Establecimiento De Un Modelo De Rata De La Oclusión Superior Sagital-Seno A Través De Un Método De Hilo-Embolia
4 de julio de 2021
Aquí, establecemos un modelo nuevo de la rata de Sprague-Dawley (SD) de la trombosis sagital superior del sino (SSS) vía un método del hilo-embolization, y la estabilidad y la confiabilidad del modelo fueron verificadas.
Debido a la falta de un modelo animal ideal, el estudio de CVST es muy limitado. Ahora, un nuevo tipo de modelo de SD-Rata CVST fue establecido con éxito insertando uno mismo hilo-embolization centrípetamente en el sitio inicial de SSS que estandardizó varios o factores de interferencia incontrolables en condiciones clínicas. Después de que la rata fuera anestesiada con éxito por la inyección peritoneal intra, aplique el lubricante oftálmico del ojo del gel después de que la rata se ponga en el marco stereotaxic para proteger las córneas contra la sequedad durante anestesia.
Retire el vello en la parte superior de la cabeza de la rata. Con el fin de realizar este proceso de manera más efectiva, el paso anterior se puede realizar antes en la sala de preparación. Después de que la rata fue anestesiada con éxito por la máquina anestésica, también aplique el lubricante oftálmico estéril del ojo.
Esterilizar la superficie en la parte superior de la cabeza de la rata con 5% de povidona yodo. Alterna esto tres veces con etanol al 75%. Haga una incisión en la piel de unos dos centímetros de largo en el centro de la cabeza.
La fascia se abre con un bisturí. Y luego, desprenda cuidadosamente la fascia superior y el periostio para exponer completamente el cráneo. Confirme la posición de la fontanela anterior, A y la fontanela posterior, B.Use el área entre la sutura coronal y la sutura del codo, como el área de observación del flujo sanguíneo.
Para evitar que el cráneo afecte la observación durante las imágenes de flujo sanguíneo con manchas láser, adelgace el cráneo en el área de observación hasta que los vasos sanguíneos sean claramente visibles. Durante la molienda del cráneo, use una jeringa de temperatura normal para enjuagar la duramadre repetidamente, para evitar una explosión de alta temperatura a la corteza cerebral. Este paso y los siguientes se realizan bajo un microscopio de disección.
En esta figura, el área rectangular bordeada de rojo es el área de observación del flujo sanguíneo. El tamaño del cráneo adelgazado debe ser de aproximadamente un centímetro multiplicado por un centímetro. Y el área rectangular forrada de azul es la ventana de hueso.
Unos seis milímetros multiplicados por cuatro milímetros. El área circular roja es la articulación parietal y la flecha apunta al SSS. Cuando el cráneo se puede ver utilizar pinzas para cuidadosamente las piezas de hueso restantes de la ventana ósea.
Elija una sonda de rosca adecuada, utilice el punto frontal o como punto de enchufe. Puncione cuidadosamente con una aguja de jeringa de 2 milímetros e inserte rápidamente una sonda de hilo en el punto de preparación. En este momento, el ángulo entre el extremo del extremo de la sonda de rosca y el SSS debe ser de aproximadamente 30 a 45 grados.
A continuación, ajuste el ángulo entre el extremo de la sonda de rosca y la SS a cero a 10 grados. E inserte lentamente el SSS en la estructura hasta que la cabeza llegue al extremo posteria de la confluencia sinusal. La respiración rápida puede ocurrir cuando se pincha el SSS.
Si el extremo de la sonda de rosca no se puede insertar rápidamente en el punto de preparación a la vez, use una pequeña gasa o bola de algodón para presionar suavemente el punto de la sonda mientras se desliza lentamente hacia abajo para exponer el punto de preparación con cuidado. Eso se hace, insertar rápidamente en el extremo del cable introducido en el SSS. La flecha azul muestra el estado de la inserción de la sonda en el SSS desde el punto de conexión.
La flecha blanca muestra el cuerpo de la sonda y la flecha roja muestra que es la cabeza. A partir de entonces cortar la parte sobrante de la cola. Suturar la piel de la rata.
Desinfecte la piel tres veces y retire la rata del marco estereotáxico. Utilice la fuente de luz láser para iluminar uniformemente el área de observación del flujo sanguíneo. La imagen registra el proceso dinámico del sondeo de subproceso en el SSS.
En esta figura A y B se muestra una comparación del flujo sanguíneo antes y después de la inserción de embolización de hilos. C muestra que el flujo de sangre en el SSS y las venas del cerebro fueron disminuidos perceptiblemente comparados con ambos en la arteria cerebral media y los tubos capilares. Fije el animal en la mesa de resonancia magnética.
Calibre la posición del cerebro colocando la exploración y realice la exploración de la secuencia de T2WI y mri después de confirmar la posición. Para observar el estado de la punta de prueba del hilo de rosca en el SSS el método montado en la cabeza C2 fue utilizado para visualizar la imagen de T2WI del cerebro de la rata. En esta figura, A, B y C muestran la sonda de rosca en el SSS desde la posición horizontal, la posición sagital y la posición craneal.
La imagen muestra que la sonda de rosca está en su lugar, lo que confirma la embolización del SSS. Como el modelo de trombosis SSS de rata se establece fácilmente minimizando el trauma, ofrece buena estabilidad y permite controlar con precisión el momento químico y la ubicación, es un nuevo tipo ideal de modelo CVST.
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Resumen
Este artículo presenta un modelo novedoso y confiable en ratas Sprague-Dawley (SD) para la trombosis del seno venoso cerebral (CVST), que se dirige específicamente al seno sagital superior (SSS) mediante una técnica de embolización con hilo. El modelo está diseñado para estandarizar las condiciones experimentales, minimizar el trauma y permitir un control preciso sobre el momento y la localización del daño isquémico, abordando así las limitaciones de los modelos animales anteriores de CVST y facilitando el estudio de la fisiopatología de esta afección.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Modelos Experimentales de Accidente Cerebrovascular
- Biología Vascular
Antecedentes
- Los mecanismos de la TVCC no se comprenden bien debido a variables clínicas incontrolables.
- Los modelos animales existentes para la TVCC han producido resultados inconsistentes e incompletos.
- Se necesitan modelos animales estables y estandarizados para avanzar en la investigación de la TVCC.
- Los modelos mejorados pueden ayudar a elucidar los mecanismos fisiopatológicos e informar el diagnóstico y tratamiento.
Objetivo del estudio
- Establecer un modelo novedoso, estable y reproducible de trombosis del seno sagital superior en ratas SD mediante embolización con hilo.
- Minimizar el trauma y estandarizar las variables experimentales en la modelización de la trombosis del seno venoso cerebral.
- Permitir un control preciso del momento y la localización del evento isquémico en el modelo.
Métodos Utilizados
- Las ratas Sprague-Dawley fueron anestesiadas y preparadas para la cirugía.
- Se expuso el cráneo y se creó una ventana craneal mediante adelgazamiento y remoción del hueso sobre el SSS.
- Se insertó una sonda de hilo casera en el SSS con un ángulo controlado para inducir trombosis.
- Se utilizó imágenes de flujo sanguíneo por láser de speckle para monitorear el flujo venoso cerebral antes y después de la embolización.
- Se realizó resonancia magnética (secuencia T2WI) para confirmar la posición de la sonda de hilo y el éxito de la embolización del SSS.
Resultados principales
- El método de embolización con hilo indujo con éxito la trombosis de la SS en ratas SD.
- El modelo demostró una buena estabilidad y reproducibilidad.
- La imagen del flujo sanguíneo mostró una reducción significativa del flujo venoso en la SS y en el cerebro tras la embolización.
- La RM confirmó la colocación precisa de la sonda de hilo y la oclusión efectiva de la SS.
Conclusiones
- El modelo de trombosis SSS en ratas SD es fácil de establecer y mínimamente traumático.
- Proporciona resultados estables y reproducibles, superando las limitaciones de modelos previos.
- Este modelo es valioso para estudiar los mecanismos de la TVC y probar terapias potenciales.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
Los modelos preclínicos confiables son esenciales para reducir los riesgos en las primeras etapas del descubrimiento de fármacos para enfermedades cerebrovasculares y para aclarar los mecanismos de las enfermedades cuando la variabilidad clínica limita la comprensión traslacional. El modelo de embolismo por hilo en ratas de la oclusión del seno sagital superior (SSS) permite la inducción estandarizada y reproducible de trombosis del seno venoso cerebral (CVST), lo que respalda la confianza predictiva en estudios mecanicistas y terapéuticos. Este modelo aborda un punto crítico de inflexión en la fase de descubrimiento al permitir pruebas de hipótesis controladas y una comparabilidad sólida entre estudios.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite investigar la fisiopatología de la TVCS en condiciones controladas y reproducibles.
- Contribuye a reducir riesgos biológicos al minimizar variables de confusión inherentes a la investigación clínica.
- Facilita la validación funcional de dianas terapéuticas para intervenciones candidatas en un sistema relevante a la enfermedad.
Desarrollo de Cribado y Ensayos
- Proporciona una plataforma in vivo validada para la evaluación cuantitativa de los cambios en el flujo sanguíneo cerebral.
- Permite la estandarización del momento y la ubicación del evento isquémico para el cribado farmacológico posterior.
- Facilita imágenes y lecturas de biomarcadores reproducibles para el desarrollo de ensayos.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Se alinea con puntos finales relevantes para la enfermedad en la evaluación traslacional de biomarcadores.
- Asegura la continuidad desde el descubrimiento mecanicista hasta la validación preclínica de hipótesis terapéuticas.
- Reduce el riesgo biológico al avanzar candidatos hacia la investigación clínica.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
Este modelo se integra en la continuidad del descubrimiento, desde estudios mecanicistas iniciales hasta la evaluación preclínica de compuestos líderes, proporcionando una plataforma estandarizada para la comprobación de hipótesis y la investigación traslacional.
- Biología del Descubrimiento: Permite pruebas rigurosas de hipótesis nulas y aclaración de vías en la investigación de la TVCS.
- Detección: Proporciona resultados cuantitativos y reproducibles de flujo sanguíneo e imágenes para la evaluación de compuestos.
- Análisis: Facilita la comparación estadística de los efectos de intervenciones mediante datos de imágenes por resonancia magnética y de láser-espéculo.
- Investigación Traducional: Conecta las fases de descubrimiento y preclínica con puntos finales controlables y relevantes para la enfermedad.
- Reutilización Empresarial: Ofrece un modelo estandarizado y escalable para estudios entre programas y entre sitios.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva y reduce la ambigüedad mecanicista en la investigación de la TVCS.
- Valor operativo: Mejora la reproducibilidad, la estandarización y la escalabilidad de los estudios in vivo.
- Valor estratégico: Mejora la calidad de las decisiones de avance o interrupción y la eficiencia del capital al reducir el riesgo biológico en fases tardías.
- Impacto en la cartera: Permite la priorización y el avance ajustados al riesgo de candidatos terapéuticos para enfermedades cerebrovasculares.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia en técnicas de microcirugía y en imágenes in vivo.
- Necesita acceso a marcos estereotácticos, resonancia magnética (MRI) y sistemas de imágenes de flujo sanguíneo por láser de speckle.
- Exige una estandarización rigurosa entre equipos de los protocolos quirúrgicos y de obtención de imágenes.
- Adaptable a otros modelos de roedores teniendo en cuenta las diferencias anatómicas.
- Las limitaciones potenciales incluyen la variabilidad técnica y la necesidad de entrenamiento especializado.
