improves Fat Grafting Outcomes.</a> World Journal of Plastic Surgery. 2 (1), 6-13 (2013).</li>
<li>Muraglia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+Medium+Supplements+Derived+from+Human+Platelet+and+Plasma%3A+Cell+Commitment+and+Proliferation+Support%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Culture Medium Supplements Derived from Human Platelet and Plasma: Cell Commitment and Proliferation Support.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 5, 66(2017).</li>
<li>Ferrao, A. V., Mason, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+heparin+on+cell+proliferation+and+type-I+collagen+synthesis+by+adult+human+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">The effect of heparin on cell proliferation and type-I collagen synthesis by adult human dermal fibroblasts.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1180 (3), 225-230 (1993).</li>
<li>Gonzalez-Delgado, P., Fernandez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitivity+reactions+to+heparins%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Hypersensitivity reactions to heparins.</a> Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (4), 315-322 (2016).</li>
<li>Atashi, F. S. B., Nayernia, Z., Pittet-Cuénod, B., Modarressi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+Rich+Plasma+Promotes+Proliferation+of+Adipose+Derived+Mesenchymal+Stem+Cells+via+Activation+of+AKT+and+Smad2+Signaling+Pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Platelet Rich Plasma Promotes Proliferation of Adipose Derived Mesenchymal Stem Cells via Activation of AKT and Smad2 Signaling Pathways.</a> Stem Cell Research & Therapy. 5 (8), (2015).</li>
</ol>

Este proyecto ha sido financiado por Regen Lab SA. Sarah Berndt es la gerente de proyectos de terapia celular para Regen Lab y es empleada de Regen Lab SA. Antoine Turzi es el CEO de RegenLab.

Las ventajas de usar fibroblastos autólogos como una alternativa natural en comparación con otros materiales de relleno en la terapia celular de heridas incluyen una buena biocompatibilidad, efectos secundarios mínimos y facilidad de recolección y uso. Sin embargo, antes de usar estas terapias en un entorno clínico diario, se necesitan estudios preclínicos adecuados para identificar las características de crecimiento y evaluar la función biológica y la seguridad de los fibroblastos aislados tanto antes como después del t...

La medicina regenerativa tiene como objetivo curar o reemplazar tejidos y órganos dañados por la edad, enfermedad o trauma, así como corregir defectos congénitos. En la terapia autóloga, las células o tejidos se extraen de un paciente, se expanden o modifican, y luego se vuelven a introducir al donante. Esta forma de terapéutica tiene un amplio potencial en el campo de la dermatología1. En la terapia con fibroblastos autólogos, los fibroblastos de un paciente se cultivan y se reinyectan para tratar arrugas, arrugas o cicatrices de acné. Como los fibroblastos son las principales células funcionales de la dermis, la inyección de fibroblastos autólogos puede ser más beneficiosa que otras terapias en el rejuvenecimiento facial2.
En la piel, los fibroblastos son responsables de la síntesis y secreción de proteínas extracelulares (es decir, colágeno, elastina, ácido hialurónico y glicosaminoglicanos). También liberan factores de crecimiento que regulan la función celular, la migración y las interacciones célula-matriz / célula-célula en la homeostasis normal de la piel y la cicatrización de heridas3. Los fibroblastos dérmicos ya se han introducido como una terapia celular clínica potencial para la cicatrización de heridas cutáneas4, la regeneración tisular5 o los rellenos dérmicos en procedimientos estéticos y de cirugía plástica6. Algunos estudios incluso sugieren que, en el contexto de la medicina regenerativa, los fibroblastos pueden ser una terapia celular más práctica y efectiva que las células madre mesenquimales7.
Para obtener un número suficiente de fibroblastos para aplicaciones clínicas, la expansión celular suele ser obligatoria. El cultivo celular ex vivo/in vitro requiere un medio basal suplementado con factores de crecimiento, proteínas y enzimas para apoyar la adhesión y proliferación celular. El suero fetal bovino (FBS) es un suplemento común para medios de cultivo celular, porque la sangre fetal 1) es rica en factores de crecimiento en comparación con la sangre adulta y 2) presenta un bajo contenido de anticuerpos8. A medida que avanza la terapia celular, existen preocupaciones sobre la seguridad de las condiciones clásicas de cultivo celular en las que se agrega FBS al medio de cultivo. Además, ahora hay una tendencia a reemplazar FBS con alternativas9. Varios sustitutos de FBS han mostrado resultados prometedores10.
La alternativa de plasma rico en plaquetas (PRP) ha sido seleccionada aquí, y hemos desarrollado un dispositivo médico para producir una preparación estandarizada de PRP, llamado CuteCell-PRP. El uso previsto de este dispositivo es la preparación de PRP autólogo para ser utilizado como un suplemento de medios de cultivo para la expansión in vitro de células autólogas en condiciones GMP.
El PRP se define como una suspensión plaquetaria concentrada en plasma. Debido a que existen numerosos protocolos de preparación, que difieren en 1) la cantidad de sangre necesaria, 2) los tipos de dispositivos utilizados y 3) el protocolo de centrifugación, las concentraciones de plaquetas resultantes varían de ligeramente por encima a más de 10 veces el valor basal de la sangre. Además, las preparaciones de PRP contienen niveles variables de contaminación de glóbulos rojos y blancos. Por lo tanto, la terminología "PRP" se utiliza para describir productos que varían mucho en su composición biológica y posibles efectos terapéuticos.
En la mayoría de los estudios, la sustitución de FBS se logra utilizando diferentes concentraciones de PRP que se activa (por trombina o calcio). Esta activación artificial provoca una liberación inmediata e importante de factores de crecimiento plaquetario desde 15 min hasta 24 h11. Por lo tanto, se cree que la activación plaquetaria es indeseable para aplicaciones en cultivos celulares, en los que se requiere la liberación lenta de factores de crecimiento a partir de la desgranulación plaquetaria gradual.
La terapia PRP implica la preparación de plaquetas autólogas en plasma concentrado12. La concentración óptima de plaquetas no está clara, y hay una amplia gama de dispositivos comerciales disponibles para preparar PRP13. Esta falta de estandarización se debe a la inconsistencia entre los estudios y ha llevado a una caja negra con respecto a la dosis y el momento de la inyección. Este protocolo describe un procedimiento para obtener PRP autólogo utilizando este dispositivo PRP dedicado para expandir fibroblastos de la piel en un modelo de cultivo ex vivo 100% autólogo.

<table><tbody><tr><td>96 pocillos negro claro fondo plano</td><td>BD Falcon</td><td>353219</td><td>32/caja</td></tr><tr><td>Traza celular Tinte violeta</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>C34557</td><td>180 ensayos</td></tr><tr><td>CuteCell PRP</td><td>Regen Lab SA</td><td>CC-PRP-3T</td><td>3 tubos por paquete</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>52400-025</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>10270106</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>de glutamina 200 mM</td><td>Gibco</td><td>25030024</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Contador de Hematología</td><td>Sysmex</td><td>KK-21N</td><td></td></tr><tr><td>Heparina 5000E Liquemina</td><td>Drossapharm AG</td><td></td><td>0,5 mL</td></tr><tr><td>HEPES Solución Tampón 1M</td><td>Gibco</td><td>15630-056</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Liberase DH</td><td>Roche 5401054001</td><td></td><td>2x 5 mg por paquete</td></tr><tr><td>MEM NEAA 100x</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Na Piruvato 1mg/mL</td><td>Gibco</td><td>11360-039</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Penicilina estreptomicina</td><td>Gibco 15140122</td><td></td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Faloidina alexa Fluor 488</td><td>Sondas Moleculares</td><td>A12379</td><td>300 unidades</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Tripsina 1x 0.25%</td><td>Gibco</td><td>25050-014</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Tripsina EDTA 0.25%</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>100 mL</td></tr></tbody></table>

producción de plasma autólogo rico en plaquetas para impulsar la expansión in vitro de fibroblastos humanos

Production of Autologous Platelet-Rich Plasma for Boosting In Vitro Human Fibroblast Expansion

Actualmente existe un gran interés clínico en el uso de fibroblastos autólogos para la reparación de la piel. En la mayoría de los casos, se requiere el cultivo de células de la piel in vitro. Sin embargo, el cultivo celular que utiliza medios de cultivo xenogénicos o alogénicos tiene algunas desventajas (es decir, riesgo de transmisión de agentes infecciosos o expansión celular lenta). Aquí, se desarrolla un sistema de cultivo autólogo para la expansión de células de fibroblastos de la piel humana in vitro utilizando el propio plasma rico en plaquetas (PRP) del paciente. Los fibroblastos dérmicos humanos se aíslan del paciente mientras se somete a una abdominoplastia. Los cultivos se siguen durante un máximo de 7 días utilizando un medio suplementado con suero bovino fetal (FBS) o PRP. Se evalúa el contenido de células sanguíneas en las preparaciones de PRP, la proliferación y la diferenciación de fibroblastos. Este protocolo describe el método para obtener una preparación estandarizada y no activada de PRP utilizando un dispositivo médico dedicado. La preparación requiere solo un dispositivo médico (CuteCell-PRP) y una centrífuga. Este dispositivo es adecuado en condiciones de práctica médica suficientes y es un sistema cerrado de un solo paso, apirogénico y estéril que requiere una sola centrifugación de centrifugación de centrifugación suave de 1.500 x g durante 5 min. Después de la centrifugación, los componentes sanguíneos se separan y el plasma rico en plaquetas se recoge fácilmente. Este dispositivo permite una preparación rápida, consistente y estandarizada de PRP que se puede utilizar como un suplemento de cultivo celular para la expansión in vitro de células humanas. El PRP obtenido aquí contiene una concentración de plaquetas de 1,5 veces en comparación con la sangre total junta, con una eliminación preferencial de glóbulos rojos y blancos. Está demostrado que el PRP presenta un efecto potenciador en la proliferación celular en comparación con FBS (7.7x) y que los fibroblastos se activan con el tratamiento con PRP.

Esta tecnología patentada es un dispositivo médico simple, rápido y reproducible utilizado para producir preparaciones estandarizadas de PRP. Es un sistema de un solo paso, totalmente cerrado, que permite la preparación de PRP a partir de sangre total venosa después de 5 min de centrifugación a 1.500 x g (debido a la tecnología de gel separador). El PRP obtenido después de la centrifugación se elimina de los glóbulos rojos y blancos, que se encuentran debajo del gel. Después de varias inversiones del tubo, las p...

Este protocolo presenta un dispositivo que produce PRP para impulsar la expansión in vitro de las células en un sistema de cultivo de fibroblastos 100% autólogo.

Producción de plasma autólogo rico en plaquetas para impulsar la expansión in vitro de fibroblastos humanos

There is currently great clinical interest in the use of autologous fibroblasts for skin repair. In most cases, culture of skin cells in vitro is ...

Este protocolo es el sistema autólogo para el cultivo de fibroblastos humanos con plasma rico en plaquetas propio del paciente y una preparación estandarizada durante cinco minutos. El PRP promueve una expansión celular masiva de fibroblastos en cultivo. Le recomendaría que utilice este método utilizando PRP como un suplemento celular cuando necesite una expansión celular masiva y segura para terapias celulares autólogas.Cuando intente este protocolo, le recomendaría que verifique la integridad del PRP. Su plasma tiene que estar muy limpio con ausencia de glóbulos rojos. Cuando lo transfieres, tienes que hacerlo con mucho cuidado.Y con respecto a la digestión de su tejido, tiene que estar muy limpio antes de continuar. Para comenzar, gire cuidadosamente los tubos de plasma rico en plaquetas llenos de sangre, o PRP, al revés tres veces para mezclar la sangre con anticoagulante. Centrifugar las muestras de sangre a 1500 g durante cinco minutos en un rotor fijo en ángulo de 45 grados y equilibrar los tubos.Después de la centrifugación, la sangre fraccionada tiene glóbulos rojos y blancos atrapados debajo del gel separador y las plaquetas en la superficie del gel. Invierta suavemente el tubo de PRP 20 veces para resuspender el depósito de plaquetas en el sobrenadante plasmático. Asegúrese de que las plaquetas estén completamente separadas del gel y que el plasma cambie de claro y transparente a turbio.Recoja la solución plasmática del tubo utilizando un dispositivo de transferencia conectado a una jeringa de 10 mililitros. Coloque las muestras de piel en un tubo de polipropileno de 50 mililitros con PBS y agite el tubo suavemente. Si la muestra de piel es relativamente grande, colóquela en la tapa de un plato de cultivo de tejido de 150 centímetros cuadrados con el lado epidérmico hacia abajo.Retire el tejido graso subcutáneo con un par de fórceps y tijeras. Para evitar que el tejido se seque, enjuague el tejido cada pocos minutos en PBS. Cuando se complete la eliminación de grasa, use un bisturí para cortar las muestras de piel en tiras, aproximadamente 0.5 por 1.5 centímetros.A continuación, agregue cinco mililitros de mezcla de colagenasa / dispasa a un tubo estéril de 15 mililitros. Transfiera el tejido cortado al tubo. Asegúrese de que las piezas de tejido estén sumergidas en la solución y tape el tubo de forma segura.Coloque los tubos en una incubadora a 37 grados centígrados con agitación orbital durante 150 minutos. Después de la incubación, mueva el tubo que contiene el tejido al gabinete de bioseguridad. Coloque la tapa de un plato de cultivo estéril de 100 milímetros boca abajo en el gabinete de bioseguridad.Transfiera la suspensión de tejido al fondo de la placa de cultivo de 100 milímetros sin salpicaduras. Si quedan pedazos de tejido en el tubo, use una pipeta estéril de un mililitro o pinzas estériles para transferir las piezas al fondo de la placa de cultivo. Con la epidermis hacia arriba, sostenga la dermis con un par de fórceps.Agarre el borde de la epidermis con otro par de fórceps y separe la dermis y la epidermis. Manteniendo las piezas separadas en la misma tapa, coloque las piezas dérmicas en un nuevo plato de cultivo de 100 milímetros que contenga PBS. A continuación, utilizando pinzas de laboratorio, transfiera las piezas dérmicas a un tubo de polipropileno de 15 mililitros que contenga tres mililitros de Tripsina PBS al 0,3%.Incubar el tubo en un baño de agua de 37 grados centígrados y mezclar el contenido cada dos o tres minutos invirtiendo el tubo varias veces. Después de 10 a 20 minutos, detenga la reacción agregando de tres a cinco mililitros de medio de crecimiento completo helado. Vortex el tubo vigorosamente varias veces.Filtre la suspensión, que contiene los fibroblastos, a través de una malla de nylon de 85 micras en un tubo de 50 mililitros. Centrifugar la solución de fibroblastos a 150 g durante 10 minutos. Aspirar el sobrenadante y resuspender el pellet celular en 100 a 200 microlitros de medio de crecimiento completo para el recuento celular.Colocar las células en un matraz de cultivo de tejidos de 25 centímetros cuadrados. A continuación, incubar el matraz a 37 grados centígrados. Cambie el medio que contiene células no adherentes al día siguiente, y nuevamente, cada tres o cuatro días.Cuando los fibroblastos alcancen 70 a 80% de confluencia, lávelos con PBS y agregue solución de tripsina-EDTA. Después de incubar el matraz durante tres minutos a 37 grados centígrados, detenga la reacción agregando de tres a cinco mililitros de medio de crecimiento completo caliente. Luego, centrifugar la suspensión celular a 200 g durante cinco minutos.Retire el sobrenadante por aspiración. Cultivar los fibroblastos en medio PRP e incubar a 37 grados centígrados. La densidad celular mínima recomendada es de 4.000 células viables por centímetro cuadrado.Se utilizó un dispositivo médico dedicado para producir PRP procesando sangre total de 10 pacientes diferentes. El dispositivo eliminó la mayoría de los glóbulos rojos y glóbulos blancos. La concentración media de plaquetas en el PRP fue aproximadamente un 50% más alta que la concentración de plaquetas en sangre total.Los fibroblastos autólogos se cultivaron en medio con 10% de FBS o en medios con concentraciones de PRP que variaron de uno a 50%Después de siete días de cultivo, sin cambiar el medio, los cultivos cebados con 20% de PRP exhibieron un mayor número de fibroblastos viables. El PRP tuvo efectos potentes como un refuerzo de la proliferación hasta 7.7 veces en comparación con FBS. La tinción con faloidina mostró que el cambio morfológico observado tras la activación del PRP estaba relacionado con la reorganización de la actina F, que es una firma de la activación de fibroblastos.Una preocupación importante de la rápida expansión celular es el riesgo de modificación genómica. Para evaluar esto, puede realizar un ensayo de hibridación genómica comparativa para evaluar la estabilidad genómica de sus células. La principal ventaja de esta técnica es reemplazar FBS por un PRP, que es un suplemento biológico autólogo más potente.Con esto, el investigador puede crecer más células más rápido sin ninguna adición de sustancias xenogénicas. Podemos utilizar esta técnica para otros tipos de células que necesitan expansión ex vivo antes de la aplicación clínica, por ejemplo, queratinocitos o células madre mesenquimales.

production-autologous-platelet-rich-plasma-for-boosting-vitro-human

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Lisado de plaquetas humanas es una rica fuente de factores de crecimiento y un suplemento potente en cultivo celular. Este protocolo se presenta el proceso de preparación de una gran cantidad de lisado de plaquetas humanas, partiendo de plasma rico en plaquetas, la realización de varios ciclos de congelación-descongelación y el agotamiento de los fragmentos de plaquetas.

Preparación de combinados lisado plaquetario humano (pHPL) como un suplemento eficaz de los animales libres de suero humano culturas de células madre

Este video muestra una técnica para la diferenciación de megacariocitos y la formación de plaquetas. Las células progenitoras madre hematopoyéticas, aisladas de la sangre del cordón umbilical humano, se diferencian en megacariocitos maduros en presencia de trombopoyetina. Los megacariocitos maduros producen extensiones citoplasmáticas denominadas proplaquetas, que dan lugar a plaquetas individuales.

Un método in vitro para la diferenciación de megacariocitos y la formación de plaquetas

Este video muestra la preparación de plasma rico en plaquetas (PRP) de alta calidad mediante la detección del recuento de plaquetas, la recolección y centrifugación de sangre y el aislamiento de plaquetas. Este PRP se utiliza en aplicaciones terapéuticas para la regeneración y cicatrización de tejidos.

Preparación de plasma rico en plaquetas de sangre periférica humana

Fibrina rica en leucocitos (L-PRF) representa una preparación aprobada por la FDA de concentrados de plaquetas autólogas que posee una arquitectura de fibrina única, plaquetas enriquecidas y abundantes factores de crecimiento. Aquí, presentamos un protocolo para la generación de L-PRF en el lado del sillón, así como evaluamos sus propiedades mecánicas, incluidas las pruebas uniaxiales y las pruebas de resistencia a la retención de la sutura.

Caracterización de los leucocitos-plaquetas Rich fibrina, una novela de Biomateriales

Aquí se presenta un protocolo para generar tejidos conectivos diseñados para un cultivo paralelo de 48 tejidos en una placa de múltiples pocillos con polos dobles, adecuado para estudios mecanicistas, modelado de enfermedades y aplicaciones de detección. El protocolo es compatible con fibroblastos de diferentes órganos y especies y se ejemplifica aquí con fibroblastos cardíacos primarios humanos.

Tejido conectivo de ingeniería humana derivado de fibroblastos para aplicaciones de detección

El plasma rico en plaquetas (PRP) se utiliza en el tratamiento de los trastornos musculoesqueléticos equinos. Diferentes técnicas producen PRP con diferentes concentraciones de plaquetas y leucocitos. Este artículo describe un método para obtener PRP a partir de la sangre de caballo.

Un método simple de tubo de doble centrifugación para obtener plasma rico en plaquetas de sangre equina

Para aplicaciones futuras como un parche para reparar desgarros parciales del ligamento cruzado anterior (ACL), las células derivadas de ACL humana fueron aisladas de tejido obtenido durante los procedimientos reconstructivos, expandidas in vitro y cultivados en los andamios de ingeniería tisular. A continuación, se realizó la adhesión celular y la morfología para confirmar la biocompatibilidad de la superficie del andamio.

Recuperación Quirúrgica, aislamiento y<em&gt; In vitro</em&gt; Ampliación del cruzado anterior humana derivados de las células del ligamento para aplicaciones de ingeniería de tejidos

Este manuscrito describe la producción, caracterización y usos potenciales de un constructo de ingeniería tisular esofágico 3D preparado a partir de fibroblastos humanos primarios normales de esófago y las células epiteliales escamosas sembradas dentro de un andamio-de cellularized porcino. Los resultados demuestran la formación de un epitelio estratificado maduro similar al esófago humano normal.

Producción, Caracterización y posibles usos de un Humano esofágica mucosas Modelo ingeniería tisular 3D

Se presenta un protocolo para la generación de vectores adenovirales de alta capacidad que carecen de todas las secuencias codificantes virales. La clonación de los transgenes contenidos en el genoma del vector se basa en endonucleasas homing. La amplificación del virus en células productoras cultivadas como células adherentes y en suspensión se basa en un virus auxiliar que proporciona genes virales en trans.

La clonación y producción a gran escala de alta capacidad vectores adenovirales en base al tipo de adenovirus humano 5

Hemos desarrollado un ensayo de irritación ocular que utiliza un modelo de tejido tridimensional epitelial-córnea como humana reconstruida (RHCE). La prueba es capaz de discriminar entre irritante ocular y materiales corrosivos (SGA Categorías 1 y 2 combinados) y aquellos que no requieren etiquetado (GHS No Categoría).

Irritación de los ojos de prueba (IET) para la identificación del peligro de los ojos: Irrita los productos químicos que utilizan Reconstruido humana Córnea-como epitelial (RHCE) Modelo de Tejidos

Aprende a producir plasma autólogo rico en plaquetas para expandir fibroblastos humanos in vitro de forma segura y eficiente. Este método estandarizado impulsa terapias celulares autólogas en medicina regenerativa.

Producción de plasma autólogo rico en plaquetas para impulsar la expansión in vitro de fibroblastos humanos

Explorar más videos