Name: Un ensayo de motilidad planarian para medir las propiedades biomodulantes de los productos naturales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Aprende a evaluar los efectos estimulantes y de abstinencia de productos naturales en la motilidad de planarias mediante el ensayo de velocidad locomotora. Este método proporciona datos conductuales fiables para investigaciones preclínicas en neurociencia y farmacología.

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Los autores desean reconocer a la oficina de Avance Institucional, y a la Morrisville College Foundation por una subvención de publicación para apoyar este trabajo, así como al SunY Morrisville Collegiate Science and Technology Entry Program (CSTEP) por su asistencia continua y apoyo a la investigación de pregrado en SUNY Morrisville. También queremos agradecer a Sophia Hutchens por sus útiles comentarios sobre la técnica descrita.

1. La cría plana
<ol><li>Utilice planarios comprados a una empresa de suministro biológico o capturados salvajemente si es necesario. Los planarios utilizados en este protocolo son Dugesia tigrina,como se indica en la lista de suministros. Esta especie también se conoce como Girardia tigrina31. Otras especies planarias acuáticas también son aceptables2,3. NOTA: El protocolo descrito está orientado a animales comprados a una empresa de suministro biológico. Este sistema de ensayo no ha sido probado con planarios capturados salvajemente. Sin embargo, si se utilizan planarios capturados silvestres, se recomienda que se habituen al agua utilizada en los experimentos, así como al entorno de laboratorio durante al menos 1 semana antes de su uso.</li>
	<li>A su llegada, transfiera planarios a recipientes de almacenamiento de alimentos de plástico que contengan agua limpia de manantial y mantenga las tapas entreabiertas.</li>
	<li>Mantener planarios en un entorno oscurecido.</li>
	<li>Alimentar a los planarios recién entregados después de 24–36 h en su nuevo entorno.</li>
	<li>Permita que los planarios se aclimaten al laboratorio al menos 1 semana antes de la experimentación.</li>
	<li>Alimente a los planarios en un horario regular dos veces por semana.<ol>
<li>Permita que los planarios alimenten ad libitum en huevos cocidos orgánicos picados o en hígado de carne de res orgánico mezclado durante 1–2 h.</li>
		<li>Colocar planarios alimentados en un recipiente limpio después de la alimentación.<ol>
<li>Retire el agua sucia de los planarios.</li>
			<li>Utilice un pequeño pincel de acuarela plana (número 3–6) para transferir los restos de comida y la baba adheriéndose al recipiente de alrededor de los planarios a una toalla de papel.</li>
			<li>Con agua dulce de manantial y suave remolino o agitación, desalojar los planarios y verterlos en un recipiente limpio.</li>
			<li>Cualquier planarios que quede adherido al recipiente se puede transferir utilizando un pincel de acuarela redonda (número 3–6) o pipeta de transferencia con un agujero ancho.</li>
			<li>Decantar el agua de transferencia.</li>
			<li>Cubra a los planarios con agua de manantial limpia.</li>
			<li>Después de 24 h, retire los planarios de cualquier desperdicio de alimentos expulsados transfiriéndolos a un recipiente limpio como se describió anteriormente (pasos 1.6.2.1–1.6.2.6).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para limpiar los recipientes y utensilios utilizados para la cría planaria, no utilice jabón ni detergente. Limpie estos artículos enjuagando bien con agua limpia (el agua del grifo es aceptable) y secándolos con un paño limpio o una toalla de papel.</li>
</ol>2. Preparación de planarios para experimentos
<ol><li>Permita que los planarios recién entregados se aclimaten a su entorno al menos 1 semana antes de la experimentación.</li>
	<li>Se mueren de hambre durante 5-10 días antes de la experimentación.</li>
	<li>Cambiar el agua de cultivo al menos 1x durante el período de inanición.</li>
</ol>3. Prueba de velocidad del locomotor plano (pLmV): Comportamientos estimulantes
<ol><li>Antes de la experimentación, asegúrese de que los planarios hambrientos estén completamente formados, con una cabeza y cola completas y pigmentadas.</li>
	<li>Preparar un vaso o plástico de 10 cm de petri y un recipiente de habituación para la prueba de pLmV antes de iniciar el experimento.<ol>
<li>Coloque un plato Petri limpio de 10 cm de diámetro que se utilizará para la prueba de pLmV en papel de rejilla prelaminado (con cuadrados de 0,5 cm).</li>
		<li>Añadir 20 ml de agua de manantial sin adulterar para controles, o agua de manantial que contenga la concentración adecuada del producto natural que se está probando, a la placa Petri de 10 cm de diámetro que se utilizará para la prueba de pLmV.</li>
		<li>Coloque una cámara (por ejemplo, teléfono celular o cámara de alta resolución) por encima de la placa Petri preparada de 10 cm de diámetro para registrar la motilidad planaria sobre el papel de rejilla durante el experimento. Un soporte de anillo es una manera conveniente de colocar la cámara a una distancia que puede grabar toda la vista de la placa Petri de 10 cm y las líneas de rejilla.</li>
		<li>Preparar un recipiente de habituación con 5-10 ml de agua de manantial no adulterada (controles), o agua de manantial que contenga la concentración adecuada del producto natural que se está probando. Un recipiente similar a un vial de centelleo o una pequeña placa De Petri de 5 cm es adecuado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilice un pincel de acuarela pequeño, limpio, plano o redondo para transferir suavemente un planorio del recipiente con agua de manantial al recipiente de habituación con 5-10 ml de agua de manantial no adulterada o agua de manantial que contenga el producto natural que se está probando. NOTA: Al manipular planarios para el ensayo pLmV, utilice un pincel de acuarela pequeño, limpio, plano o redondo (número 3–6). Al mover planarios, el cepillo debe colocarse debajo del animal para levantarlo suavemente. Para garantizar que los planarios no se dañen al usar el cepillo, las cerdas del cepillo no deben ser desechadas debajo del animal. La esparcimiento de las cerdas podría dañar el plano si se atrapa entre las fibras del cepillo. NOTA: También se puede utilizar una pipeta de transferencia de diámetro ancho para transferir el planario a un recipiente de habituación limpio y seco.<ol>
<li>Si utiliza la pipeta, retire el exceso de agua movida con el planario del contenedor de habituación utilizando la pipeta de transferencia.</li>
		<li>Añadir cuidadosamente la solución de habituación (es decir, agua de manantial para controles o agua de manantial que contenga la concentración de producto natural que se está probando) al recipiente de habituación que contiene el planario.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Los períodos de habituación dependerán de la dinámica de estimulación evaluada para el producto natural que se está probando. Un tiempo de habituación de 2 min resultó aceptable para detectar la estimulación en este trabajo1.</li>
	<li>Después del período de habituación de 2 minutos, utilice un pincel de acuarela para transferir suavemente el planoario al centro de la placa Petri de 10 cm preparada para el experimento de estimulación pLmV.</li>
	<li>Inicie la cámara para grabar el movimiento del plano. Graba entre 10 y 11 minutos de vídeo.</li>
	<li>Preparar el recipiente de habituación y el plato Petri de 10 cm para el experimento pLmV con soluciones frescas para cada planario.</li>
	<li>Utilice pipetas, platos, recipientes y pinceles específicos para cada concentración experimental del producto natural que se está probando para evitar exponer inadvertidamente a los planarios a la solución incorrecta durante la experimentación.</li>
	<li>Debido a que los planarios exhiben comportamientos aprendidos, cada planario (control o prueba) solo debe usarse una vez21,,22.</li>
</ol>4. Prueba de velocidad del locomotor plano (pLmV): Comportamientos de abstinencia
<ol><li>Antes de la experimentación, asegúrese de que los planarios hambrientos estén completamente formados, con una cabeza y cola completas y pigmentadas.</li>
	<li>Preparar un plato de Petri de 10 cm (vidrio o plástico) para el experimento pLmV, un plato de Petri de 5 cm (vidrio o plástico) para enjuagar el planario después de la habituación, y un recipiente de habituación antes de comenzar el experimento.<ol>
<li>Coloque un plato Petri limpio de 10 cm de diámetro que se utilizará para el experimento pLmV en papel de rejilla prelaminado con cuadrados de 0,5 cm).</li>
		<li>Añadir 20 ml de agua de manantial sin adulterar a la placa Petri de 10 cm de diámetro que se utilizará para el experimento pLmV.</li>
		<li>Coloque una cámara por encima de la placa Petri preparada de 10 cm de diámetro como en el paso 3.2.3 para registrar la motilidad planaria sobre el papel de rejilla durante el experimento.</li>
		<li>Preparar el recipiente de enjuague planario añadiendo 5 ml de agua de manantial sola al plato Petri de 5 cm.</li>
		<li>Preparar un recipiente de habituación con 5-10 ml de agua de manantial sin adulterar (controles) o agua de manantial que contenga el producto natural que se está probando. Un recipiente similar a un vial de centelleo o un pequeño plato de Petri de 5 cm (vidrio o plástico) es adecuado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utilice un pincel de acuarela pequeño, limpio, plano o redondo para transferir un planorio del agua de manantial al recipiente de habituación preparado con 5-10 ml de agua de manantial no adulterada (controles) o agua de manantial que contenga el producto natural que se está probando. Mueva suavemente al animal del contenedor de la población al contenedor de habituación. Asegúrese de que el plano no esté dañado por el cepillo. NOTA: Al manipular planarios para el ensayo pLmV, utilice un pincel de acuarela pequeño, limpio, plano o redondo (número 3–6). Al mover planarios, el cepillo debe colocarse debajo del animal para levantarlo suavemente. Para garantizar que los planarios no se dañen al usar el cepillo, las cerdas del cepillo no deben ser desechadas debajo del animal. La esparcimiento de las cerdas podría dañar el plano si se atrapa entre las fibras del cepillo. NOTA: También se puede utilizar una pipeta de transferencia de diámetro ancho para transferir el planario a un recipiente de habituación limpio y seco.<ol>
<li>Si utiliza la pipeta, el exceso de agua movido con el planario debe eliminarse del contenedor de habituación utilizando la pipeta de transferencia.</li>
		<li>Añadir cuidadosamente la solución de habituación (es decir, agua de manantial no adulterada para controles o agua de manantial que contenga el producto natural que se está probando) al recipiente de habituación que contiene el planario.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Los períodos de habituación para la retirada dependerán de la dinámica de estimulación evaluada para el producto natural que se está probando; 2-5 min han demostrado ser suficientes.</li>
	<li>Después del período de habituación utilice un pincel de acuarela para transferir suavemente el planario al plato Petri preparado de 5 cm que contiene agua de manantial para enjuagar cualquier producto natural del recipiente de habituación. Asegúrese de que el plano no esté dañado por el cepillo.</li>
	<li>Transfiera inmediatamente el planoario al centro de la placa Petri de 10 cm preparada que contiene agua de manantial para el experimento de abstinencia de pLmV. Asegúrese de que el plano no esté dañado por el cepillo.</li>
	<li>Inicie la cámara para grabar el movimiento del plano. Graba entre 10 y 11 minutos de vídeo.</li>
	<li>Preparar el recipiente de habituación, el recipiente de enjuague y el plato Petri de 10 cm para el experimento pLmV con soluciones frescas para cada planario.</li>
	<li>Utilice pipetas, platos, recipientes y pinceles específicos para cada concentración experimental del producto natural que se está probando para evitar exponer inadvertidamente a los planarios a la solución incorrecta durante la experimentación.</li>
	<li>Dado que los planarios exhiben comportamientos aprendidos, utilice cada planario (control o prueba) solo una vez26,,27.</li>
</ol>5. Análisis de datos
<ol><li>Prepare una tabla de recopilación de datos para documentar el comportamiento y la motilidad de los planarios como el número de líneas de cuadrícula cruzadas para cada minuto durante la ejecución de pLmV. La tabla debe permitir que también se documente el número acumulado de líneas por minuto atravesadas por el planario. Incluya líneas para notas y una tabla de definiciones para contar la observación de comportamientos durante el período experimental, como 'wander' y 'stop' (ver Discusión).</li>
	<li>Con el vídeo, cuente el número de líneas de cuadrícula completas cruzadas por el planario por minuto durante 10 minutos y registre ese número en la tabla de datos. El comportamiento planario típico consiste en velocidad continua, movimiento horizontal dirigido hacia delante, con giros periódicos y sin paradas.<ol>
<li>Comienza a cronomelar el experimento en el punto en que el planario se ha movido del pincel utilizado para transferirlo a la placa Petri de 10 cm. Registre esta hora de inicio.</li>
		<li>Para determinar cuándo el animal cruza un cuadrado de cuadrícula completa, concéntrese en la cabeza y anote una línea cuando la cabeza cruce completamente un cuadrado.</li>
		<li>Para anotar una cuadrícula completa cuando el gusano se mueve alrededor del borde del plato, visualice una distancia de 0,5 cm refiriéndose a las líneas a medida que se extienden desde los márgenes del plato. Si el plano cruza la esquina de un cuadro, consulte la segunda línea cruzada para anotar una línea de cuadrícula. Una vez más, concéntrese en la cabeza para tomar estas determinaciones.</li>
		<li>Detenga el vídeo después de cada minuto para grabar los datos.</li>
		<li>Al reiniciar el vídeo para contar el minuto siguiente, si la cabeza del gusano estaba entre las líneas de cuadrícula cuando se detuvo el vídeo, grabe la primera línea cruzada como un cuadro completo.</li>
		<li>Puntuar el número de líneas de rejilla cruzadas durante 10 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Si el animal deja de moverse durante una prueba de pLmV y ya no cruza las líneas de rejilla durante el tiempo de grabación de 10 minutos, documente el comportamiento del planario en el gráfico de comportamiento (por ejemplo, 'wander' o 'stop'). En su lugar, los animales que cesen su vía de avance durante el ensayo pLmV deben tener en cuenta y los datos se presentan como una frecuencia del número total de animales expuestos a dicha concentración de reactivos. El comportamiento en espiral o convulsivo (conocido como comportamiento C) que impide cualquier movimiento hacia adelante durante el período de habituación indica que la concentración del producto natural no es adecuada para su uso en un ensayo de pLmV porque el ensayo de pLmV está basado en la motilidad. Los comportamientos de tipo C se pueden analizar utilizando un tipo diferente de análisis (consulte Discusión).</li>
	<li>Si es posible, pruebe múltiples concentraciones experimentales del producto natural utilizando al menos 9-12 gusanos en diferentes días y diferentes horas del día si determina el efecto global del reactivo en la fisiología planaria. Sin embargo, si los investigadores se esfuerzan por reducir la variabilidad inducida por el ritmo circadiano, los experimentos se pueden llevar a cabo con iluminación constante a una hora determinada del día utilizando gusanos que se cultivan con ciclos de luz/oscuridad cronomeurnos y establecen los tiempos de alimentación. Tener al menos dos experimentadores involucrados en el proyecto para permitir la opción de tener un registro de datos individual, mientras que el segundo individuo cuenta las líneas de cuadrícula 'ciegas' a las condiciones utilizadas para la recopilación de datos. Tener diferentes individuos involucrados en la recopilación de datos, así como cálculos estadísticos y análisis, también reduce el posible sesgo.</li>
	<li>Calcule los recuentos de líneas de cuadrícula para cada concentración de producto natural en cada día en relación con los recuentos de control para cada minuto, de modo que se puedan combinar datos de diferentes días, horas y experimentadores. Estos datos se pueden promediar y luego analizar mediante las pruebas T de Student. Los valores P para cada prueba se pueden evaluar por minuto en comparación con el control y entre las concentraciones de reactivos. Las evaluaciones de ANOVA utilizando conjuntos de datos derivados de diferentes concentraciones experimentales proporcionan un método de análisis adicional.</li>
</ol>

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<li>Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+planarians%3A+feeding+and+injection+of+synthetic+dsRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">RNA interference in planarians: feeding and injection of synthetic dsRNA.</a> Methods in Molecular Biology. 1774, 455-466 (2018).</li>
<li>Pagán, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+cocaine-induced+planarian+behavior+by+parthenolide+and+related+sesquiterpene+lactones%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Reversal of cocaine-induced planarian behavior by parthenolide and related sesquiterpene lactones.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 89 (2), 160-170 (2008).</li>
<li>Vouga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereochemistry+and+neuropharmacology+of+a+%27bath+salt%27+cathinone%3A+S-enantiomer+of+mephedrone+reduces+cocaine-induced+reward+and+withdrawal+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Stereochemistry and neuropharmacology of a 'bath salt' cathinone: S-enantiomer of mephedrone reduces cocaine-induced reward and withdrawal in invertebrates.</a> Neuropharmacology. 91, 109-116 (2015).</li>
<li>Chan, J. D., Marchant, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+and+functional+genetic+assays+to+manipulate+regeneration+of+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Pharmacological and functional genetic assays to manipulate regeneration of the planarian Dugesia japonica.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3058(2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Se describe un ensayo de motilidad planaria sencillo y accesible para determinar los efectos estimulantes y de abstinencia de los productos naturales. Como modelo de comportamiento es necesario tener protocolos estrictos para el movimiento de puntuación y definiciones claras de cualquier comportamiento para estandarizar las observaciones entre diferentes experimentadores. Las ideas presentadas ofrecen una demostración de cómo se puede lograr esto. Cada laboratorio que utilice este protocolo debe adaptar la información pr...

El protocolo descrito utiliza la motilidad planaria para proporcionar un medio de evaluar los efectos biomoduladores de las sustancias naturales. Se adaptó específicamente para determinar si estas sustancias funcionan como estimulantes, y si entonces se asociaron con un comportamiento de abstinencia mensurable1. Este ensayo, conocido como la prueba de velocidad del locomotor planorio (pLmV), se utilizó por primera vez para probar agentes farmacológicos conocidos2,3. La aplicación de este ensayo plano a base de motilidad ha crecido desde entonces en popularidad y ha sido adoptado por diferentes laboratorios interesados en sustancias distintas de los productos naturales4,,5. Para este ensayo, un planorio se coloca en un plato de Petri que contiene agua de manantial o agua de manantial que contiene un biomodulador disuelto. Debido a que el plato en sí se coloca en papel gráfico, el número de líneas de rejilla cruzadas por el animal con el tiempo a medida que se mueve alrededor del recipiente se puede utilizar para determinar la velocidad de movimiento en cada condición. La prueba de luz/oscuridad, también conocida como la prueba de preferencia de lugar condicionada (CPP), es otra variación en el tema de la supervisión de la motilidad planaria, y evalúa la rapidez con la que los animales responden y migran a un entorno oscuro6,,7. El seguimiento de vídeo de los movimientos planos también se puede analizar utilizando programas informáticos y seguimiento del centro de masa (COM)8,9,10,11.
El uso del planoario como modelo animal para tales estudios ofrece varias ventajas sobre otros animales en que el experimentador puede controlar fácilmente el entorno del ensayo. Específicamente, el hambre de los planarios antes de la experimentación puede impedir su exposición a otros agentes nutricionales o farmacológicos que de otro modo podrían confundir los resultados, y el biomodulador específico bajo investigación se puede introducir a los planarios simplemente agregándolo directamente al agua de cultivo, estandarizando así la exposición. Dado que los planarios tienen un sistema nervioso y neurotransmisores que recuerdan a los animales de orden superior, la fisiología y las respuestas experimentales de estos animales a los estímulos neuromusculares se consideran biológicamente relevantes para otros organismos12,,13,,14,,15,,16. Además, debido a que los planarios son relativamente baratos y sencillos de mantener en el laboratorio, ofrecen un modelo biológico accesible para muchos investigadores.
Como animal experimental, los planarios son adecuados para una amplia gama de estudios. Por ejemplo, nuestro grupo, así como otros investigadores utilizan planarios para estudiar la tumorigenesis17,18,19. Los planarios también exhiben una serie de comportamientos de respuesta a estímulos químicos, térmicos, gravitacionales, eléctricos, fotográficos y magnéticos que han formado la base de otros sistemas de ensayo. Algunos de estos efectos se han utilizado para estudiar el aprendizaje y la memoria en estos animales20,,21,22,23,24,25,26,27. El uso principal del modelo planario en la literatura en la actualidad se centra en la actividad de las células madre pluripotentes planarias, llamadas neoblastos, y su papel en la regeneración28,,29,,30. Por lo tanto, la adopción del modelo descrito aquí permite un estudio más profundo utilizando otros ensayos basados en planarios para proporcionar una comprensión más amplia de cómo los productos naturales y otros biomoduladores afectan al organismo.

<table><tbody><tr><td>Agua embotellada - 1 galón.</td><td>Manantial de Polonia</td><td>N/A Agua</td> de <td>manantial para el cultivo de planarias y para la preparación de soluciones</td></tr><tr><td>Planaria marrón (Dugesia tigrina)</td><td>Compañía de Suministros Biológicos de Carolina</td><td>132954</td><td>Planarias marrones vivas (se aceptan otras especies)</td></tr><tr><td>Pincel plano</td><td>Royal Crafter's Choice</td><td>9159</td><td>Pinceles planos de acuarela para la limpieza de recipientes de cultivo planaria</td></tr><tr><td>Placa de Petri de vidrio - 10 cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>10 cm de diámetro (vidrio) Placas de Petri para el ensayo de pLmV</td></tr><tr><td>Placa de Petri de vidrio - 5 cm</td><td>Kimax</td><td>N/A</td><td>5 cm y placas de Petri para el enjuague de planarias durante los experimentos de extracción y para la habituación de estimulantes</td></tr><tr><td>Papel cuadriculado</td><td>Cualquier</td><td>N/A</td><td>Papel cuadriculado estándar de 0,5 cm para el ensayo pLmV</td></tr><tr><td>iPEVO Visualizador (software)</td><td>iPEVO</td><td>https://www.ipevo.com/software/visualizer</td><td>Software de cámara de documentos para captura y grabación de video</td></tr><tr><td>Juego de artículos metálicos con soporte y anillo de retorta</td><td>Cualquier</td><td>N/A</td><td>Soporte de anillo de laboratorio de química estándar para sostener la cámara de un teléfono celular si se usa</td></tr><tr><td>Huevo orgánico</td><td>Cualquiera</td><td>N/A</td><td>Huevo orgánico o hígado de res para la alimentación de planarains</td></tr><tr><td>Botella de policarbonato con tapa de rosca - 10 mL</td><td>Beckman</td><td>N/A</td><td>Viales de plástico para contener volúmenes de 5 a 10 mL para la habituación a los estimulantes</td></tr><tr><td>Contenedor de almacenamiento redondo - 10 cm</td><td>Ziploc</td><td>N/A</td><td>10 cm Recipientes redondos de almacenamiento de alimentos para aproximadamente 90 planarias o menos</td></tr><tr><td>Pincel redondo para pintura al agua</td><td>LOEW-Cornell</td><td>N/A Pinceles</td><td>de acuarela redondos pequeños (números 3 a 6) - suave</td></tr><tr><td>Pipeta de transferencia</td><td>Cualquiera</td><td>N/A Pipetas</td> de <td>transferencia de plástico de diámetro ancho (5 mL) para mover planarias</td></tr><tr><td>Cámara de documentos USB</td><td>iPEVO</td><td>CDVU-06IP Cámara de</td><td>documentos (u otra cámara o cámara de teléfono celular)</td></tr></tbody></table>

un ensayo de motilidad planarian para medir las propiedades biomodulantes de los productos naturales

A Planarian Motility Assay to Gauge the Biomodulating Properties of Natural Products

Se describe un medio sencillo y controlable de utilizar el planario no parásito, Dugesia tigrina, un gusano plano acuático de vida libre, para estudiar las propiedades estimulantes y de abstinencia de los productos naturales. Los ensayos experimentales que se benefician de aspectos únicos de la fisiología planaria se han aplicado a estudios sobre cicatrización de heridas, regeneración y tumorigenesis. Además, debido a que los planarios exhiben sensibilidad a una variedad de estímulos ambientales y son capaces de aprender y desarrollar respuestas condicionadas, se pueden utilizar en estudios conductuales que examinan el aprendizaje y la memoria. Los planarios poseen una simetría bilateral básica y un sistema nervioso central que utiliza sistemas de neurotransmisores susceptibles de estudios que examinan los efectos de los biomoduladores neuromusculares. En consecuencia, se han desarrollado sistemas experimentales de seguimiento del movimiento plano y la motilidad para examinar la adicción y la abstinencia de sustancias. Debido a que la motilidad planaria ofrece la posibilidad de un sistema de ensayo de motilidad sensible y fácilmente estandarizado para monitorear el efecto de los estímulos, la prueba de velocidad locomotora planaria (pLmV) fue adaptada para monitorear los comportamientos de estimulación y abstinencia por parte de planarios a través de la determinación del número de líneas de rejilla cruzadas por los animales con el tiempo. Aquí, la técnica y su aplicación se demuestran y explican.

La configuración del laboratorio y la preparación del espacio de trabajo para ejecutar el ensayo pLmV deben completarse antes de que comience la experimentación. Esto incluye la preparación del recipiente de habituación, el recipiente de enjuague si es necesario (para experimentos de retirada), el plato Petri sobre papel de rejilla laminado y la cámara correctamente colocada(Figura 1). Una vez que se toman todos los videos, es aconsejable utilizar una hoja de datos común para estandarizar la...

La motilidad planaria se utiliza para medir las propiedades estimulantes y de abstinencia de los productos naturales en comparación con el movimiento de los animales solo en el agua de manantial.

Un ensayo de motilidad planarian para medir las propiedades biomodulantes de los productos naturales

A straightforward, controllable means of using the non-parasitic planarian, Dugesia tigrina, a free-living aquatic flatworm, to study the stimulant and ...

La prueba de velocidad del locomotor de Planarian es un medio para evaluar rápidamente los efectos estimulantes y posibles de abstinencia para una variedad de agentes modificadores biológicos que podrían afectar la motilidad. Este ensayo se controla fácilmente y proporciona un método sencillo y accesible para generar datos de comportamiento fiables incluso en los entornos de investigación más básicos. Dado que el sistema nervioso plano tiene un cerebro rudimentario centralizado, una simetría bilateral y sistemas de neurotransmisores análogos, los estudios conductuales que utilizan estos organismos ofrecen información preclínica sobre posibles respuestas de vertebrados.Los experimentos pueden verse afectados aún más por modificadores de vías fisiológicas, fármacos o incluso planarios modificados genéticamente para proporcionar información sobre los mecanismos biológicos asociados. Es importante tener el planario para que las transferencias entre contenedores no los estreses y para estandarizar las curvas de línea de rejilla entre los miembros del laboratorio. La mejor manera de obtener resultados consistentes de este experimento de ensayo de comportamiento, es viendo cómo los usuari

a-planarian-motility-assay-to-gauge-biomodulating-properties-natural

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Un modelo atractivo para el estudio de la diferenciación de células madre en un animal vivo es el gusano planaria. La regeneración se estudia por medio de experimentos sencillos que la amputación se realiza fácilmente en un laboratorio básico y son susceptibles de (farmacológicos y...

Los ensayos farmacológicos y genéticos funcionales para manipular la regeneración de la planaria Japonica Dugesia</em

Este video demuestra el uso de un ensayo de locomoción radial para evaluar la disfunción motora en C. elegans que expresan la proteína TDP-43 humana de tipo salvaje o mutante en ELA. Los gusanos con niveles variables de expresión de TDP-43 de tipo salvaje o mutante pueden arrastrarse, y su movimiento se mide por la distancia radial recorrida desde el punto central de la placa de ensayo. El ensayo distingue entre deficiencias motoras leves, moderadas y graves en función de la distancia recorrida...

Evaluación de la discapacidad motora en modelos de C. elegans mediante el ensayo de locomoción radial

Un método para evaluar cuantitativamente la respuesta quimiotáctica de...

C. elegans Ensayo de quimiotaxis

Se describe un protocolo para la detección in vivo de los efectos de los inhibidores mitocondriales en el organismo modelo Caenorhabditis elegans y para la identificación de compuestos potenciadores potenciales. Este protocolo se puede utilizar para analizar las bibliotecas de fármacos en busca de compuestos que modulen la función mitocondrial.

Un rastreable<em&gt; En Vivo</em&gt; Ensayo para mitocondrial Moduladores Usando transgénico bioluminiscente<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Este protocolo se muestra cómo extirpar consistentemente ojos planarias (tazas óptica) sin molestar a los tejidos circundantes. Usando una aguja de insulina y la jeringa, ya sea uno o ambos ojos pueden ser ablacionada para facilitar las investigaciones sobre los mecanismos que regulan la regeneración ojo, la evolución de la regeneración visual, y la base neural de la conducta inducida por la luz.

La ablación quirúrgica de ensayo para estudio de la regeneración de los ojos en planarias

Los planarios de agua dulce exhiben tres marchas (deslizamiento, peristalsis y esquivar) que se distinguen por el análisis cuantitativo del comportamiento. Describimos un método para inducir la ejecución utilizando diversos estímulos nocivos, la cuantificación de los mismos y la distinción de la peristalsis y el deslizamiento. Usando el derribo genético, demostramos la especificidad de la escorrida como una lectura fenotípica cuantitativa.

Exploración planarian como una lectura cuantitativa del comportamiento para la detección de estímulos nocivos

Presentamos un protocolo para la caracterización de la motilidad y el comportamiento de una población de células de cien micras a milímetros utilizando microscopía de campo brillante y seguimiento celular. Este ensayo revela que Stentor coeruleus pasa por cuatro fases conductualmente distintas al regenerar un aparato oral perdido.

Análisis de los patrones de motilidad del estentor durante y después de la regeneración del aparato oral mediante el seguimiento celular

Este protocolo describe dos ensayos sensibles para discriminar entre deterioro motor leve, moderado y grave en modelos de esclerosis lateral amiotrófica de C. elegans , con utilidad general para cepas de C. elegans , con motilidad alterada.

Evaluación del deterioro motor en modelos de C. elegans de esclerosis lateral amiotrófica

El presente protocolo describe un ensayo para determinar la respuesta al levamisol, un agonista farmacológico de una clase de receptores de acetilcolina de Caenorhabditis elegans . En este ensayo de natación de levamisol líquido, los investigadores observan visualmente y cuantifican la parálisis dependiente del tiempo de los animales cultivados en placas de 24 pocillos.

Medición de la sensibilidad de Caenorhabditis elegans al agonista del receptor de acetilcolina Levamisol

El artículo propone un nuevo método in vitro para la evaluación rápida y sensible de la toxicidad y ecotoxicidad de contaminantes, basado en la motilidad de los hemocitos Mytilus galloprovincialis . El método tiene como objetivo contribuir al desarrollo de pruebas de exposición toxicológicas y ecotoxicológicas más éticas y sensibles.

Un ensayo toxicológico y ecotoxicológico basado en la motilidad de los hemocitos del mejillón (Mytilus galloprovincialis)

Las convulsiones tienen un impacto negativo en diversas funciones y en la calidad de vida. Los gusanos planarios se expusieron a concentraciones variables de quimioconvulsivos para evaluar sus fenotipos convulsivos y su motilidad disruptiva. Este estudio propone el uso de gusanos planarios como modelo para las convulsiones agudas en humanos y tiene importancia en el desarrollo de fármacos para la epilepsia.

Planaria como modelo animal para convulsiones agudas experimentales

Aprende a evaluar los efectos estimulantes y de abstinencia de productos naturales en la motilidad de planarias mediante el ensayo de velocidad locomotora. Este método proporciona datos conductuales fiables para investigaciones preclínicas en neurociencia y farmacología.

Un ensayo de motilidad planarian para medir las propiedades biomodulantes de los productos naturales

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