Name: Optimización de la Técnica del Manguito para el Trasplante cardíaco murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: Aprende la técnica del manguito optimizada con tubo interno para trasplante cardíaco heterotópico cervical en ratones. Este método mejora la eficiencia quirúrgica y reduce el tiempo de operación mediante la eversión vascular guiada.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por el Proyecto Conjunto de Investigación de Educación Sanitaria de Fujian (WKJ2016-2-20), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81771271 y 81800664), el Programa Nacional de I+D clave de China (2018YFA010), el Programa Nacional de I+D clave de China (2018YFA010)8304) y el Proyecto de Educación e Investigación Científica para Jóvenes y Medianos Profesores en la Provincia de Fujian (JAT170714), Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Hunan de China (2019JJ50842) y Huxiang Jóvenes Talentos de la Provincia de Hunan (2019RS2013).

Los animales (BALB/c, C57BL/6, macho, 8-12 semanas) se alojan en una instalación específica libre de patógenos en el Centro Animal del Laboratorio de la Universidad de Xiamen. C57BL/6 se utiliza como receptor y BALB/c se utiliza como donante. Todos los procedimientos se realizan de acuerdo con las directrices del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC).
NOTA: Para la operación son necesarios un conjunto de instrumentos microquirúrgicos, que incluyen una micro tijera, microppps rectos, microvócilos curvos y micropetas de agujas (Tabla y materiales, Figura 1B, C, D, E). Se necesita un par de abrazaderas bulldog de un solo uso (Figura 1F). Dos manguitos para la vena yugular externa y la arteria carótida se preparan cortando los tubos de poliamida personalizados con un bisturí No. 10 bajo un microscopio. El diámetro de la vena y del manguito de la arteria es de 0,9 mm y 0,55 mm, respectivamente. Además, el diámetro del tubo interno para el manguito venoso correspondiente es de 0,6 mm, y estos del tubo interno para el manguito de la arteria correspondiente es de 0,28 mm(Figura 1G).
1. Preparación del destinatario
<ol><li>Anestfetizar el ratón receptor con pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Usa cortadoras mecánicas atraumáticas para quitar el cabello en la región cervical lateral derecha.</li>
	<li>Utilice un aplicador de punta de algodón estéril para limpiar el área quirúrgica con antiséptico de yodo seguido de 70% de etanol.</li>
	<li>Coloque el ratón en la posición supina en la plataforma de operación. Cubra el ratón con gasa estéril.</li>
	<li>Usa una tijera oftálmica para hacer una incisión transversal desde la mitad inferior del cuello de un tercio hasta la articulación derecha del hombro-clavícula.</li>
	<li>Aísle la vena yugular externa derecha con micro fórceps curvos para exponer suficiente longitud, corte las ramas a través de la electrocoagulación y ligar el recipiente en el extremo distal usando una sutura de seda 6-0.</li>
	<li>Sujete la vena yugular externa proximally usando una abrazadera bulldog y luego transecte la vena proximally a la ligadura usando una micro tijera.</li>
	<li>Lavar el lumen del vaso con solución salina heparinizada de 100 U/ml 0-4 oC para eliminar cualquier sangre residual.</li>
	<li>Tire de la vena yugular externa a través del manguito de la vena utilizando micro fórceps rectos; insertar el tubo interior de la vena en el lumen como un stent, y evert la pared del vaso sobre el manguito con micro fórceps rectos (Figura 2A).</li>
	<li>Fijar el endotelio del vaso everted en el extremo proximal del manguito usando un circunferencial 8-0 sutura de seda (Figura 2B).</li>
	<li>Utilice micro fórceps rectos para extraer el tubo interno de la vena del vena vaso.</li>
	<li>Realice una disección contundente con micro pinzas curvadas para aislar la arteria carótida derecha adyacente al borde interno del esternocleidomastoideo.</li>
	<li>Sujete la arteria carótida derecha proximally usando una abrazadera de bulldog, ligar la arteria carótida distalmente usando una sutura de seda 6-0, y utilizar una micro tijera para transecto la arteria carótida proximally a la ligadura.</li>
	<li>Lavar la arteria carótida con solución salina heparinizada de 100 U/ml 0-4 oC para eliminar cualquier sangre residual.</li>
	<li>Pase la arteria carótida a través del manguito de la arteria e inserte el tubo interno de la arteria en el vaso de la arteria utilizando micro fórceps rectos(Figura 2C).</li>
	<li>Evert el recipiente sobre el manguito utilizando micro fórceps rectos; arreglar el endotelio del recipiente everted usando un 8-0 circunferencial sutura de seda (Figura 2D).</li>
	<li>Retire el tubo interno de la arteria del vaso arterial con micro fórceps rectos. NOTA: Conservar la glándula submandibular del receptor.</li>
</ol>2. Preparación del donante
<ol><li>Anestesar el ratón donante con pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Usa cortadoras mecánicas atraumáticas para eliminar el cabello en la región abdominal.</li>
	<li>Coloque el ratón en la posición supina en la plataforma de operación. Cubra el ratón con gasa estéril.</li>
	<li>Utilice un aplicador de punta de algodón estéril para limpiar el área quirúrgica con antiséptico de yodo seguido de 70% de etanol.</li>
	<li>Haga una incisión de línea media abdominal con una tijera oftálmica y exponga la cavidad abdominal.</li>
	<li>Utilice micro fórceps curvos para exponer la vena cava inferior, y luego inyecte por vía intravenosa 200 ml de 100 U/ml 0-4 oC de solución salina heparinizada por cada 20 g de peso corporal a través de la vena cava inferior.</li>
	<li>Realizar toracotomía con tijeras oftálmicas, cortar las costillas a través de las incisiones bilaterales de la línea media axilar, voltear la pared anterior del pecho hacia afuera para exponer la cavidad torácica.</li>
	<li>Exintervó el timo con micro fórceps curvos.</li>
	<li>Exponga la aorta, y luego perdone 200 l de 100 U/ml 0-4 oC solución salina heparinizada a la arteria coronaria a través del arco aórtico. NOTA: Evite perfunder burbujas de gas en el corazón del donante.</li>
	<li>Utilice una micro tijera para transeccular la aorta ascendente al principio del arco aórtico.</li>
	<li>Transecta la arteria pulmonar al principio de las dos ramas principales con una micro tijera.</li>
	<li>Ligar la vena cava superior y la vena cava inferior proximally usando una sutura de seda 6-0 y utilizar una micro tijera para transecto vena distalmente a la ligadura.</li>
	<li>Ligar las venas pulmonares juntas, circunferencialmente, usando una sola sutura de seda 6-0, y cortar las ramas de la vena distalmente a la ligadura usando una micro tijera.</li>
	<li>Retire el injerto cardíaco de los tejidos blandos circundantes; conservarlo en solución salina heparinizada de 0-4oC.</li>
</ol>3. Implantación cardíaca
<ol><li>Coloque el corazón del donante boca abajo en la región del cuello derecho del receptor.</li>
	<li>Introduzca la arteria pulmonar del corazón del donante en un lazo de seda 6-0 con micro fórceps rectos.</li>
	<li>Envuelva el lumen del vaso alrededor del manguito de la vena, y luego apriete los bucles de sutura de seda 6-0 alrededor del manguito para auralizar la articulación del vaso.</li>
	<li>Realizar anastomosis de la aorta del injerto y el manguito de la arteria siguiendo los pasos descritos en el paso 3.2.</li>
	<li>Suelte la vena yugular sujeta seguida de la arteria yugular sujeta. Mantenga la articulación del vaso sin torcido y asegúrese de que el flujo sanguíneo no esté obstruido. NOTA: El ritmo sinusal que vuelve a más de 200 veces en 1 min se considera normal.</li>
	<li>Humedezca el corazón del donante con solución salina tibia (37 oC) e inspeccione si el injerto está sangrando. Ajuste el injerto cardíaco pulsante en el espacio subcutáneo y, a continuación, sutura la incisión.</li>
</ol>4. Cuidado postoperatorio y evaluación del injerto
<ol><li>Registre el tiempo al ritmo sinusal normal y la preservación del ritmo sinusal normal durante al menos 5 minutos después de la liberación de la abrazadera para monitorear la función del injerto postoperatorio.</li>
	<li>Coloque el recipiente solo en una manta caliente hasta que el receptor se despierte de la anestesia. Administrar analgesia de buprenorfina, 0,05 mg/kg, s.c, al final de la cirugía y cada 12 horas durante 72 horas después de la cirugía.</li>
	<li>Registre diariamente el peso y el estado de recuperación postoperatorio del destinatario. En caso de pérdida de peso >15% en relación con la fecha de la cirugía, parálisis hemipléjica, o infección, eutanasiar al receptor a través de la inhalación de isoflurano terminal21.</li>
	<li>Supervise diariamente la supervivencia del injerto por palpación. La cirugía se considera exitosa si el aloinjerto murino sobrevive por >72 horas. Califique la función del injerto, como se informó previamente22: Escala 3 - vigorosamente pulsa y frecuencia; Escala 2 - menos pulsada; Escala 1- fibrilación y rechazo inminente; o Escala - 0, pérdida de latidos del corazón y rechazo completo.</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li>
<li>Que, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+cold+ischemia+time+in+mouse+heart+transplantation+using+supercooling+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation.</a> Transplantation. , (2019).</li>
<li>Wang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+murine+cardiac+allograft+arteriopathy+by+long-term+blockade+of+CD40-CD154+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions.</a> Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+technique+for+lung+retransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Surgical technique for lung retransplantation in the mouse.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), Pt 1 64-69 (1983).</li>
<li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice%3A+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PLoS One. 8 (10), 77278(2013).</li>
<li>Miller, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+restoration+of+transplantation+tolerance+after+acute+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection.</a> Nature Communications. 6, 7566(2015).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Jagged-1+combined+with+blockade+of+CD40+pathway+prolongs+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival.</a> Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).</li>
<li>Xie, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+costimulation+blockade+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+alloantigen-primed+memory+T+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice.</a> Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+monoclonal+antibodies+with+DST+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+memory+T+cells+to+induce+long-lived+heart+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice.</a> Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).</li>
<li>Dai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+CD27%2FCD70+pathway+to+reduce+the+generation+of+memory+T+cells+and+markedly+prolong+the+survival+of+heart+allografts+in+presensitized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice.</a> Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonged+allograft+survival+by+arsenic+trioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide.</a> Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonging+allograft+survival+by+1alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D%283%29+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice.</a> Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+trioxide+is+a+novel+agent+for+combination+therapy+to+prolong+heart+allograft+survival+in+allo-primed+T+cells+transferred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice.</a> Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44%2FCD70+blockade+and+anti-CD154%2FLFA-1+treatment+synergistically+suppress+accelerated+rejection+and+prolong+cardiac+allograft+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+cervical+cuff+technique+for+rat-to-mouse+heterotopic+heart+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. , (2017).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Blanchard, J. M., Pollak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+perfusion+and+storage+of+heterotopic+heart+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice.</a> Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).</li>
<li>Felix, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H2-DMalpha%28-%2F-%29+mice+show+the+importance+of+major+histocompatibility+complex-bound+peptide+in+cardiac+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection.</a> Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).</li>
<li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Wang, K., Zhang, N., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+mouse+heterotopic+heart+graft+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation.</a> Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).</li>
<li>Plenter, R. J., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+heterotopic+heart+transplant+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine heterotopic heart transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), (2014).</li>
<li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907(2015).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).</li>
<li>Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submandibular+Gland-preserving+Technique+for+Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Transplantation. 102 (11), 464-465 (2018).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los modelos de trasplantes de corazón de ratón son herramientas importantes para la investigación de inmunología de trasplantes, ya que existen herramientas y materiales para evaluar los mecanismos inmunológicos de este modelo y un gran número de ratones modificados genéticamente. Sin embargo, los desafíos técnicos microquirúrgicos, como la sutura y la eversión de los buques, han limitado su uso generalizado. En el presente estudio, hemos investigado ciertos desafíos técnicos básicos del trasplante de corazón murino y he...

El establecimiento de un trasplante de corazón heterotópico de ratón a través de la anastomosis de extremo a extremo dentro del abdomen en 1973 fue un hito importante en la investigación básica de inmunología de trasplantes1. Este modelo proporcionó una herramienta importante y válida para analizar los mecanismos de la lesión por reperfusión de isquemia2,rechazo inmunológico, y tolerancia3,,4. Sin embargo, la naturaleza compleja y lenta de la cirugía, así como el potencial de infecciones pueden resultar en adherencias abdominales perioperatorias graves y reacciones inflamatorias, lo que resulta en una baja eficiencia para el modelo de trasplante de corazón heterotópico.
La técnica de trasplante de corazón heterotópico cervical fue descrita por primera vez por Chen en 19915. En este modelo, la vena yugular externa del receptor se anastomosa a la arteria pulmonar del injerto y la arteria carótida se anastomos a la aorta ascendente. Las principales ventajas de este método son la conveniencia de monitorear y reducir el traumatismo al receptor. En el mismo año, Matsuura describió una técnica mejorada, en la que el extremo de la vena yugular externa y la arteria carótida se disponen sobre un manguito de teflón y se fijaron con una ligadura de seda circunferencial6. Algunos investigadores también fijan el manguito a la arteria pulmonar derecha en el corazón del donante antes de insertar el manguito en la vena yugular externa del receptor7. Hasta ahora, la técnica del manguito se ha aplicado ampliamente en varios modelos de trasplante de pediculo vascular, incluyendo los de trasplante de pulmón8,hígado9y renal10.
Hasta la fecha, hay varias dificultades asociadas con la técnica del manguito. Por ejemplo, la arteria carótida es difícil de sobrepasar el manguito debido a la elasticidad adicional, lo que resulta en que el tejido se voltea hacia atrás. Por lo tanto, se puede requerir una práctica adicional y un dilatador microquirúrgico para completar este paso. Además, la preparación del vaso cervical puede tardar hasta 25 minutos.
Para resolver estos problemas, introducimos la técnica del tubo interno, que se basa en la técnica del manguito e incluye la fijación del manguito en la vena yugular externa y la arteria carótida utilizando un tubo interno para ayudar con la eversión de la pared del vaso. Además, con un entrenamiento sencillo, la preparación de los destinatarios se reduce a 15,5 minutos. Esta técnica reduce la complejidad de la operación y no requiere práctica adicional o el uso de un dilatador vascular. Se puede aplicar en todas las investigaciones inmunitarias de trasplante, especialmente para verificar la tolerancia inmune de terceros durante la cual el receptor recibe dos aloinjertos cardíacos, uno dentro del abdomen y el otro en el cuello11. También recomendamos la cooperación entre dos cirujanos calificados para establecer este modelo, con un cirujano preparando el animal receptor y el otro cosechando e implantando el corazón del donante. Dicha colaboración puede reducir el tiempo de operación a 25 minutos. Usando este procedimiento optimizado, hemos establecido modelos de trasplante de corazón de ratón singéneo, alogénico12,,,13, 14,,,1315,16,,,17,18,,19,y xenogéneoratón 20.
La razón para el desarrollo de la técnica del tubo interno fue reducir el tiempo de operación para el establecimiento de un modelo de trasplante de corazón de ratón con una alta tasa de éxito. La optimización del modelo de trasplante de corazón cervical facilita la adquisición de altas tasas de éxito en un corto período de tiempo de cirugía en comparación con la técnica tradicional de sutura y manguito21. Además, el modelo de cooperación puede reducir aún más el tiempo isquémico cálido del corazón del donante en comparación con las cirugías realizadas con un solo operador.

<table><tbody><tr><td>Manguito arterial</td> Tubo de poliamida <td>de fabricación</td><td></td> propia<td>. diámetro: 0,55 mm,longitud: 1,0 mm</td></tr><tr>Tubo interior de<td>arteria</td> Tubo de poliamida <td>de fabricación</td><td></td> propia<td>. Diámetro: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Pinzas microcurvas</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de Instrumentos Quirúrgicos</td><td>WA3050</td><td>1/8 de arco, punta de 0,3 mm sin gancho</td></tr><tr><td>Micro portaagujas</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de Instrumentos Quirúrgicos</td><td>WA2050</td><td>Punta de 0,2 mm</td></tr><tr><td>Micro tijeras</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de Instrumentos Quirúrgicos</td><td>WA1050</td><td>Recto, longitud de la hoja: 10 mm</td></tr><tr><td>Micro pinzas rectas</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Fábrica de instrumentos quirúrgicos</td><td>WA3060</td><td>Punta de 0,15 mm sin gancho</td></tr><tr><td>Scanlan Vascu-Statt Abrazaderas Bulldog</td><td>Scanlan International Inc</td><td>1001-531</td><td>Presión de sujeción 20&ndash; 25 gramos</td></tr><tr><td>Manguito de vena</td> Tubo de poliamida <td>de fabricación</td><td></td> propia<td>. diámetro: 0,9 mm, longitud: 1,2 mm</td></tr><tr>Tubo interior de<td>vena</td> Tubo de poliamida <td>de fabricación</td><td></td> propia<td>. Diámetro: 0,6 mm</td></tr></tbody></table>

optimización de la técnica del manguito para el trasplante cardíaco murino

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

El trasplante cardíaco murino se ha realizado durante más de 40 años. Con los avances en microcirugía, se han utilizado ciertas nuevas técnicas para mejorar la eficiencia quirúrgica. En nuestro laboratorio, hemos optimizado la técnica del manguito con dos pasos principales. En primer lugar, utilizamos la técnica del tubo interno para insertar un tubo interno temporal en la vena yugular externa y el vaso sanguíneo de la arteria carótida para facilitar la eversión del vaso sobre el manguito. En segundo lugar, realizamos un trasplante heterotópico completo a través de la colaboración de dos cirujanos experimentados. Estas modificaciones redujeron efectivamente el tiempo de operación a 25 minutos, con una tasa de éxito del 95%. En este informe, describimos estos procedimientos en detalle y proporcionamos un video complementario. Creemos que este informe sobre la técnica mejorada del manguito ofrecerá orientación práctica para el trasplante de corazón heterotópico murino y mejorará la utilidad de este modelo de ratón para la investigación básica.

Tiempo de operación quirúrgica
Después del entrenamiento, un cirujano experto puede realizar con éxito la operación dentro de los 35 minutos utilizando la técnica del tubo interno, en la que se requieren aproximadamente 15,5 minutos para la preparación del receptor, se requieren 10,9 minutos para la preparación del donante y 4,4 minutos para las anastomosas del corazón del donante. El tiempo de isquemia fría y caliente (desde la preparación del donante hasta la implantación de...

Introducimos un enfoque de tubo interno para la técnica del manguito para el trasplante de corazón heterotópico cervical del ratón para ayudar a mantener el vaso sobre el brazalete. Encontramos que la cooperación entre dos cirujanos experimentados acorta notablemente el tiempo de operación.

Optimización de la Técnica del Manguito para el Trasplante cardíaco murino

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Hola a todos. Mi nombre es Dr.Zhongquan Qi.Es ampliamente conocido que la técnica del manguito se ha utilizado como trasplante cardíaco desde 1991. Aunque ha habido grandes avances en la cirugía médica y la nueva técnica quirúrgica, todavía hay algunas dificultades basadas en la técnica del manguito.Es una forma de revelación, donde te mostrarán una técnica de mitad optimista, que puede ser significativamente igual a la eficiencia quirúrgica. Los procedimientos principales son insertar un tubo temporalmente en ese tubo en la visera. Prueba de leer la ISO casi la mitad.Inserción de la técnica del tubo. Un cirujano experto puede realizar la operación en 35 minutos con una tasa de éxito del 95%. Luego pueden emplear el Módulo de Operación del Cirujano Térmico, que mejora aún más la eficiencia de la operación que se muestra en el skeptimic y el tiempo de operación se acortará a unos 35 minutos.Gracias. Y eso es lo que une la receta y las millas con pentobarbital. Usa cortadoras mecánicas atraumáticas para quitar el cabello en la región cervical derecha.Utilice un aplicador de punta de algodón estéril para limpiar el área quirúrgica con antiséptico de yodo seguido de 70% de etanol. Coloque el ratón en la posición supina en la plataforma de operación. Cubra el ratón con gasa estéril.Utilice una tijera oftálmica para hacer una incisión transversal desde la línea inferior de un tercio de NACMEC hasta la articulación de la clavícula del hombro derecho. Aísle la vena jungular externa derecha con micro pinzas curvadas para exponer suficiente longitud. Corte los brunchs mediante electro coagulación.Y localiza la nave en el disto y usando una sutura de seis 2 0 seis. Sujete la vena junglar externa proximally con una abrazadera de polvo. Y luego traducir la vena aproximadamente a la ligadura usando una micro tijera.Lavar el lumen del vaso con 100 unidades por mililitro 02 cuatro grados Celsius heparina saliente para eliminar cualquier sangre residual. Tire de la vena junglar externa a través de la vena cava utilizando micro fórceps rectos. Inserte el tubo interno de la vena en el lumen como un stent y sobre la pared del recipiente sobre la curva con micro fórceps rectos.Fijar el irritante Faso endotelio en el extremo proximal de la curva utilizando una sutura circunferencial de ocho a 06. Utilice micro fórceps rectos para extraer el tubo interno de la vena del vena vaso. Realizar disección contundente con micro fórceps para aislar la arteria carótida derecha, adyacente al borde interno del esternocleidomastoideo.Sujete la arteria carótida derecha proximally con una abrazadera de babcock. Localice la arteria carótida distalmente usando una sutura de seis a 06. Y usa una micro tijera para realizar la arteria carótida proximally a la ligadura.Lavar la arteria carótida con 100 unidades por mililitro 02 cuatro Celsius heparina salin saliente para eliminar cualquier sangre residual. Pase la arteria carótida a través de la curva arterial e inserte el tubo interno de la arteria en el vaso arterial utilizando micro fórceps rectos. Apunte al recipiente sobre la curva utilizando micro fórceps rectos.Fijar el endotelio de fax invertido usando una sutura circunferencial de ocho a 06. Retire la punta interna de la arteria del vaso de la arteria con micro fórceps rectos. La anestesia y su infección son las mismas que las del receptor.Haga una incisión de línea media abdominal con una tijera oftálmica y exponga la cavidad abdominal. Utilice fórceps microcurar para exponer la vena cava inferior. Y luego inyectar por vía intravenosa 200 microlitro de 100 unidades por mililitro 02 cuatro grados Celsius heparina salinada por 20 gramos de peso corporal a través de la vena cava inferior.Realizar toracotomía con tijeras oftálmicas. Corte las costillas a través de las paletas incisiones de luz axilar Romita. Flav la pared anterior del pecho hacia afuera para exponer la cavidad torácica.Excise el timo con micro fórceps. Exponga la aorta y luego profusa 200 microlitro de 100 unidades por mililitro 02 cuatro grados Celsius heparina saliente a la arteria coronaria a través del arco aórtico. Utilice una micro tijera para transeccular la aorta ascendente al principio del arco aórtico.Transecta la arteria pulmonar al principio de las dos ramas principales con una micro tijera. Localiza la vena cava superior y la vena cava inferior aproximadamente usando una sutura de seis a 02 y usa una micro tijera para transeccar el venado destilado a la ligadura. Localice las venas pulmonares juntas circunferencialmente usando una sola seis, a 06 sutura y corte las ramas de la vena distalmente a la ligadura usando una micro tijera.Retire el injerto cardíaco de los tejidos blandos circundantes. Coloque el corazón del donante boca abajo en la región del cuello derecho del receptor. Introduzca la arteria pulmonar del corazón del donante en un bucle de seis a 06 con micro fórceps rectos.Envuelva el lumen del recipiente alrededor de la vena cava y luego apriete el bucle de sutura de seis a 06 alrededor de la pantorrilla para doblar la junta del recipiente. Realizar anastomosis de la aorta del injerto y la curva arterial. Suelte la vena yugular agluentada seguida de la arteria yugular aulada.Mantenga el vaso unido y retorcido y asegúrese de que el flujo sanguíneo no esté obstruido. Establezca el injerto cardíaco que pasa en el espacio subcutáneo y luego sutura la incisión. Registre el tiempo al ritmo sinusal normal y la preservación del ritmo sinusal normal durante al menos cinco minutos después de la liberación de la abrazadera para monitorear la función del injerto postoperatorio.Coloque el recipiente solo en una manta hasta que el receptor se despierte de la anestesia. Tomados en conjunto, aunque nuestra cirugía utiliza técnicas de manguito que se han reportado, establecimos la técnica del núcleo interno basado en esto. Reducir la dificultad en la cirugía y acortar el tiempo de anastomosis mediante la técnica de optimización.Sugerimos el lema de incorporación de doble cirugía para mejorar aún más la eficiencia de la operación mostrada en el esquema. Y el tiempo de operación se acortará a unos 25 minutos. Un corazón de aloinjerto BALBC sin igual de MHC puede rechazarse con ocho días después del trasplante en ratones receptores C57BL6.Los trasplantes de corazón singenéricos utilizados en nuestra investigación sobrevivieron más de 100 días, excepto un caso raro debido a una pérdida de peso del 15% en comparación con el peso normal antes de la operación. La histopatología del aloinjerto en el día siete reveló características típicas de rechazo agudo, incluyendo un infiltrado celular pesado con necrosis tisular. Los injertos singélicos son casi normales sin evidencia de necrosis de miocitos o infiltración de células inflamatorias.100 días después del trasplante de corazón singenético, el endotelio vascular del sitio de anastomosis se puede recoger y teñir por inmunofluorescente. En este análisis, no se observó ningún atrapamiento averso de la pared vascular, trombosis o engrosamiento de la intimidad. Las imágenes electro microscópicas revelaron que un endotelio liso y una formación regular de corteza longitudinal con las células endoteliales dispuestas de manera ordenada y cercana sin sedimentos obvios en la superficie.

optimization-of-the-cuff-technique-for-murine-heart-transplantation

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

El modelo de trasplante de corazón murino de cuello uterino es muy adecuado para inmunológica así como estudios de la lesión de reperfusión de isquemia. Hemos modificado el procedimiento utilizando una técnica de manguito no sutura y realizado más de 1.000 trasplantes de éxito con este enfoque.  En esto, proporcionamos detalles adicionales de esta técnica para complementar el vídeo.

Murino Cervical Trasplante Cardiaco Modelo Usando una técnica de Cuff Modificado

El manuscrito describe los pasos necesarios para llevar a cabo el trasplante cardíaco heterotópico en el ratón.

Murino heterotópico Corazón Trasplante Técnica

La técnica del manguito acorta y facilita el modelo de trasplante de corazón cervical heterotópico en ratones al evitar anastomosis de sutura técnicamente desafiantes de vasos pequeños. Los detalles técnicos mostrados en este video artículo deberían permitir a los investigadores establecer este modelo en sus laboratorios.

Heterotópico cervical trasplante cardiaco en ratones

Aquí, presentamos un protocolo de trasplante aórtico heterotópico en ratones utilizando la técnica del manguito no sutura en un modelo de murina cervical. Este modelo se puede utilizar para estudiar la patología subyacente de la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) y puede ayudar a evaluar nuevos agentes terapéuticos para prevenir su formación.

Modelo de trasplante de aórtica cervical murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada

En el presente protocolo, se utiliza un modelo de trasplante cardíaco de ratón para investigar el mecanismo del rechazo del aloinjerto cardíaco. En este modelo heterotópico de trasplante cardíaco, se mejora la eficiencia de la operación y la supervivencia de los injertos cardíacos se garantiza mediante una anastomosis cervical de extremo a extremo de la implantación cardíaca utilizando una técnica de manguito modificado.

Una técnica de manguito modificado para el modelo de trasplante cardíaco heterotópico cervical de ratón

Los modelos de trasplante cardíaco de ratón representan valiosas herramientas de investigación para estudiar la inmunología del trasplante. El presente protocolo detalla el trasplante cardíaco cervical heterotópico de ratón que implica la colocación de manguitos en la arteria carótida común del receptor y el tronco de la arteria pulmonar del donante para permitir el flujo sanguíneo laminar.

Trasplante cardíaco cervical heterotópico de ratón utilizando manguitos vasculares

Este protocolo proporciona información técnica para la reconstrucción de vasos mediante la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón.

Reconstrucción vascular con la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón

Este protocolo presenta una técnica de trasplante cardíaco heterotópico cervical sin manguito y basada en sutura, diseñada para permitir la colocación fiable de un segundo injerto cardíaco heterotópico para evaluar la tolerancia inmunitaria específica del donante bajo condiciones fisiológicas con mínima interferencia de material extraño.

Modelo cervical basado en suturas sin manguito para trasplante cardíaco heterotópico secundario con el fin de evaluar la tolerancia inmunitaria específica del donante en ratones

Este protocolo presenta una técnica simplificada de anastosis de sutura extremo a lado para el trasplante de corazón cervical murino, proporcionando un modelo robusto y reproducible para estudiar la inmunología de trasplantes.

Trasplante cardíaco heterotópico de ratón cervical utilizando la técnica de anastomosis de extremo a lado para estudiar la inmunología del trasplante

En este video, que demuestre el procedimiento de activación CD40-y la expansión de las células B murinas a partir de esplenocitos de ratones C57BL / 6, que puede ser utilizado como un modelo de célula presentadora de antígeno (APC) para estudiar la inducción de la inmunidad.

Modelo murino de CD40-activación de las células B

Aprende la técnica del manguito optimizada con tubo interno para trasplante cardíaco heterotópico cervical en ratones. Este método mejora la eficiencia quirúrgica y reduce el tiempo de operación mediante la eversión vascular guiada.

Optimización de la Técnica del Manguito para el Trasplante cardíaco murino

Explorar más videos