Name: Registro de corrientes eléctricas a través de la membrana plasmática de espermatozoides de mamíferos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Aprende la técnica de patch-clamp en espermatozoides de mamíferos para registrar la actividad de canales iónicos como CatSper. Este método permite estudiar la electrofisiología espermática y comprender defectos relacionados con la infertilidad masculina.

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<table><tbody><tr><td>IX71 con óptica DIC</td><td>Olympus Inc</td><td>IX71</td><td>También se puede usar microscopio Nikon TiU</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>Olympus Inc</td><td></td><td><Objetivo de inmersión en > agua</td></tr><tr><td>Mesa de aire que amortigua vibraciones</td><td>Newport Inc</td><td></td><td>Se pueden usar TMC airtables o similares</td></tr><tr><td>Axopatch y comercio; Amplificador 200B</td><td>Axon y comercio; &nbsp; /Dispositivos moleculares</td><td></td><td>Sutter IPA&reg;/Double IPA&reg; El sistema integrado de abrazadera patch también es un excelente amplificador</electromagnético></td></tr><tr><td>Convertidor analógico a digital Axon Digidata</td><td>Axon y comercio; &nbsp; /Dispositivos moleculares</td><td>1440 o 1550</td><td> también se pueden usar</td></tr><tr><td>Osmómetro de presión de vapor</td><td>Wescor</td><td>Modelo 5600</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador MPC 385</td><td>Instrumentos Sutter, Novato, CA</td><td>MPC 385</td><td>También se puede usar la serie TransferMan micromanipulador de Eppendorf</td></tr><tr><td>Extractor de micropipetas</td><td>Instrumentos Sutter, Novato, CA</td><td>P1000</td><td>P97 puede usarse</td></tr><tr><td>MicroForge</td><td>Narishige</td><td>MF-830</td><td>< > Deberían estar equipados con un objetivo Nikon MPlan 100/0.80 ELWD 210/0</td></tr><tr><td>Jaula de Faraday</td><td>Casera</td><td></td><td>< > proteger el equipo de interferencias eléctricas ambientales< ></td></tr><tr><td>&nbsp; Cubiertas de vidrio de 5 mm</td><td>WPI</td><td>&nbsp;#502040</td><td></td></tr><tr><td>Cámara de perfusión</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>&nbsp; RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>Capilaria de vidrio borosilicato</td><td>Instrumentos Sutter, Novato, CA</td><td>BF 150-85-7.5</td><td>diámetro exterior 1,5 mm, diámetro interior 0,86 mm y filamento interno</td></tr><tr><td>Colector de teflón MP-8</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>64-0211</td><td>Variedad de perfusión de 8 posiciones de teflón</td></tr><tr><td>Placa Nunc de 4 pozos</td><td>Nunc</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1 x Buffer HTF</td><td>EmbryoMax</td><td>MR-070-D</td><td><Solución >capacitación</td></tr><tr><td>SA-Oly/adaptador de 2 etapas</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>para plataformas de la Serie 20</td><td><solo > microscopio Olympus</td></tr><tr><td>Plataforma calefactada magnética</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>PM-1 o serie similar</td><td>< > para mantener la cámara RC-24E</td></tr><tr><td>Abrazadera magnética MAG-1</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>Soporte para microelectrodos con perdigón de 2 mm de Ag/AgCl</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>Stopcock con conexiones con Luer; 4 vías; Macho con candado</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-30600 y guiño; 09</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de espiga de manguera Luer hembra, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-45508&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de perfusión de politetrafluoroetileno (PTFE)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06417&ndash; 21</td><td> (Tubo de PTFE microcalibrado, 0,022" ID y horarios; 0,042" OD)</td></tr><tr><td>Tubo conector de silicona (tubo de silicona curado con platino, 1/32" ID y horarios; 3/32" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-95802&ndash; 01</td><td></td></tr><tr><td>Tubo conector del colector (tubo PTFE, 1/32" ID y horarios; 1/16" OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06407&ndash; 41</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de barb de la serie Luer macho, 1/16"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45518&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>Adaptador de bloqueo integrado Luer macho 1/8"</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>Tubería de conector de silicona</td><td>Dow Silicon Corporation; &nbsp; MI</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>Jeringuillas</td><td>Fisher Scientific o VWR</td><td>Luer de Aire-Tite, Norm-Ject</td><td>< > 1 mL, 3 mL y 20 mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Lactato sódico (60% a medias)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CsMeSO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1426</td><td>metanasilonato de cesio</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Calidad Biológico</td><td>315-006-721</td><td>1 solución M de similar</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Medio de fluido tubárico humano Embryomax:</td><td>Millipore</td><td>MR-070-D</td><td><> medio capacitador para espermatozoides murinos</td></tr><tr><td>(Embryomax-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Animales</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ratas wistar macho</td><td>Wistar</td><td>Laboratorios Harlan (Livermore, CA)</td><td>< >ratas adultas< o ellas></td></tr><tr><td>Ratones macho C57BL/6</td><td>Ratones C57BL/6</td><td>Laboratorios Harlan (Livermore, CA)</td><td>< ellos> 3-6 meses< o ellos></td></tr></tbody></table>

registro de corrientes eléctricas a través de la membrana plasmática de espermatozoides de mamíferos

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Registro de corrientes eléctricas a través de la membrana plasmática de espermatozoides de mamíferos

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Técnicas de Imagen Ca 2 + Señalización en el esperma humano

Medición de Ca intracelular<sup&gt; 2 +</sup&gt; Cambios en el esperma humano mediante cuatro técnicas: Fluorometría convencional, se detuvo Fluorometría Flow, citometría de flujo y Single imágenes de células

Hemos desarrollado una preparación espinal cerebral espinal intacta para registrar y monitorear la actividad eléctrica a través de la grabación de patch clamp de las neuronas y otras células de Mauthner reticulospinal en embriones de pez cebra. Por lo tanto, somos capaces de registrar las corrientes sinápticas excitatorias e inhibitorias, la actividad del canal dependiente de voltaje y los potenciales de acción de las neuronas clave en un embrión en desarrollo.

Patch Clamp Las grabaciones de las células embrionarias de pez cebra Mauthner

Se presenta un protocolo que combina el aislamiento de células y de células enteras patch-clamp de registro para medir las propiedades eléctricas de la primaria células epiteliales disociadas de la cauda de la rata epididimidas. Este protocolo permite investigar las propiedades funcionales de las células epiteliales epididimales primarias para dilucidar adicionalmente el papel fisiológico del epidídimo.

Grabaciones de parche de sujeción de células enteras de células epiteliales primarias aisladas del epidídimo

Aquí, presentamos a metodologías para evaluar la integridad de la membrana de spermatozoan, una característica celular asociada con la capacidad de fertilización del esperma. Se describen tres técnicas para la evaluación de fluorimétrico de las membranas del esperma: coloración simultánea con sondas fluorescentes específicas, microscopía de fluorescencia y citometría de flujo avanzada dedicado de esperma. También se presentan ejemplos de la combinación de las metodologías.

Fluorimétrica de técnicas para la evaluación de las membranas del esperma

Aquí, dos ensayos de rendimiento medio para la evaluación de efectos sobre la Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos se describen. Estos ensayos se pueden utilizar para rápidamente y fácilmente grandes cantidades de compuestos de efectos sobre la Ca2 +-reacción señalización y acrosómica en espermatozoides humanos.

Rendimiento medio de selección de ensayos para la evaluación de efectos sobre la Ca2 +-señalización y reacción acrosómica en espermatozoides humanos

Describimos la aplicación de un analizador de flujo extracelular para monitorear los cambios en tiempo real en la glucólisis y la fosforilación oxidativa durante la capacitación del esperma del ratón.

Uso de un analizador de flujo extracelular para medir los cambios en la glucólisis y la fosforilación oxidativa durante la capacitación del esperma del ratón

El modelo de ratón AcroSensE y los métodos de obtención de imágenes de células vivas descritos aquí proporcionan un nuevo enfoque para estudiar la dinámica del calcio en el compartimento subcelular del acrosoma, el espermatozoide, y cómo regulan los pasos intermedios que conducen a la fusión de la membrana y la exocitosis acrosómica.

Imágenes en tiempo real de la dinámica del calcio acrosómico y la exocitosis en espermatozoides de ratón vivos

Campo eléctrico externo provoca una tensión en la membrana de una célula, denominada tensión de la membrana inducida (ΔΦ). Mediante el uso de la tintura potenciométrica di-8-ANEPPS, es posible medir el ΔΦ no invasiva. Este video muestra el protocolo para la medición de ΔΦ con di-8-ANEPPS.

La medición de la tensión de la membrana inducida con Di-8-ANEPPS

Este protocolo describe una técnica rápida para cuantificar la translocación de GLUT4 desde el citoplasma a la membrana plasmática de las células por citometría de flujo.

La medición cuantitativa de la translocación de GLUT4 a la membrana plasmática por citometría de flujo

Aprende la técnica de patch-clamp en espermatozoides de mamíferos para registrar la actividad de canales iónicos como CatSper. Este método permite estudiar la electrofisiología espermática y comprender defectos relacionados con la infertilidad masculina.

Registro de corrientes eléctricas a través de la membrana plasmática de espermatozoides de mamíferos

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