Name: Aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: Aprenda a aislar y enriquecer células progenitoras epiteliales de pulmón humano mediante digestión enzimática y FACS. Este protocolo permite generar organoides 3D regionales para estudiar biología pulmonar y descubrimiento de fármacos.

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Agradecemos el apoyo de Mizuno Takako para IFC y tinción H y E, Vanessa García para la seccionamiento de tejidos y Anika S Chandrasekaran por ayudar con la preparación del manuscrito. Este trabajo cuenta con el apoyo de los Institutos Nacionales de Salud (5RO1HL135163-04, PO1HL108793-08) y el Consorcio Celgene IDEAL.

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<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+epithelial+progenitors+are+region+specific+and+show+differential+responses+to+bleomycin-induced+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Airway epithelial progenitors are region specific and show differential responses to bleomycin-induced lung injury.</a> Stem Cells. 30 (9), 1948-1960 (2012).</li>
<li>Benam, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+airway-on-a-chip+enables+analysis+of+human+lung+inflammation+and+drug+responses+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Small airway-on-a-chip enables analysis of human lung inflammation and drug responses in vitro.</a> Nature Methods. 13 (2), 151-157 (2016).</li>
<li>Huh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstituting+organ-level+lung+functions+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reconstituting organ-level lung functions on a chip.</a> Science. 328 (5986), 1662-1668 (2010).</li>
<li>Jain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Human+Lung+Alveolus-on-a-chip+Model+of+Intravascular+Thrombosis+for+Assessment+of+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Primary Human Lung Alveolus-on-a-chip Model of Intravascular Thrombosis for Assessment of Therapeutics.</a> Clinical Pharmacology & Therapeutics. 103 (2), 332-340 (2018).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Describimos un método confiable para el aislamiento de subpoblaciones definidas de células pulmonares del tejido pulmonar humano para análisis molecular o funcional y modelado de enfermedades. Los elementos críticos de los métodos incluyen la capacidad de lograr la disociación tisular con la preservación de epítopos superficiales, que permiten el enriquecimiento mediado por anticuerpos de células recién aisladas, y la optimización de los métodos de cultivo para la generación eficiente de organoides epiteliales específico...

Los espacios aéreos del sistema respiratorio humano se pueden dividir ampliamente en zonas conductoras y respiratorias que median el transporte de gases y su posterior intercambio a través de la barrera epitelial-microvascular, respectivamente. Las vías respiratorias conductoras incluyen tráquea, bronquios, bronquiolos y bronquiolos terminales, mientras que los espacios de aire respiratorio incluyen bronquiolos respiratorios, conductos alveolares y alvéolos. El revestimiento epitelial de estos espacios aéreos cambia de composición a lo largo del eje proximo-distal para adaptarse a los requisitos únicos de cada zona funcionalmente distinta. El epitelio pseudoestratificado de las vías respiratorias traqueobronquiales está compuesto por tres tipos principales de células, basales, secretoras y ciliadas, además de los tipos celulares menos abundantes, incluidos el cepillo, el neuroendocrino y el ionocito 1,2,3. Las vías respiratorias bronquiolares albergan tipos de células epiteliales morfológicamente similares, aunque hay distinciones en su abundancia y propiedades funcionales. Por ejemplo, las células basales son menos abundantes dentro de las vías respiratorias bronquiolares, y las células secretoras incluyen una mayor proporción de células club frente a las células serosas y caliciformes que predominan en las vías respiratorias traqueobronquiales.  Las células epiteliales de la zona respiratoria incluyen un tipo de célula cuboidal mal definida en los bronquiolos respiratorios, además de las células alveolares tipo I (ATI) y tipo II (ATII) de los conductos alveolares y alvéolos 1,4.
La identidad de los tipos de células madre epiteliales y progenitoras que contribuyen al mantenimiento y renovación de los epitelios en cada zona se describe de forma incompleta y se infiere en gran medida de los estudios en modelos animales 5,6,7,8. Los estudios en ratones han demostrado que las células basales de las vías respiratorias pseudoestratificadas, o las células club de las vías respiratorias bronquiolares o las células ATII del epitelio alveolar, sirven como células madre epiteliales basadas en la capacidad de autorrenovación ilimitada y diferenciación multipotente 7,9,10,11,12 . A pesar de la incapacidad de realizar estudios de rastreo de linaje genético para evaluar el tallo de los tipos de células epiteliales pulmonares humanas, la disponibilidad de modelos de cultivo basados en organoides para evaluar el potencial funcional de las células madre y progenitoras epiteliales proporciona una herramienta para estudios comparativos entre ratones y humanos 13,14,15,16,17.
Describimos métodos para el aislamiento de tipos de células epiteliales de diferentes regiones del pulmón humano y su cultivo utilizando un sistema organoide 3D para recapitular los tipos de células regionales. Se han desarrollado métodos similares para el análisis funcional y el modelado de enfermedades de células epiteliales de otros sistemas de órganos 18,19,20,21. Estos métodos proporcionan una plataforma para la identificación de células progenitoras epiteliales regionales, para realizar estudios mecanicistas que investiguen su regulación y microambiente, y para permitir el modelado de enfermedades y el descubrimiento de fármacos. Aunque los estudios de células progenitoras epiteliales pulmonares realizados en modelos animales pueden beneficiarse del análisis, ya sea in vivo o in vitro, los conocimientos sobre la identidad de las células progenitoras epiteliales pulmonares humanas han dependido en gran medida de la extrapolación de organismos modelo. Como tal, estos métodos proporcionan un puente para relacionar la identidad y el comportamiento de los tipos de células epiteliales pulmonares humanas con sus estudios que investigan la regulación de las células madre / progenitoras.

<table><tbody><tr><td>Aislamiento</td><td></td><td></td><td></td></tr> celular <tr><td>10 mL Jeringas estériles, Luer-Lok Tip</td><td>Fisher scientific</td><td>BD 309646</td><td></td></tr><tr><td>30 mL Jeringas estériles, Luer-Lok Tip</td><td>VWR</td><td>BD302832</td><td></td></tr><tr><td>Bolsas de riesgo biológico</td><td>VWR</td><td>89495-440</td><td></td></tr><tr><td>Bolsas de riesgo biológico</td><td>VWR</td><td>89495-440</td><td></td></tr><tr><td>anillo de conexión</td><td>Pluriselect</td><td>41-50000-03</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonucleasa (lote #SLBF7798V)</td><td>sigma Aldrich</td><td>DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri desechables</td><td>Corning/Falcon</td><td>25373-187</td><td></td></tr><tr><td>Embudo</td><td>Pluriselect</td><td>42-50000</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM Grado de investigación</td><td>sigma Aldrich 5401127001</td><td></td><td></td></tr><tr><td>aguja 16G</td><td>VWR</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>aguja 18G</td><td>VWR</td><td>305199</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 100 &micro; m (Filtro de células)</td><td>Pluriselect</td><td>43-50100-51</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 300 &micro; m (Filtro de celdas)</td><td>Pluriselect</td><td>43-50300-03</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 40 &micro; m (Filtro de células)</td><td>Pluriselect</td><td>43-50040-51</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 500 &micro; m (Filtro de celdas)</td><td>Pluriselect</td><td>43-50500-03</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 70 &micro; m (Filtro de células)</td><td>Pluriselect</td><td>43-50070-51</td><td></td></tr><tr><td>Hojas de afeitar</td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de lisis de glóbulos rojos</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>Equipo' s</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS C Tubos</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS Octo Disociator</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-095-937</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP 300s Procesador de tejidos</td> LS Columnas <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand**</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Thermomixer</td><td>Eppendorf</td><td>05-412-503</td><td></td></tr><tr><td>Thermomixer</td><td>Eppendorf</td><td>05-412-503</td><td></td></tr><tr><td>HBSS+ Buffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15290018</td><td>2ml</td></tr><tr><td>EDTA (0,5 M), pH 8,0, sin RNasa</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>AM9260G</td><td>500&micro; l</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td>10ml</td></tr><tr><td>HBSS Hank's Solución salina equilibrada 1X 500 ml</td><td>VWR</td><td>45000-456</td><td>Frasco de 500ml</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15630080</td><td>5ml</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina-Neomicina (PSN) Mezcla antibiótica</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15640055</td><td>5ml</td></tr><tr><td>Lista de anticuerpos para FACS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-humano CD326 (EpCAM) Anticuerpo</td><td>BioLegend</td><td>369820</td><td>1:50</td></tr><tr><td>BD CompBead Anti-Mouse Ig, K/ Conjunto de partículas de control negativo</td><td>Fisher Scientific</td><td>BDB552843</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, humano</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td>20&micro; l/ 107 células totales</td></tr><tr><td>CD45 MicroBeads, humano</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-045-801</td><td>20&micro; l/ 107 células totales</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542-10MG</td><td>1:10000</td></tr><tr><td>FITC anti-humano CD235a</td><td>BioLegend</td><td>349104</td><td>1:100</td></tr><tr><td>FITC anti-humano CD31</td><td>BioLegend</td><td>303104</td><td>1:100</td></tr><tr><td>FITC anti-humano CD45</td><td>BioLegend</td><td>304054</td><td>1:100</td></tr><tr><td>FITC anti-ratón Anticuerpo IgM</td><td>BioLegend</td><td>406506</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Ratón IgM anti humano HT2-280</td><td>Terraza Biotech</td><td>TB-27AHT2-280</td><td>1:300</td></tr><tr><td>PE anti-humano CD271(NGFR)</td><td>BioLegend</td><td>345106</td><td>1:50</td></tr><tr><td>Composición de los medios</td><td></td><td></td><td></td>de cultivo de organoides</tr><tr><td>MRC-5</td><td>ATCC</td><td>CCL-171</td><td></td></tr><tr><td>PneumaCult -ALI Medium</td><td>Stemcell Technologies</td><td>5001</td><td></td></tr><tr><td>Epitelial de Vías Respiratorias Pequeñas Medio de crecimiento celular</td><td>PromoCell</td><td>C-21170</td><td></td></tr><tr><td>ThinCert Insertos de cultivo de tejidos, estéril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>662641</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 (inhibidor de ROCK) 100mM stock (1000x)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>72302</td><td></td></tr><tr><td>Ratón Medio basal:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15290018</td><td>50 &micro; l</td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>ThermoFisher scientific</td><td>11330032</td><td>50 ml</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td>5 ml</td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Selenio (ITS -G) (100X)</td><td>ThermoFisher scientific</td><td>41400045</td><td>500 &micro; l</td></tr><tr><td>Mezcla antibiótica de penicilina-estreptomicina-neomicina (PSN)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15640055</td><td>500 y micro; l SB431542</td></tr><tr><td>TGF-&beta; inhibidor de la vía (stock 100 mM)</td><td>Célula madre</td><td>72234</td><td>5 y micro; l</td></tr><tr><td>Lista de anticuerpos para inmunohistoquímica</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de desenmascaramiento de antígenos, vector a base de ácido cítrico</td><td></td><td>H-3300</td><td>937 y micro; l en 100 ml de agua</td></tr><tr><td>Histogel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td>primarios</tr><tr><td>Anti HT2-280</td><td>Terracebiotech</td><td>TB-27AHT2-280</td><td>1:500</td></tr><tr><td>FOXJ1 Anticuerpo monoclonal (2A5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-9965-82</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Uteroglobina/SCGB1A1 humanos</td><td>Anticuerpo Sistemas de investigación y desarrollo</td><td>MAB4218</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Queratina 5 Anticuerpo policlonal de pollo, purificado [Poly9059]</td><td>Biolegend</td><td>905901</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo monoclonal MUC5AC (45M1)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-12178</td><td>1:300</td></tr><tr><td>PDPN / Anticuerpo Podoplanina (clon 8.1.1)</td><td>LifeSpan Biosciences</td><td>LS-C143022-100</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Ratón purificado Anti-E-Cadherin</td><td>BD biosciences</td><td>610182</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Anticuerpo Sox-2</td><td>Santa Cruz Biotechnologies</td><td>sc-365964</td><td>1:300</td></tr><tr><td>Anticuerpos</td><td></td><td></td><td></td>secundarios</tr><tr><td>Burro anti-conejo lgG, 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21206</td><td>1:500</td></tr><tr><td>FITC anti-ratón Anticuerpo IgM</td><td>BioLegend</td><td>406506</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Cabra anti-Hámster IgG (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21113</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario de adsorción cruzada IgG1 anti-ratón para cabras, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21121</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario con adsorción cruzada IgG2a anti-ratón para cabras, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21131</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario con adsorción cruzada IgG2a para ratones y cabras, Alexa Fluor 568</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21134</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anticuerpo secundario de adsorción cruzada IgG2b anti-ratón de cabra, Alexa Fluor 568</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21144</td><td>1:500</td></tr><tr><td>tampones</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución</td><td></td><td></td> de bloqueo de inmunohistoquímica <td>3% BSA, o.4% Triton-x100 en TBS (solución salina basada en Tris)</td></tr><tr><td>Solución</td><td></td><td></td> de incubación de inmunohistoquímica <td>3% BSA, ).1% Triton-X100 en TBS</td></tr><tr><td>Solución</td><td></td><td></td> de lavado de inmunohistoquímica <td>TBS con 0,1% Tween 20</td></tr></tbody></table>

aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides

Isolation and Enrichment of Human Lung Epithelial Progenitor Cells for Organoid Culture

Los modelos organoides epiteliales sirven como herramientas valiosas para estudiar la biología básica de un sistema de órganos y para el modelado de enfermedades. Cuando se cultivan como organoides, las células progenitoras epiteliales pueden autorrenovarse y generar una progenie diferenciadora que exhibe funciones celulares similares a las de sus contrapartes in vivo . A continuación describimos un protocolo paso a paso para aislar progenitores específicos de la región del pulmón humano y generar cultivos organoides 3D como herramienta experimental y de validación. Definimos las regiones proximales y distales del pulmón con el objetivo de aislar las células progenitoras específicas de la región. Utilizamos una combinación de disociación enzimática y mecánica para aislar las células totales del pulmón y la tráquea. Las células progenitoras específicas se fraccionaron de las células de origen proximal o distal utilizando la clasificación celular asociada a la fluorescencia (FACS) basada en marcadores de superficie específicos del tipo celular, como NGFR para clasificar las células basales y HTII-280 para clasificar las células alveolares tipo II. Se utilizaron progenitores basales o alveolares aislados de tipo II para generar cultivos organoides 3D. Tanto los progenitores distales como los proximales formaron organoides con una eficiencia de formación de colonias del 9-13% en la región distal y del 7-10% en la región proximal cuando se chapan 5000 células / pozo en el día 30. Los organoides distales mantuvieron las células alveolares tipo II HTII-280+ en cultivo, mientras que los organoides proximales se diferenciaron en células ciliadas y secretoras para el día 30. Estos cultivos organoides 3D se pueden utilizar como una herramienta experimental para estudiar la biología celular del epitelio pulmonar y las interacciones mesenquimales epiteliales, así como para el desarrollo y validación de estrategias terapéuticas dirigidas a la disfunción epitelial en una enfermedad.

Fuente de tejido pulmonar La tráquea y el bronquio extrapulmonar (Figura 1A) se utilizaron como tejido fuente para el aislamiento de las células epiteliales de las vías respiratorias proximales y la posterior generación de organoides proximales. Se utilizó tejido pulmonar distal que incluye tanto parénquima como vías respiratorias pequeñas de menos de 2 mm de diámetro (Figura 1A) para el aislamiento de células epiteliales alveolares y de vías...

Este artículo proporciona una metodología detallada para los enfoques de disociación tisular y fraccionamiento celular que permiten el enriquecimiento de células epiteliales viables de las regiones proximal y distal del pulmón humano. En este caso, estos enfoques se aplican para el análisis funcional de células progenitoras epiteliales pulmonares mediante el uso de modelos de cultivo de organoides 3D.

Aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides

Epithelial organoid models serve as valuable tools to study the basic biology of an organ system and for disease modeling. When grown as organoids, ...

Los cultivos de organoides 3D son proximales en el epitelio pulmonar distal desarrollados mediante este protocolo. Proporciona un modelo manejable para estudiar los mecanismos fundamentales del mantenimiento del tejido pulmonar o la remodelación asociada a la enfermedad, y sirve como una plataforma eficaz para el descubrimiento y la validación de fármacos. Este protocolo es compatible con otros enfoques de fraccionamiento celular por disociación tisular.Y dado que las células progenitoras epiteliales se aíslan de diferentes compartimentos anatómicos y mantienen su identidad posicional in vitro, se puede utilizar para modelar diferencias regionales en las respuestas pulmonares a estímulos exógenos o endógenos. Esta técnica de nivel se puede utilizar para el aislamiento de diferentes subpoblaciones de células epiteliales, incluidas las células progenitoras específicas de la región que se pueden cultivar para producir una progenie diferenciada especializada representativa de la región de origen. Al recibir el tejido pulmonar, separe la tráquea proximal y los bronquios del epitelio pulmonar distal, que contiene pequeñas vías respiratorias de dos milímetros de diámetro o menos, y el tej

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este protocolo dirige eficientemente madre embrionarias de ratón endodermo definitivo derivado de las células de las vías respiratorias para madurar las células epiteliales. Esta técnica utiliza la diferenciación 3 dimensiones andamios pulmonares descelularizados para dirigir especificación linaje de pulmón, en un entorno de cultivo definido, libre de suero.

Generación de células epiteliales de las vías respiratorias del ratón ESC-Obtenido usando Descelularizado pulmón andamios

El artículo describe la diferenciación dirigida paso a paso de células madre pluripotentes inducidas a organoides pulmonares enteros tridimensionales que contienen células pulmonares epiteliales proximales y distales junto con mesénquima.

Generación de organoides pulmonares enteros en 3D a partir de células madre pluripotentes inducidas para modelar la biología y la enfermedad del desarrollo pulmonar

El protocolo presenta un método para derivar organoides pulmonares humanos a partir de tejidos pulmonares primarios, expandir los organoides pulmonares e inducir la diferenciación proximal para generar organoides de las vías respiratorias 3D y 2D que fenopicon fielmente el epitelio de las vías respiratorias humanas.

Establecimiento de organoides pulmonares humanos y diferenciación proximal para generar organoides maduros de las vías respiratorias

Los avances recientes en los protocolos de diferenciación de células madre pluripotentes inducidas por humanos permiten la derivación gradual de tipos de células específicas de órganos. Aquí, proporcionamos pasos detallados para el mantenimiento y la expansión de las células basales de las vías respiratorias derivadas de iPSC y su diferenciación en un epitelio mucociliar en cultivos de interfaz aire-líquido.

Generación de cultivos de interfaz aire-líquido de células epiteliales de las vías respiratorias a partir de células madre pluripotentes humanas

Aquí se presenta un método reproducible, asequible y robusto para el aislamiento y la expansión de células epiteliales bronquiales primarias para biobancos a largo plazo y la generación de células epiteliales diferenciadas por cultivo en la interfaz aire-líquido.

Aislar células epiteliales bronquiales del tejido pulmonar resecado para biobancos y establecer cultivos de interfaz aire-líquido bien diferenciados

Describimos un protocolo para aislar criptas murinas del intestino delgado y cultivar organoides 3D intestinales de las criptas. Además, describimos un método para generar organoides a partir de una sola célula madre intestinal en ausencia de un nicho celular subepitelial.

El cultivo 3D de organoides a partir de criptas intestinales murinas y una sola célula madre para la investigación de organoides

Este artículo describe la generación de un modelo complejo de barrera multicelular de la vía aérea compuesto por epitelio pulmonar derivado de células madre pluripotentes inducidas (iPSC), mesénquima, células endoteliales y macrófagos en un cultivo de interfaz aire-líquido.

Cocultivo epitelial, mesenquimatal, endotelial e inmunitario derivado de iPSC para modelar la integridad de la barrera de las vías respiratorias en la salud y la enfermedad pulmonar

Aquí presentamos un método para aislar y cultivar cerebelosa gránulo células progenitoras de neuronas y las neuronas del cerebelo gránulo de ratón postnatal.

Aislamiento y cultivo de Post-Natal células de ratón cerebelosa gránulo Progenitor neuronas y las neuronas

Endoteliales que forman colonias células progenitoras (ECFCs) son una herramienta prometedora para estudiar la homeostasis vascular y la reparación.

El aislamiento y la expansión a gran escala de células humanas adultas Colonia progenitoras endoteliales formación

En este artículo se proporciona un método para aislar y cultivar la codorniz o pollo...

Aislamiento y cultivo de células embrionarias progenitoras aviar valvular

Aprenda a aislar y enriquecer células progenitoras epiteliales de pulmón humano mediante digestión enzimática y FACS. Este protocolo permite generar organoides 3D regionales para estudiar biología pulmonar y descubrimiento de fármacos.

Aislamiento y enriquecimiento de células progenitoras epiteliales pulmonares humanas para cultivo de organoides

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