Ensayo de cambio de gel de intercambio Acyl-PEGyl para la determinación cuantitativa de la palmitoylación de las proteínas de la membrana cerebral

Este método bioquímico permite la determinación del estado de palmitoilación de cualquier proteína de membrana expresada en el cerebro para la que se dispone de un anticuerpo adecuado. La principal ventaja de esta técnica es que no requiere purificación de afinidad y en su lugar utiliza cambios en la movilidad del gel para determinar el número de modificaciones de una proteína de interés. Después de diseccionar el cerebro, homogeneizarlo inmediatamente en 10 mililitros de tampón de homogeneización en un homogeneizador de vidrio sobre hielo.

Usando aproximadamente 12 golpes, centrifugar los lysates durante 15 minutos a 1400 veces G, y cuatro grados Celsius. Transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo sobre hielo. Resuspender el pellet en 10 mililitros de tampón de homogeneización.