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DOI: 10.3791/61171-v
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This study presents a protocol for genetic manipulation in the embryonic ferret brain using in utero electroporation. The method focuses on targeting neural progenitor cells in vivo within the developing neocortex, providing insights into brain development mechanisms.
Aquí se presenta un protocolo para realizar la manipulación genética en el cerebro de hurón embrionario utilizando en la electroporación del útero. Este método permite la focalización de células progenitoras neuronales en el neocórtex in vivo.
Este protocolo nos permite realizar una manipulación genética in vivo en un modelo animal clave que nos permite estudiar la expansión y plegado de un neocórtex en desarrollo. La principal ventaja de este método es el uso de alta especificidad espacial y temporal en la orientación de las células madre neurales que son el tipo de célula clave para el desarrollo cerebral. Antes de comenzar el procedimiento, tire de los capilares de vidrio en un tirador de micro pipetas y utilice fórceps para cortar la parte distal del capilar para ajustar el diámetro de la punta capilar.
En el día embrionario 33, agregue la concentración adecuada de ADN en PBS, complementada con 0.1%Fast Green con mezcla suave, y coloque un hurón hembra embarazada, anestesiado, de 3 horas de ayuno en una mesa de operación con una almohadilla térmica. Confirme el nivel adecuado de sedación tocando la piel periocular y pellizcando la piel entre el segundo y el tercero o el tercer y el cuarto dedo de ambas extremidades posteriores. El isoflurano puede causar efectos adversos, como náuseas y mareos.
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