Name: Inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Aprende a inyectar andamios de hidrogel en modelos de ictus isquémico en roedores usando el modelo fototrombótico. Este método permite estudiar la regeneración tisular y la recuperación motora tras el accidente cerebrovascular.

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Nos gusta reconocer a los Institutos Nacionales de Salud y al Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares por su financiación (R01NS079691).

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Los autores declaran que TS es fundador de Tempo Therapeutics, que busca comercializar hidrogeles MAP.

Aquí demostramos un modelo de accidente cerebrovascular permanente fácilmente reproducible, mínimamente invasivo y describimos cómo inyectar un biomaterial en el infarto cinco días después del accidente cerebrovascular. El uso del tinte fototrombótico Rose Bengal y un láser colimado de 520 nm conectado al dispositivo estereotáxico nos da la capacidad de posicionar el trazo en la corteza motora del ratón con mayor precisión. Cinco días después del accidente cerebrovascular, la ubicación del infarto es visible a simple vis...

El accidente cerebrovascular es la principal causa de discapacidad y la quinta causa principal de muerte en los Estados Unidos1. Aproximadamente el 87% de todos los accidentes cerebrovasculares son isquémicos, mientras que la mayoría del 13% restante son hemorrágicos2. Un accidente cerebrovascular isquémico se define como el bloqueo del flujo sanguíneo en una arteria al tejido circundante. Esta oclusión resulta en la privación de oxígeno y la necrosis posterior que a menudo conduce a la discapacidad permanente en los pacientes sobrevivientes. Si bien ha habido una disminución en la tasa de mortalidad del accidente cerebrovascular3,se espera que su prevalencia aumente a 3,4 millones de personas para 20304. Este aumento en los sobrevivientes discapacitados y la consiguiente carga económica ha llevado a un impulso para la investigación del accidente cerebrovascular que se centra en los mecanismos de reparación neuronal. Después del accidente cerebrovascular hay un período inflamatorio que conduce a la formación de una cicatriz que impide que la región necrótica se expanda. La región que rodea el núcleo necrótico se denomina "peri-infarto" y hay una fuerte evidencia de que la plasticidad en esta región, que incluye el aumento de la angiogénesis, la neurogénesis y la brotación axonal, está directamente relacionada con la recuperación observada en modelos animales y humanos5. Dado que no hay modelos in vitro que puedan replicar adecuadamente las interacciones complejas después del accidente cerebrovascular, los modelos animales son esenciales para la investigación del accidente cerebrovascular.
Hay varios modelos in vivo que se pueden utilizar para producir accidente cerebrovascular isquémico. Uno de los modelos más comunes utilizados en ratones es la oclusión de la arteria cerebral media, o MCAo, a través de la oclusión distal o proximal (a través del filamento intraarterial). El modelo proximal, también conocido como filamento MCAo (fMCAo), generalmente resulta en grandes accidentes cerebrovasculares isquémicos que abarcan entre el 5% y el 50% del hemisferio cerebral, dependiendo del número de factores6. En estos modelos, una sutura o filamento se avanza desde la arteria carótida interna hasta la base de la arteria cerebral media (MCA) y se mantiene en su lugar durante un período de tiempo específico. Este método de oclusión, que puede hacerse temporal o permanente, produce un infarto que se centra en el cuerpo estriado y puede o no implicar la corteza suprayacente6. El tamaño del accidente cerebrovascular resultante es muy variable, y se requieren técnicas de imagen, como el doppler láser, para confirmar la efectividad del procedimiento en cada ratón. La oclusión del filamento intraarterial o intraluminal que dura más de 30 minutos produce accidentes cerebrovasculares en el extremo más grande del rango de tamaño. Algunos investigadores se han centrado en tiempos de oclusión de filamentos más cortos, que requieren un enfoque experimental sustancial y validación de laboratorio7. Los modelos de MCAo de filamento en ratones siguen etapas similares de muerte celular, progresión isquémica y formación de una región periinfarto como se ve en los casos de accidente cerebrovascular humano; sin embargo, los accidentes cerebrovasculares más grandes se parecen más al estado de enfermedad de los infartos cerebrales malignos, que son menos comunes, menos tratables accidentes cerebrovasculares humanos6. Mientras tanto, la oclusión distal de MCA requiere una cirugía y una craniectomía más involucradas. En este modelo, la parte distal del MCA que corre a lo largo de la superficie del cerebro se ocluye directamente con una atadura de sutura o cauterización. En algunas variaciones de la técnica, las arterias carótidas se ocluyen unilateral o transitoriamente-bilateralmente. Un beneficio del MCAo distal es que produce un trazo basado en cortical que es menos variable en tamaño que el modelo de filamento. Sin embargo, el modelo distal produce una producción conductual más pobre debido a la transección de la arteria carótida externa (ECA), que también es una preocupación con fMCAo6.
Un modelo alternativo de accidente cerebrovascular que es conocido por ser menos invasivo es el modelo fototrombótico (PT). El modelo de PT da como resultado una localización bien definida de la isquemia y se asocia con una alta tasa de supervivencia8. La técnica se basa en un tinte fotosensible inyectado por vía intraperitoneal que permite la fotooxidación intravascular simplemente irradiando el tejido deseado con una luz o láser9. Tras la excitación, se forman radicales de oxígeno que causan daño endotelial, lo que activa la agregación plaquetaria y la formación de coágulos en el área irradiada8,9. El estricto control sobre el tamaño y la ubicación del trazo, así como la alta reproducibilidad del modelo PT, lo hacen ideal para estudiar biomateriales. Si bien la precisión es posible utilizando un láser y coordenadas estereotáxicas, hay algunas desventajas que pueden hacer que este modelo sea menos ideal para pocos estudios. A diferencia del modelo fMCAo, el modelo de carrera PT no se puede volver a perfundir. Por lo tanto, los materiales para investigar los agentes neuroprotectores específicos de los daños después de la reperfusión o los mecanismos posteriores a la reperfusión no serían útiles aquí8. Además, debido al insulto microvascular del modelo PT, se observa penumbra isquémica relativamente pequeña. En cambio, se produce edema vasogénico local, que no es característico del accidente cerebrovascular humano, lo que hace que este modelo sea indeseable para los estudios farmacológicos preclínicos centrados en el área del periinfarto6,8.
El objetivo general de las estrategias de biomateriales en el accidente cerebrovascular es administrar agentes bioactivos o actuar como una matriz extracelular sustituta para el crecimiento del tejido cerebral. Una estrategia que exploraremos utilizando nuestros métodos es administrar hidrogel directamente en el núcleo del accidente cerebrovascular, a diferencia del tejido periinfarto donde se administran muchas terapias celulares actuales10. La justificación de este enfoque es que la entrega en el tejido necrótico que se encuentra en el núcleo evitará interrumpir el tejido sano circundante o en recuperación. Suponemos que la difusión de cualquier agente activo incluido dentro del biomaterial podrá alcanzar el peri-infarto desde el núcleo, especialmente porque encontramos que la entrega de biomateriales de hidrogel reduce el grosor de la cicatriz glial11. Esto es importante ya que se ha demostrado que la región periinfarto exhibe neuroplasticidad después del accidente cerebrovascular, lo que la convierte en un objetivo atractivo. Además, la entrega de una matriz sustituta al núcleo del accidente cerebrovascular se puede cargar con12 factores angiogénicos o13 neurogénicos para guiar la formación de tejido nuevo, así como células para el parto14. La entrega celular se mejora en gran medida mediante el uso de una matriz porque protege a las células de las fuerzas de inyección severas y el entorno local presente durante la entrega, así como fomenta la diferenciación y el injerto15.
Estos biomateriales terapéuticos inyectables tienen relevancia clínica en aplicaciones de accidente cerebrovascular, ya que actualmente no existen terapias médicas que estimulen la recuperación neuronal después del accidente cerebrovascular. Los circuitos neuronales subyacentes involucrados en la recuperación se encuentran en el tejido cerebral que está adyacente al núcleo del accidente cerebrovascular16,mientras que el núcleo del accidente cerebrovascular en sí está desprovisto de tejido neural viable. Anticipamos que la entrega de un biomaterial en el núcleo del accidente cerebrovascular necrótico tiene el potencial de estimular el tejido adyacente hacia procesos regenerativos a través de una serie de mecanismos mencionados anteriormente, incluida la liberación de factores de crecimiento de depósito13,la estimulación del crecimiento del tejido y la promoción del desarrollo del tejido cerebral en recuperación11,12, la alteración de las respuestas inmunes17y la entrega de terapias derivadas de células madre14, 18. Sin embargo, para estudiar eficazmente la posibilidad de estas aplicaciones, se necesita un método consistente y reproducible para inducir el accidente cerebrovascular e inyectar biomateriales. El modelo de trazo PT utiliza técnicas que ofrecen un control preciso sobre la orientación y la ubicación del trazo. Un láser conectado al dispositivo estereotáxico guía las orientaciones, y las bombas conectadas a los dispositivos estereotáxicos controlan la velocidad de inyección del material sin la necesidad de formas adicionales de imágenes. Por lo tanto, hemos optado por describir los métodos para realizar un accidente cerebrovascular PT en las cortezas motoras de ratones y para inyectar biomateriales en el núcleo del accidente cerebrovascular. Aquí, utilizamos hidrogeles de partículas recocidas microporosas (MAP) como biomaterial para inyección sin células añadidas ni factores de crecimiento. Además, explicamos cómo recuperar con éxito el cerebro con biomaterial intacto, y discutimos los ensayos de inmunoquímica utilizados para analizar el resultado del accidente cerebrovascular con y sin inyección de biomateriales.

<table><tbody><tr><td>Suero de cabra normal al 10%</td><td>VWR</td><td>100504-028</td><td>Para tampón de bloqueo</td></tr><tr><td>Almohadilla de pre con alcohol de 2 capas, estéril, medio</td><td>Medline</td><td>MDS090735</td><td></td></tr><tr><td>25 uL Jeringa Hamilton 702RN, sin aguja</td><td>Fishcer Scientific</td><td>14824663</td><td>Jeringas utilizadas para inyectar biomateriales</td></tr><tr><td>25 uL Pipeta de desplazamiento positivo</td><td>Gilson</td><td>M-25</td><td></td></tr><tr><td>2x Expansor de haz, 400-650nm</td><td>Thorlabs</td><td>GBE02-A</td><td>Expansor de rayo láser</td></tr><tr><td>Plataforma de escenario ajustable</td><td>Kopf Instruments</td><td>901</td><td></td></tr><tr><td>Transportador de glucosa GLUT1 anticuerpo, conejo</td><td>Abcam</td><td>ab113435</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-Iba1, cabra</td><td>abcam</td><td>ab5076</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Safety-Lok Sets de recolección de sangre. 25G, 12 "</td><td>Medsupply</td><td>367294</td><td>para perfusiones</td></tr><tr><td>BKF12- Papel de aluminio negro mate</td><td>Thorlabs</td><td>BKF12</td><td>Para cubrir cualquier cosa que sea reflectante cuando se usa láser.</td></tr><tr><td>Mini tijeras de iris de hueso - Instrumentos quirúrgicos</td> <td>Sklar</td> de 3-1/2" <td>64-2035</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 Ratones</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>8-12 semanas de edad</td></tr><tr><td>Montaje de jaula Rob</td><td>Thorlabs</td><td>ER3-P4</td><td>3" de largo, diámetro 6 mm, paquete de 4 - para conectar el láser a la esterotaxis</td></tr><tr><td>Rebabas de acero al carbono -0,5 mm de diámetro</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>19007-05</td><td>Para crear un agujero de rebaba</td></tr><tr><td>Sulfato de cromo (III) y potasio dodecahidratado</td><td>VWR</td><td>EM1.01036.0250</td><td></td></tr><tr><td>Controlador compacto para láseres de cola</td><td>flexible Thorlabs</td><td>CLD1010LP</td><td></td></tr><tr><td>bastoncillos de algodón</td><td>VWR</td><td>89031-288</td><td></td></tr><tr><td>CP 25 Puntas de pipeta</td><td>Gilson</td><td>F148012</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-cabra IgG H& L (488)</td><td>abcam</td><td>ab150129</td><td></td></tr><tr><td>Burro Anti-conejo IgG H& L (647)</td><td>abcam</td><td>ab150075</td><td></td></tr><tr><td>Burro Anti-ratas IgG H& L (555)</td><td>abcam</td><td>ab150154</td><td></td></tr><tr><td>EMS DPX Mountant</td><td>Electroron Microscopy Sciences</td><td>13512</td><td>Solución de montaje para portaobjetos</td></tr><tr><td>EMS Gelatina en polvo tipo A 300 Bloom</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>16564</td><td>Para portaobjetos de recubrimiento de gelatina</td></tr><tr><td>EMS Paraformaldehído, granular</td><td>VWR</td><td>100504-162</td><td>Para la fabricación de 45 PFA</td></tr><tr><td>ESD Worstation kit</td><td>Elmstat</td><td>WSKK5324SB</td><td>Necesidad de configurar el láser</td></tr><tr><td>Placa de pared de banco de fibra, sin rosca</td><td>Thorlabs</td><td>HCA3</td><td>Necesidad de conectar el láser al eje Kopf</td></tr><tr><td>FiberPort</td><td>Thorlabs</td><td>PAF-X-5-A</td><td>FC / APC & APC, f=4,6 mm, 350-700 nm, diámetro 0,75 mm</td></tr><tr><td>Tijeras finas: rectas/afiladas-romas/10 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo GFAP, rata</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td></td></tr><tr><td>Placa calefactora</td><td>Kopf Instruments</td><td>HP-4M</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge Bolígrafo de barrera hidrofóbica</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td>Para tintear portaobjetos</td></tr><tr><td>Centro de Anestesia Multipaciente IMPAC 6-Integrado</td><td>VetEquip</td><td>901808</td><td></td></tr><tr><td>Almohadillas de preparación de yodo</td><td>Medx Supple</td><td>MED MDS093917H</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de Joyería #5</td><td>GFS chemicals</td><td>46085</td><td></td></tr><tr><td>Gafas de seguridad láser</td><td>Thorlabs</td><td>LG10B</td><td>Lentes ámbar, 35% de luz visible (también hay versiones de google)</td></tr><tr><td>M27-1084 Potente LED Doble Cuello de Cisne</td><td>United Scope</td><td>LED-11C</td><td></td></tr><tr><td>Médico Grado USP Oxígeno Airgas</td><td></td><td>OX USP250</td><td></td></tr><tr><td>Miltex Adson Pinzas de apósito, grado de disección</td><td>Intefra Miltex</td><td>V96-118</td><td></td></tr><tr><td>Mini Cord/Inalámbrico Recortadora de Pequeños Animales Harvard</td><td>Aparatus</td><td>72-6110</td><td></td></tr><tr><td>Mini-bomba de caudal variable</td><td>Thomas Scientific</td><td>70730-064</td><td>Bomba para perfusiones</td></tr><tr><td>Cerebro de ratón Matrices, cortes coronales, 1 mm</td><td>Kent Scientific</td><td>RBMA-200c</td><td>para cortes de TTC</td></tr><tr><td>Soporte de cabeza de anestesia de gas</td><td>de ratón Kopf Instruments</td><td>923-B</td><td></td></tr><tr><td>Nanojet Caja de control</td><td>Chemyx</td><td>10050</td><td></td></tr><tr><td>Nanojet</td><td>cabezal de bomba Chemxy</td><td>10051</td><td>Acoplar a dispositivo estereotáxico para inyectar biomaterial</td></tr><tr><td>Aguja RN 30G PT STY 3, 0,5 pulgadas</td><td>Fishcer Scientific</td><td></td><td></td>NC9459562</tr><tr><td>Barras para los oídos que no se rompen 60&ordm;</td><td>Tampón Kopf Instruments</td><td>922</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>VWR</td><td>97062 338</td><td></td></tr><tr><td>Láser pigtalado 520 nm, 100mW, pin 5G</td><td>Thorlabs</td><td>LP520-MF100</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de vidrio con carga positiva</td><td>Hareta</td><td>AHS90-WH</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de energía</td><td>Thorlabs</td><td>PM100D</td><td>Se utiliza para medir la salida del láser de mW</td></tr><tr><td>Puralube Vet Pomada</td><td>Dr. Foster Smith</td><td>9N-76855</td><td></td></tr><tr><td>Sonda rectal Ratón</td><td>kopf Instruments</td><td>Ret-3-ISO</td><td></td></tr><tr><td>Rose Bengal Dye 95%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330000-5G</td><td></td></tr><tr><td>Eje modificado 8-32 orificio roscado 1/2" de profundidad</td><td>Kopf Instruments</td><td>1770-02</td><td>Para conectar el láser al dispositivo estereotáxico</td></tr><tr><td>Sensor de potencia de fotodiodo delgado</td><td>Thorlabs</td><td>S130VC</td><td>Utilizado con energía de potencia metro</td></tr><tr><td>SM1-Threaed 30 mm Placa de jaula de 0,35" de espesor 2</td><td>Thorlabs</td><td>de retención CP02</td><td>Para conectar expansor láser</td></tr><tr><td>Sol-M U-100 Jeringa de insulina con marcas de 1/2 unidad 0,5 mL</td><td>VWR</td><td>10002-726</td><td>Para inyectar rosa bengala</td></tr><tr><td>StainTray Sistema de tinción de portaobjetos</td><td>Simport Scientific</td><td>M920-2</td><td>Para tintar portaobjetos</td></tr><tr><td>Dispositivo esterotáxico</td><td>Kopf Instruments</td><td>940</td><td>Instrumento estereotáxico para animales pequeños</td></tr><tr><td>Pinza Adson para estudiantes -1x2 dientes</td><td>Fine Science Tools</td><td>91127-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas para estudiantes - vástagos rectos/anchos</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de temperatura</td><td>Kopf Instruments</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT compuesto</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97063-864</td><td></td></tr><tr><td>Abrazadera de soporte superior</td><td>Kopf Instruments</td><td>1770-c</td><td>Para conectar el láser al dispositivo esterotáxico</td></tr><tr><td>Vetbond Tissue Adhessive 3mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-361931</td><td></td></tr><tr><td>Vogue Professional My Manicurist</td><td>Bargin Source</td><td>6400</td><td>Para Fresas</td></tr><tr><td>VWR Esterilizadores de perlas</td><td>VWR VWR</td><td>75999-328</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Tek OCT compuesto</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Para la inclusión de tejidos</td></tr></tbody></table>

inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular

Injection of Hydrogel Biomaterial Scaffolds to The Brain After Stroke

El accidente cerebrovascular es la principal causa de discapacidad y la quinta causa principal de muerte en los Estados Unidos. Aproximadamente el 87% de todos los accidentes cerebrovasculares son accidentes cerebrovasculares isquémicos y se definen como el bloqueo repentino de un vaso que suministra sangre al cerebro. A los pocos minutos de la obstrucción, las células comienzan a morir y resultan en daños irreparables en los tejidos. Los tratamientos terapéuticos actuales se centran en la eliminación de coágulos o lisis para permitir la reperfusión y prevenir daños cerebrales más graves. Aunque la plasticidad cerebral transitoria puede salvar parte del tejido dañado con el tiempo, fracciones significativas de pacientes quedan con déficits neurológicos que nunca se resolverán. Existe una falta de opciones terapéuticas para tratar los déficits neurológicos causados por el accidente cerebrovascular, lo que enfatiza la necesidad de desarrollar nuevas estrategias para tratar a esta creciente población de pacientes. Los biomateriales inyectables se están diseñando actualmente para mejorar la plasticidad cerebral y mejorar la reparación endógena a través de la administración de agentes activos o células madre. Un método para probar estos enfoques es utilizar un modelo de accidente cerebrovascular de roedor, inyectar el biomaterial en el núcleo del accidente cerebrovascular y evaluar la reparación. Conocer la ubicación precisa del núcleo del accidente cerebrovascular es imperativo para el tratamiento preciso después del accidente cerebrovascular, por lo tanto, es preferible un modelo de accidente cerebrovascular que resulte en una ubicación predecible del accidente cerebrovascular para evitar la necesidad de imágenes antes de la inyección. El siguiente protocolo cubrirá cómo inducir un accidente cerebrovascular fototrombótico, cómo inyectar un hidrogel de manera controlada y precisa, y cómo extraer y crioseccionar el cerebro mientras se mantiene intacto el biomaterial. Además, destacaremos cómo estos mismos materiales de hidrogel se pueden utilizar para la co-entrega de células madre. Este protocolo se puede generalizar al uso de otros biomateriales inyectables en el núcleo del accidente cerebrovascular.

El objetivo de este método era demostrar cómo inyectar biomateriales en el cerebro después de un accidente cerebrovascular. Se utilizó un modelo fototrombótico con rosa de bengala y un láser de 520 nm para la orientación controlada de la lesión del accidente cerebrovascular tanto en tamaño como en ubicación. Cinco días después del accidente cerebrovascular, el infarto se pudo visualizar durante la cirugía(Figura 1B)y mediante TTC e imágenes de diapositivas teñidas de IHC...

El accidente cerebrovascular es un problema global con opciones de tratamiento mínimas y sin terapia clínica actual para regenerar el tejido cerebral perdido. Aquí describimos métodos para crear un accidente cerebrovascular fototrombótico preciso en la corteza motora de roedores y la posterior inyección de biomateriales de hidrogel para estudiar sus efectos sobre la regeneración de tejidos después del accidente cerebrovascular.

Inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular

Stroke is the leading cause of disability and the fifth-leading cause of death in the United States. Approximately 87% of all strokes are ischemic strokes ...

La inyección reproducible de andamios de hidrogel en un modelo de accidente cerebrovascular isquémico de roedores permite estudiar cómo los materiales y otras terapias afectan la reparación del cerebro, la regeneración y la mejora del comportamiento. Las principales ventajas de utilizar el modelo de accidente cerebrovascular fototrombótico para estudiar las interacciones entre el material cerebral son la ubicación y el tamaño reproducibles. Que permiten la inyección de materiales en el núcleo de carrera sin necesidad de imágenes.El modelo de accidente cerebrovascular fototrombótico está diseñado para ser un modelo relevante para el accidente cerebrovascular isquémico, en una región del cerebro, la corteza motora, que se ve comúnmente afectada por el accidente cerebrovascular en los seres humanos. Y para proporcionar una lectura conductual relevante para el accidente cerebrovascular, que es el control motor de la extremidad. Con el fin de evaluar un candidato terapéutico, como un hidrogel biopolímero.Confirmar una falta de respuesta al pellizco del dedo del pie en un ratón anestesiado. A continuación, pesa el ratón para determinar la cantidad de tinte de bengala rosa que debes inyec

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Fuente: Wilson, K.L., et al. Inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular.  J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la inyección estereotáxica de un hidrogel en el núcleo del accidente cerebrovascular de un ratón después de un accidente cerebrovascular, destacando su papel en la formación de andamios que imitan la matriz extracelular, promueven la infiltración celular y apoyan la angiogénesis, lo que subraya su potencial neuroterapéutico...

Inyección estereotáctica de hidrogel en un modelo de ratón posterior a un accidente cerebrovascular

Matrices de fibrina que contienen factores de crecimiento se utilizaron para conservar las células madre neurales injertadas en los sitios de la transección completa de la médula espinal. Células injertadas llenaron completamente la cavidad de la lesión y diferenciarse en múltiples tipos de células neuronales, incluyendo las neuronas que se extendían axones en la médula espinal de acogida a través de largas distancias.

Promoción de la supervivencia y la diferenciación de células madre neurales con fibrina y factor de crecimiento cócteles después de la médula espinal severa lesión

Este protocolo tiene como objetivo aliviar la limitación del injerto celular deficiente para el tratamiento con células madre de infartos de miocardio mediante el uso de un sistema de hidrogel y un pegamento a base de fibrina. Con este enfoque, se puede mantener el contacto célula con tejido después del infarto, aumentando el potencial terapéutico de los agentes beneficiosos en el sitio de la lesión.

Un hidrogel Construct y fibrina enfoque basado Pegamento para ofrecer Terapéutica en un infarto de miocardio modelo murino.

Con el fin de estudiar la reorganización del cerebro en condiciones patológicas, utilizamos bombas miniosmóticas para la entrega directa de proteínas al cerebro, eludiendo la barrera hematoencefálica. A continuación, se inyectan trazadores del tracto para estudiar las alteraciones en la conectividad cerebral bajo la influencia de la proteína.

Implantación de miniosmótica Bombas y Entrega de Trazadores del Tracto para estudiar la reorganización del cerebro en condiciones fisiopatológicas

Nos muestra el desarrollo de los paquetes uno mismo-montado, tridimensionales de somata astrocytic longitudinalmente alineado y procesos dentro de un protector nuevo biomaterial. Estos diseñados "andamios de vida", que diámetro de la escala del micrón pero extiende centímetros de longitud, puede servir como bancos de pruebas para estudiar los mecanismos del desarrollo neurológico o facilitar la Neurorregeneración por dirige la migración neuronal y axonal pathfinding.

Ingeniería tisular tridimensional alineado astrositos redes para recapitular los mecanismos del desarrollo y facilitar la regeneración del sistema nervioso

Adjunto, presentamos un protocolo para el cultivo 3D de rata células glia derivado del cerebro, incluyendo astrocitos, microglia y oligodendrocitos. Demostramos cultivo celular primario, síntesis de hidrogel desarrolla el ácido hialurónico (HAMA), encapsulación HAMAphoto-polimerización y de la célula y muestra de procesamiento para la proyección de imagen microscópica electrónica de barrido y confocal.

Mejora 3D hidrogel culturas de células Glial primarias para In Vitro modelado de neuroinflamación

Este protocolo describe la fabricación de un sistema de cultivo celular para permitir la siembra de células madre en un andamio de polímero conductor en vitro la estimulación eléctrica y posterior en vivo la implantación del andamio sembrado de células madre usando un técnica mínimamente invasiva.

Eléctricamente conductivo andamio modular y entregar las células madre

La terapia basada en células madre ha surgido como una estrategia eficiente para reparar los tejidos cardíacos lesionados después del infarto de miocardio. Proporcionamos una aplicación in vivo óptima para el trasplante de células madre utilizando hidrogeles de gelatina que son capaces de ser enzimáticamente cruzados.

Trasplante intramiocardio de hidrogeles inyectables msc-loading después de infarto de miocardio en un modelo murino

En este manuscrito, demostramos la preparación de una biotinta de hidrogel biohíbrida que contiene grafeno para su uso en ingeniería de tejidos periféricos. Utilizando este material biohíbrido 3D, se realiza el protocolo de diferenciación neural de las células madre. Este puede ser un paso importante para traer biomateriales similares a la clínica.

Preparación y caracterización de biotinta de hidrogel biohíbrida 3D basada en grafeno para neuroingeniería periférica

El presente protocolo establece un modelo post-resección de recaída de glioblastoma (GBM) utilizando microscopía para investigar el efecto terapéutico de un hidrogel inyectable y biosensible in vivo.

Modelo post-resección de la recaída del glioblastoma para investigaciones terapéuticas de hidrogel

En este estudio, se desarrollaron y caracterizaron hidrogeles compuestos miméticos nerviosos que se pueden utilizar para investigar y capitalizar el comportamiento pro-regenerativo de las células madre derivadas del tejido adiposo para la reparación de lesiones de la médula espinal.

Desarrollo de terapias combinatorias para la lesión de la médula espinal mediante la administración de células madre

Aprende a inyectar andamios de hidrogel en modelos de ictus isquémico en roedores usando el modelo fototrombótico. Este método permite estudiar la regeneración tisular y la recuperación motora tras el accidente cerebrovascular.

Inyección de andamios de biomaterial de hidrogel en el cerebro después de un accidente cerebrovascular

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