Un dispositivo contemporáneo de calentamiento / restricción para inyecciones eficientes de venas de la cola en un modelo de sepsis fúngica murina

El dispositivo de calentamiento y restricción ofrece una técnica simplificada para realizar con éxito inyecciones intravenosas en las venas de cola, proporciona calentamiento en un entorno controlado y un manejo eficaz para realizar la inyección intravenosa en las venas de cola. Antes de intentar la técnica, es importante familiarizarse con el protocolo y practicar con inyecciones de solución salina. La demostración visual ofrece la oportunidad de mostrar consejos y advertencias para ayudar con el procedimiento.

Junko Yano, postdoc en mi laboratorio, montará el equipo y yo demostraré el procedimiento. Para inicializar el dispositivo de calentamiento, controle la unidad de calentamiento sobre una mesa de trabajo plana y limpia y enciéndala, asegurándose de que la lámpara indicadora de energía del termostato esté iluminada en verde. Luego, coloque el material de cama dentro de la cámara de calentamiento para mantener el área seca y retener el calor.

Para la instalación del dispositivo de sujeción, coloque la unidad de sujeción junto a la unidad de calentamiento y determine los tamaños de cono apropiados para el animal. Ajuste manualmente los anchos de la base del cono de aluminio flexible para proporcionar una sujeción adecuada para el animal. Alternativamente, reemplace el cono con modelos personalizados para acomodar animales de diferentes tamaños.

Ajuste el termostato a la temperatura deseada con el dial de control, asegurándose de que el indicador del calentador esté iluminado en rojo y que la bombilla esté encendida. Monitoree cuidadosamente la pantalla de temperatura interna mientras la bombilla está encendida. Se activará automáticamente una vez que se haya alcanzado la temperatura objetivo.

Coloque la altura del cono de la plataforma de sujeción al nivel óptimo para el usuario con la perilla de ajuste de altura. Una vez que se haya alcanzado la temperatura objetivo, transfiera suavemente a los animales de la jaula de alojamiento a la cámara de calentamiento. La cámara de calentamiento puede contener de cuatro a seis ratones o una rata durante un máximo de 20 a 30 minutos.

El tratamiento térmico durante 5 a 10 minutos es suficiente para inducir la vasodilatación y mejorar la visibilidad de las venas de la cola. Vigile al animal para detectar cualquier signo de estrés por calor agudo, como respiración rápida, letargo o comportamiento de escape al saltar. Retire al animal de la cámara levantándolo por la base de la cola y colóquelo en la abertura del cono de la unidad de sujeción.

A medida que el animal agarra el borde más alejado del cono con sus patas delanteras, tire suavemente de la cola hacia atrás y pase la cola a través de la ranura abierta. Asegure cualquiera de las patas traseras que sobresalgan del cono para que la vena lateral sea visible en la posición de las 12 en punto. Agarre la cola a mediados de 2/3 de longitud con la mano no dominante entre el pulgar y el índice, ejerciendo una ligera tensión en la vena lateral para mantener la posición de la cola y la vasodilatación.

Limpie la piel del lugar de la inyección con una gasa, esponja o almohadilla humedecida con alcohol al 70%. Sostenga la jeringa con la mano dominante y coloque la aguja paralela a la cola. Inserte la aguja hacia la dirección del flujo sanguíneo en un ángulo de 10 a 25 grados y avance aún más en la luz de la vena penetrando de dos a cuatro milímetros.

Inyecte lentamente la solución. En caso de resistencia o ampollas blancas por encima del lugar de la inyección, retire la aguja e intente una segunda inyección en un sitio por encima de la colocación original de la aguja. Si la inyección de una vena lateral no tiene éxito, vuelva a colocar al animal en el lado opuesto y haga más intentos en la vena contralateral.

Retire la aguja y presione firmemente el sitio de inyección con el pulgar para evitar el reflujo de la solución inyectada o de la sangre. Continúe aplicando una compresión suave con una gasa limpia o una toallita desechable hasta que se detenga el sangrado. Regrese al animal a su jaula y vigílelo durante cinco minutos, asegurándose de que el animal reanude su actividad normal sin sangrar más.

Una vez activado el calentador de la cámara de calentamiento, la emisión de calor por la bombilla eleva rápidamente la temperatura interna durante los primeros 5 a 15 minutos, dependiendo de la temperatura objetivo. El calentador inactiva la bombilla si la temperatura interna detectada excede la temperatura establecida. Posteriormente, el dispositivo repite automáticamente el ciclo de calor para mantener la temperatura interna.

En un modelo de ratón de candidiasis del torrente sanguíneo que resultó en sepsis, un desafío intravenoso con Candida albicans en ratones Swiss Webster causó un rápido inicio de sepsis y diseminación de los microorganismos, lo que llevó a una alta mortalidad en tres o cuatro días. Por el contrario, los animales pudieron protegerse de la sepsis mediante la preinmunización o la vacunación con una cepa avirulenta de Candida dubliniensis, logrando una supervivencia de más del 95% tras el desafío intravenoso letal con C. albicans virulenta. Los animales no vacunados con infección letal tuvieron un aumento significativo en la morbilidad inducida por sepsis, mientras que el grupo vacunado mostró síntomas mínimos después del desafío letal.

Los resultados de mortalidad progresiva frente a la protección mediada por la vacuna se obtuvieron de forma reproducible en cuatro experimentos independientes. Tenga cuidado al colocar al animal en el cono de inclinar correctamente la aguja para acceder a la vena, ajustar la aguja en la vena e inyectar la vena. Esta técnica simplificada ofrece un medio eficiente y eficaz para realizar inyecciones en las venas de la cola que mejorarán los resultados científicos de los investigadores.