Name: Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Aprende a aislar células madre de cáncer de mama con alta pureza y viabilidad para ensayos funcionales in vitro e in vivo. Este método permite estudiar eventos moleculares de tumorigenicidad y diseñar terapias dirigidas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a los miembros de nuestro laboratorio por sus útiles discusiones y apoyo. Nuestra investigación sobre las células madre del cáncer de mama y el microambiente tumoral está financiada por subvenciones del Instituto de Investigación de la Sociedad Canadiense de Investigación del Cáncer y el Programa de Cáncer de Mama del Departamento de Defensa del Ejército de los Estados Unidos (Subvención # BC160912). V.B. cuenta con el apoyo de una beca postdoctoral occidental (Western University), y tanto A.L.A. como V.B. cuentan con el apoyo de la Sociedad de Cáncer de Mama de Canadá. C.L. cuenta con el apoyo de una beca de posgrado Vanier Canada del Gobierno de Canadá.

Los autores no tienen nada que revelar.

La metástasis del cáncer de mama y la resistencia a la terapia se han convertido en la principal causa de mortalidad en las mujeres en todo el mundo. La existencia de una subpoblación de células madre de cáncer de mama (BCSC) contribuye a la metástasis mejorada 26,43,44,45,46 y la resistencia a la terapia21,47,48.<sup class="...

Comprender los mecanismos celulares y moleculares de las células madre del cáncer de mama humano (BCSC) es crucial para abordar los desafíos encontrados en el tratamiento del cáncer de mama. La aparición del concepto BCSC se remonta a principiosdel siglo 21, donde se encontró que una pequeña población de CD44 + CD24 / células de cáncer de mama bajo era capaz de generar tumores heterogéneos en ratones 1,2. Posteriormente, se observó que las células de cáncer de mama humano con alta actividad enzimática de aldehído deshidrogenasa (ALDH alta) también mostraron propiedades similares a las células madre3. Estas BCSC representan una pequeña población de células capaces de autorrenovarse y diferenciarse, contribuyendo a la naturaleza heterogénea de los tumores a granel 1,2,3. La evidencia acumulada sugiere que las alteraciones en las vías de señalización conservadas evolutivamente impulsan la supervivencia y el mantenimiento de BCSC 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . Además, se ha demostrado que el microambiente extrínseco celular desempeña un papel fundamental en el dictado de diferentes funciones BCSC15,16,17. Estas vías moleculares y los factores externos que regulan la función de BCSC contribuyen a la recaída del cáncer de mama, metástasis18 y desarrollo de resistencia a las terapias 19,20,21, siendo la existencia residual de BCSC después del tratamiento un gran desafío para la supervivencia global de pacientes con cáncer de mama22,23 . Por lo tanto, la evaluación preclínica de estos factores es muy importante para identificar terapias dirigidas a BCSC que podrían ser beneficiosas para lograr mejores resultados de tratamiento y mejorar la supervivencia general en pacientes con cáncer de mama.
Se han utilizado varios modelos de líneas celulares de cáncer de mama humano in vitro y modelos de xenoinjertos humanos in vivo para caracterizar BCSC 24,25,26,27,28,29. La capacidad de las líneas celulares para repoblar continuamente después de cada paso sucesivo hace de estos un sistema modelo ideal para realizar estudios basados en ómicas y farmacogenómica. Sin embargo, las líneas celulares a menudo no logran recapitular la heterogeneidad observada en las muestras de pacientes. Por lo tanto, es importante complementar los datos de la línea celular con muestras derivadas de pacientes. El aislamiento de las BCSC en su forma más pura es importante para permitir la caracterización detallada de las BCSC. El logro de esta pureza depende de la selección de marcadores fenotípicos que son específicos de las BCSC. Actualmente, el fenotipo de células CD44+CD24- altas de ALDH se usa más comúnmente para distinguir y aislar BCSC humanas de poblaciones de células de cáncerdemama a granel utilizando clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para una pureza máxima1, 3,26. Además, las propiedades de las BCSC aisladas, como la autorrenovación, la proliferación y la diferenciación, se pueden evaluar utilizando técnicas in vitro e in vivo.
Por ejemplo, los ensayos in vitro de formación de colonias se pueden utilizar para evaluar la capacidad de una sola célula para autorrenovarse para formar una colonia de 50 células o más en presencia de diferentes condiciones de tratamiento30. Los ensayos de mamosfera también se pueden utilizar para evaluar el potencial de autorrenovación de las células de cáncer de mama en condiciones independientes del anclaje. Este ensayo mide la capacidad de las células individuales para generar y crecer como esferas (mezcla de BCSC y no BCSC) en cada paso sucesivo en condiciones de cultivo no adherentes libres de suero31. Además, se pueden utilizar modelos de cultivo tridimensionales (3D) para evaluar la función de BCSC, incluidas las interacciones célula-célula y célula-matriz que recapitulan estrechamente el microambiente in vivo y permiten la investigación de la actividad de posibles terapias dirigidas a BCSC32. A pesar de las diversas aplicaciones de los modelos in vitro, es difícil modelar la complejidad de las condiciones in vivo utilizando solo ensayos in vitro. Este desafío puede superarse mediante el uso de modelos de xenoinjerto de ratón para evaluar el comportamiento de BCSC in vivo. En particular, tales modelos sirven como un sistema ideal para evaluar la metástasis del cáncer de mama 33, investigar las interacciones con el microambiente durante la progresión de la enfermedad 34, la imagen in vivo 35, y para predecir la toxicidad específica del paciente y la eficacia de los agentes antitumorales 34.
Este protocolo proporciona una descripción detallada para el aislamiento de ALDHhumana altaCD44 + CD24- BCSC con la máxima pureza de poblaciones a granel de células heterogéneas de cáncer de mama. También proporcionamos una descripción detallada de tres técnicas in vitro (ensayo de formación de colonias, ensayo de mamosfera y modelo de cultivo 3D) y un ensayo de xenoinjerto tumoral in vivo que se puede utilizar para evaluar diferentes funciones de BCSC. Estos métodos serían apropiados para su uso por investigadores interesados en aislar y caracterizar BCSC de líneas celulares de cáncer de mama humano o células de cáncer de mama derivadas de pacientes primarios y tejido tumoral con el fin de comprender la biología de BCSC y / o investigar nuevas terapias dirigidas a BCSC.

<table><tbody><tr><td>7-Aminoactinomicina D (7AAD)</td><td>BD</td><td>51-68981E</td><td>sugerido: 0.25 &micro; g/1x106 células</td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Fisher</td><td>A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Sustrato de aldehído deshidrogenasa (ALDH)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>Se vende comercialmente como parte del kit de ensayo ALDEFLOUR; siga las instrucciones del fabricante para la preparación del sustrato ALDH</td></tr><tr><td>Extracto de membrana basal (BME)</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Se vende bajo el nombre comercial Matrigel</td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular: 6 pocillos</td><td>Corning</td><td>877218</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular: 60 mm</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular: 96 pocillos de ultra bajo accesorio</td><td>Corning</td><td>3474</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de células: 40 micras</td><td>BD</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno</td><td>Tecnologías de células madre</td><td>7001</td><td>Prepare una dilución 1:30 de 3 mg/ml de colágeno en PBS</td></tr><tr><td>Colagenasa</td><td>Sigma 11088807001</td><td></td><td>1x</td></tr><tr><td>Tubos cónicos: 50 mL</td><td>Fisher scientific</td><td>05-539-7</td><td></td></tr><tr><td>Crystal violet</td><td>Sigma</td><td>C6158</td><td>Use una solución de violeta cristalino al 0,05% en agua para teñir</td></tr><tr><td>Dispasa</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7913</td><td>5U/mL</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, con L-glutamina y 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5052</td><td>0,1 mg/mL concentración final</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Avantor Seradigm Lifescience</td><td>97068-085</td><td>&nbsp; </fuerte></td></tr><tr><td>Tubos de flujo: 5 ml</td><td>BD</td><td>352063</td><td>Tubos de polipropileno de fondo redondo</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher</td><td>84124</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo CD24 de ratón BD</td><td></td><td>561646</td><td>R-ficoeritrina y colorante de cianina conjugados Clon: ML5</td></tr><tr><td>ratón anticuerpo CD44</td> humano <td>BD</td><td>555479</td><td>R-ficoeritrina conjugada, Clon: G44-26</td></tr><tr><td>N, N-dietilaminobenzaldehído (DEAB)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>Se vende comercialmente como parte del kit de ensayo ALDEFLOUR; siga las instrucciones del fabricante Preparación de DEAB</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent Inc</td><td>311-425-CL</td><td>1x, Sin calcio ni magnesio</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mammosphere Media Composición</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F2006</td><td>10 ng/mL</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioshop</td><td>ALB003</td><td>04%</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, Con L-glutamina y 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma</td><td>16634</td><td>5 y micro; g/mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3D Organoide Composición de Medios</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A8301</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, con L-glutamina y 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td></td><td>Sigma E9644</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF7</td><td>Peprotech</td><td>100-19</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>1x</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>N-acetilcisteína</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td>1,25 mM</td></tr><tr><td>Neuregulin y beta; 1</td><td>Peprotech</td><td>100-03</td><td>5 nM</td></tr><tr><td>Nicotinamida</td><td></td><td>Sigma N0636</td><td>5 mM</td></tr><tr><td>Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td>100 ng/mL</td></tr><tr><td>R-spondin3</td><td>R& D</td><td>3500</td><td>250 ng/mL</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma</td><td>S7067</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>5 y micro; M</td></tr></tbody></table>

aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Las células madre del cáncer de mama (BCSC) son células cancerosas con características similares a las células madre heredadas o adquiridas. A pesar de su baja frecuencia, son los principales contribuyentes al inicio del cáncer de mama, la recaída, la metástasis y la resistencia a la terapia. Es imperativo comprender la biología de las células madre del cáncer de mama para identificar nuevos objetivos terapéuticos para tratar el cáncer de mama. Las células madre del cáncer de mama se aíslan y caracterizan en función de la expresión de marcadores de superficie celular únicos como CD44, CD24 y la actividad enzimática de la aldehído deshidrogenasa (ALDH). Estas células ALDHaltasCD44 + CD24- constituyen la población BCSC y pueden aislarse mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) para estudios funcionales posteriores. Dependiendo de la cuestión científica, se pueden utilizar diferentes métodos in vitro e in vivo para evaluar las características funcionales de las BCSC. Aquí, proporcionamos un protocolo experimental detallado para el aislamiento de BCSC humanas tanto de poblaciones heterogéneas de células de cáncer de mama como de tejido tumoral primario obtenido de pacientes con cáncer de mama. Además, destacamos los ensayos funcionales in vitro e in vivo posteriores, incluidos los ensayos de formación de colonias, los ensayos de mamosfera, los modelos de cultivo 3D y los ensayos de xenoinjerto tumoral que se pueden usar para evaluar la función de BCSC.

El protocolo descrito permite el aislamiento de BCSC humanas de una población heterogénea de células de cáncer de mama, ya sea de líneas celulares o de tejido tumoral disociado. Para cualquier línea celular o muestra de tejido dado, es crucial generar una suspensión uniforme de una sola célula para aislar BCSC con la máxima pureza, ya que contaminar poblaciones no BCSC podría dar lugar a respuestas celulares variables, especialmente si el objetivo del estudio es evaluar la eficacia de los agentes terapéuticos dirigidos a...

Este protocolo experimental describe el aislamiento de BCSC a partir de muestras de células y tejidos de cáncer de mama, así como los ensayos in vitro e in vivo que se pueden utilizar para evaluar el fenotipo y la función de BCSC.

Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Esta técnica permitirá a los investigadores aislar células madre de cáncer de mama con la máxima pureza y viabilidad para la realización de ensayos de caracterización funcional tanto in vitro como in vivo. Las células madre aisladas de cáncer de mama también se pueden utilizar para ayudar a dilucidar los eventos moleculares que controlan la tumorigénesis y la metástasis, y para diseñar estrategias terapéuticas dirigidas a estas células. Con pequeñas modificaciones específicas para los tipos de células y tejidos de interés, este método también se puede aplicar a otros sistemas.Para generar una suspensión de una sola célula a partir de un cultivo celular, lave un cultivo de células de cáncer de mama confluente al 80% con PBS y trate las células con una solución de disociación celular adecuada durante cinco minutos a temperatura ambiente. Una vez que las células se hayan desprendido, agregue cinco mililitros de medio de cultivo para neutralizar la solución de disociación celular y transfiera las células a un tubo cónico de 50 mililitros para la centrifugación. Vuelva a suspender el pellet en cinco mililitros de PBS para contar.Después de contar, centrifugue las células nuevamente, luego vuelva a suspender las células a una vez de 10 a seis celdas por mililitro de tampón de sustrato ALDH. Para generar una suspensión de una sola célula a partir de una muestra de tejido, use cuchillas quirúrgicas en una técnica entrecruzada para picar el tejido tumoral en pedazos de aproximadamente un milímetro de tamaño. Coloque las piezas en un tubo cónico de 50 mililitros que contenga 10 mililitros de tampón de disociación.Selle el tubo con parafilm para una incubación de 40 minutos a 37 grados centígrados en un agitador y sedimente las piezas de tejido digeridas por centrifugación. Vuelva a suspender el pellet en cinco mililitros de tripsina utilizando una pipeta de cinco mililitros e incube el tejido en un baño de agua a 37 grados durante cinco minutos. Al final de la incubación, pipetee vigorosamente el tejido varias veces para liberar células individuales y agregue suficiente medio DMEM/F-12 para llevar el volumen total en el tubo a 25 mililitros.Recoja las células por centrifugación, vuelva a suspender el pellet en un mililitro de Displace DNAse e incube durante cinco minutos en un baño de agua a 37 grados centígrados. Al final de la incubación, lleve el volumen total a 10 mililitros con PBS. Mezcle las células mediante pipeteo y páselas a través de un filtro de células de 40 micras a un tubo de 50 mililitros.Después de la centrifugación, vuelva a suspender las células en cinco mililitros de PBS fresco para contar. Para realizar un ensayo de formación de colonias, después de la clasificación, vuelva a suspender las células en medio completo y agregue el número adecuado de células madre de cáncer de mama a cada uno de los tres tubos que contienen dos mililitros de medio por tubo, etiquetados una vez 10 para la segunda, dos veces 10 para la segunda o cinco veces 10 para las segundas células. Pipetear hacia arriba y hacia abajo cinco veces para mezclar completamente la suspensión celular y colocar las células en pocillos individuales de una placa de seis pocillos.Gire suavemente la placa para obtener distribuciones celulares uniformes y coloque la placa en la incubadora de cultivos celulares hasta que aparezcan las colonias. Al final de la incubación, lavar las células con un mililitro de PBS por pocillo y teñir las células con 500 microlitros de solución violeta cristalina al 0,05% por pocillo durante 30 segundos. Al final de la incubación, lavar los pocillos dos veces con dos mililitros de agua por pocillo para eliminar el exceso de tinte, y contar y registrar el número total de colonias por pocillo mediante microscopía óptica con un aumento de cuatro o 10 veces.Para realizar un ensayo de mamósfera, después de la clasificación, vuelva a suspender las células en un medio de mamosfera completo y coloque las células a una densidad de asiento de cinco veces 10 de las segundas células por centímetro cuadrado de área por pocillo en una placa de cultivo celular de fijación ultrabaja de 96 pocillos. Antes de contar el número de mamósferas por pocillo mediante microscopía óptica, coloque la placa en la incubadora de cultivos celulares durante cinco a 10 días. Para configurar un modelo de cultivo en 3D, agregue con cuidado 50 microlitros de extracto de membrana basal a cada pocillo de una placa de 96 pocillos sin burbujas y coloque la placa a 37 grados centígrados durante una hora para permitir que la solución se polimerice.Agregue 100 microlitros de PBS después de 10 minutos para evitar que la capa de gel se seque. Al final de la incubación, suspenda las células clasificadas de cinco a 50 veces 10 a la tercera celda por cada 200 microlitros de concentración de medio de cultivo 3D y reemplace el PBS en cada pocillo de la placa de 96 pocillos con 200 microlitros de medio que contenga celdas. A continuación, coloque la placa en la incubadora de cultivos celulares durante 10 a 14 días antes de evaluar los cultivos para la formación de organoides.Las células de cáncer de mama humano que exhiben una mayor actividad enzimática de ALDH expresan altos niveles de CD44 y niveles bajos a negativos de expresión de CD24, y pueden clasificarse como células madre de cáncer de mama. La proporción de células madre de cáncer de mama dentro de la población a granel puede variar entre líneas celulares o pacientes y, a menudo, depende de la etapa de la enfermedad, ya que el cáncer de mama más agresivo suele mostrar una mayor proporción de células madre de cáncer de mama. La capacidad de una sola célula de cáncer de mama para autorrenovarse y generar colonias de 50 células se puede evaluar mediante ensayos de formación de colonias.La capacidad de las células madre del cáncer de mama para autorrenovarse en condiciones experimentales independientes del anclaje puede evaluarse mediante ensayos de mamósfera. El cultivo de células de cáncer de mama y el extracto de membrana basal permite que las células madre del cáncer de mama formen estructuras 3D que recapitulan en condiciones in vivo. Además, los modelos de xenoinjertos de ratón in vivo se pueden utilizar para comprender las diferencias en el crecimiento, la autorrenovación, la diferenciación y/o la capacidad de inicio tumoral de las células madre de cáncer de mama en comparación con las células madre de cáncer de mama o las poblaciones de células a granel.Después de este procedimiento, las células madre aisladas del cáncer de mama se pueden utilizar en estudios transcriptómicos, cinómicos y metabolómicos. Este método brinda a los investigadores la oportunidad de explorar el papel de las células madre del cáncer de mama en el inicio del tumor, la metástasis, la recurrencia y la resistencia a la terapia.

isolation-functional-assessment-human-breast-cancer-stem-cells-from

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Las células madre del cáncer (CCC) se han identificado en un número de tumores malignos. En este protocolo se describe un método de citometría de flujo utilizando la actividad de aldehído deshidrogenasa y la expresión de CD44 y CD24 para aislar células madre cancerosas de xenoinjertos de adenocarcinoma pancreático. Estas células viables se pueden utilizar en los estudios funcionales y análisis.

El aislamiento de células madre de cáncer de páncreas xenoinjertos

La identificación de células tumorales cerebrales iniciador (BTICs), las células raras dentro de una heterogéneos tumorales que poseen propiedades de células madre, proporciona nuevos conocimientos sobre la patogénesis humana tumor cerebral. Hemos mejorado las condiciones de cultivo específicos para enriquecer BTICs, y nosotros usamos la citometría de flujo para enriquecer aún más a estas poblaciones. De auto-renovación ensayos y análisis de transcripción por una sola célula de RT-PCR...

Procesamiento de tejido primario Tumor cerebral para ensayos con células madre y flujo de Ordenación

El aislamiento de células madre de cáncer (CSC) directamente a partir de tejidos humanos es necesaria para su caracterización biológica. Este manuscrito describe una metodología para el aislamiento de células madre cancerosas de la próstata de los tejidos humanos, mientras que también proporciona consejos sobre la solución de problemas difíciles pasos.

El aislamiento de las células madre del cáncer de muestras de cáncer de próstata humano

Los ensayos de esferas in vitro se utilizan comúnmente para identificar células madre cancerosas. Aquí comparamos ensayos de esferas individuales con ensayos basados en múltiples células. Los ensayos más laboriosos basados en células individuales o la suplementación con metilcelulosa dan resultados más precisos, mientras que los ensayos basados en células múltiples realizados en medio líquido pueden verse muy influenciados por la densidad celular.

Evaluación de las propiedades de células madre en células de carcinoma de ovario humano utilizando multi e individuales basados ​​en células Esferas ensayos

Los ensayos de mama flotante pueden investigar el subconjunto de células de cáncer de mama similares a las células madre que sobreviven en condiciones de suspensión y muestran una tumorigénesis mejorada cuando se implantan en ratones.  Este protocolo proporciona una medida in vitro conveniente de la capacidad de formación de esferas, un indicador de la tumorigénesis in vivo, al tiempo que facilita el análisis del panorama transcripcional asociado al tallo.

Mammosphere Ensayo Formación de cáncer de mama humano tejidos y líneas celulares

La presencia de células madre del cáncer (CSC) en sarcomas óseos se ha vinculado recientemente a su patogénesis. En este artículo, presentamos el aislamiento de células madre cancerosas a partir de cultivos celulares primarios obtenidos de biopsias humanas de osteosarcoma convencional (OS) utilizando la capacidad de las células madre cancerosas de crecer bajo condiciones no adherentes.

Establecimiento de Cultivos Celulares del Cáncer Humano de osteosarcoma convencional Tallo

Comprender el papel de las células madre cancerosas en la recurrencia tumoral y la resistencia a las terapias se ha convertido en un tema de gran interés en la última década. Este artículo describe el aislamiento y caracterización de la subpoblación de células madre cancerosas de líneas celulares de carcinoma escamoso de cabeza y cuello (HNSCC).

Aislamiento y caracterización de un cabeza y cuello Carcinoma de células escamosas subpoblaciones Tener madre Características de las células

Este procedimiento demostrará cómo sintetizamos y caracterizamos la actividad de las células madre anti-NFκB y anticancerosas de un profármaco aspirina-fumarato.

Síntesis y caracterización de un profármaco Aspirina-fumarato que inhibe la actividad de NFkB y de la mama células madre del cáncer

El objetivo de esta metodología es identificar células madre cancerosas (CSC) en líneas celulares cancerosas y muestras de tumores humanos primarios con el protocolo de formación de esferas, de manera robusta, utilizando ensayos funcionales y caracterización fenotípica con citometría de flujo y occidental Blot.

Obtención de esferas de células madre de cáncer de cáncer de tumores ginecológicos y de cáncer de mama

Utilizando células epiteliales de próstata primarias humanas, informamos de un nuevo método libre de biomarcadores de caracterización funcional de células similares a tallos mediante un ensayo de retención de etiquetas basado en esferoides. Se describe un protocolo paso a paso para el etiquetado de celdas 2D BrdU, CFSE o Far Red; formación de esferoides tridimensionales; identificación celular similar a un tallo que retiene la etiqueta por inmunocitoquímica; y aislamiento por FACS.

Aislamiento de células similares a tallos de cultivos esferoides tridimensionales

Este protocolo describe el método para establecer el ensayo de formación de la mamosfera para estudiar el cáncer inducido por inhibidor de la apoptosis 5 (Api5) en células epiteliales mamarias no tumorígenas. Los lisados recogidos de mamósferas de generación primaria se analizan en busca de diferentes marcadores de tallo para evaluar la inducción de propiedades similares a las de células madre.

El ensayo de mamosera revela el tallo inducido por Api5 en líneas celulares epiteliales mamarias no tumorígenas

Aprende a aislar células madre de cáncer de mama con alta pureza y viabilidad para ensayos funcionales in vitro e in vivo. Este método permite estudiar eventos moleculares de tumorigenicidad y diseñar terapias dirigidas.

Aislamiento y evaluación funcional de células madre de cáncer de mama humano a partir de muestras de células y tejidos

Explorar más videos