Uso del embrión de pollo como una herramienta poderosa en la evaluación de cardiotoxicidades del desarrollo

Hola a todos. Soy Qixiao Jiang, profesor asociado en el Departamento de Toxicología de la Escuela de Salud Pública de la Universidad de Qingdao. En nombre de mi grupo de investigación, voy a presentar los activos del uso del embrión de pollo en el desarrollo de nuestra evaluación de cardiotoxicidad.

El embrión de pollo es un modelo de desarrollo clásico que tiene múltiples ventajas como fácil manipulación, alta accesibilidad, sistema independiente cerrado, etc. Trabajar con múltiples contaminantes ambientales, como el ácido tánico fenólico. Escape diesel, particularmente la materia en los nanotubos de carbono.

Tenemos múltiples métodos de exposición establecidos en el laboratorio, pero por una causa mayor, las evaluaciones funcionales también se realizan de forma rutinaria. En este video, te mostraré los detalles, los métodos de exposición y los métodos de evaluación funcional morfológica. No dude en ponerse en contacto con nosotros si está interesado.

Gracias. Aquí están nuestros métodos de exposición que puedo presentarles. Ahora, el primer método que voy a introducir es una inyección de célula de aire, donde se inyectará directamente en la célula de aire.

Limpie la superficie de los huevos con solución de poli-yoduro. Esta es una solución de poli-yoduro disponible comercialmente, diluida con agua desionizada, 1/5. Y luego, seco la cáscara de huevo con papel de seda, sin fregar.

Es importante porque el fregado romperá su capa protectora en el exterior de la cáscara. Limpié todos los huevos en la habitación oscura y marque la celda de aire con un lápiz. Excluya los huevos con grietas en la cáscara.

También excluya los huevos con células de aire en el costado. Si eso tiene una punta roma, es muy poco probable que eclosionen normalmente. Desinfecte el área de la celda de aire, así como la sonda de metal, con alcohol al 75%.

Límpielos y luego perfore un pequeño orificio en el centro del área de la celda de aire con la sonda. No pegue la sonda profundamente en la celda de aire. En su lugar, solo rompa la cáscara con la punta de la sonda.

Si el orificio aún no es lo suficientemente grande, rompa la cáscara nuevamente en las cercanías del orificio existente, hasta que sea lo suficientemente grande como para permitir la inserción de la punta. Inserte la punta de la pipeta en el orificio con la punta tocando la membrana interna. Lentamente, inyecte la mezcla y manténgala allí durante al menos 10 segundos.

Esto es para permitir que el aceite dispensado se dispense por completo. Y luego retire la punta. Ahora, selle el agujero con un cepillo y una gota de parafina derretida.

Tenga cuidado de no gotear parafina derretida en la memoria interna. Una vez sellados, coloque los huevos en la incubadora hasta que alcancen la etapa embrionaria deseada. El segundo, el método que voy a introducir es la Micro inyección.

En primer lugar, los huevos deben limpiarse y manipularse como se describe en la sección de inyección de aire. Este procedimiento debe realizarse en una capucha esterilizada. Esterilizar el área de la célula de aire y los instrumentos con acetona.

Perfore un pequeño orificio en el centro del área de la celda de aire con la sonda de metal. No pegue la sonda profundamente en la celda de aire, o la memoria interna puede dañarse. Luego, use el mismo proceso para agrandar cuidadosamente el orificio hasta que el diámetro sea de aproximadamente dos milímetros.

Esto puede permitir la confirmación de la relación de la memoria interna. Luego cargue la solución en un microinyectador e inserte cuidadosamente la aguja a través del orificio en la membrana interna durante aproximadamente un total de tres milímetros. Dispense suavemente la solución y luego retire la aguja.

Mantenga la aguja lo más perpendicular posible. Selle el orificio con un pequeño trozo de cinta. Cubra completamente el orificio para evitar la deshidratación del embrión y la muerte durante la incubación posterior.

El tercer método que voy a introducir es la infusión de células de aire. donde se inculca un contaminante de gas en la celda de aire. Limpie y manipule los huevos como se describe en la sección de inyección de células de aire.

Y luego puedes leer los huevos hasta el día embrionario 17. Manipule los óvulos en el día embrionario 17 para marcar el área de la célula de aire. En el día 18 embrionario, saque los huevos de la incubadora, esterilice el área de la célula de aire y los instrumentos, con acetona.

Y luego perfore cuidadosamente dos pequeños orificios en dos lados de la celda de aire. Uno es para inyección de gas o aerosol. La otra es para expandir nuestro aire.

Controle cuidadosamente el tamaño de los orificios, de modo que el lado del orificio de inyección sea suficiente para que se inserte la aguja del catéter, mientras que el diámetro del orificio de expansión debe ser un poco más grande. Aproximadamente un milímetro de diámetro. Ahora esta es la bolsa de muestra que usamos para contener el gas o aerosol objetivo.

Puede sustituir con cualquier dispositivo que utilice. Vierta suavemente 10 ml de gas o aerosol en una jeringa. Y luego, conecte cuidadosamente la jeringa a nuestra aguja del catéter con el control remoto interno de la aguja para que quede suave.

Inserte suavemente esta aguja del catéter en el orificio de infusión. Una vez que esté allí, aplique presión contra la aguja del catéter. Esto es para minimizar la fuga del sitio de inyección.

Se puede colocar otro dedo con el orificio de expulsión para la confirmación de la infusión. Si realiza la infusión suavemente, el flujo de aire del orificio de expulsión debe sentirse fácilmente. Ese es el aire original en la celda de aire que se expulsa.

Cuando termine la infusión, selle ambos orificios inmediatamente. Estas cintas y el retorno de los huevos a su incubadora. Puedo presentar nuestro proceso de evaluación de endpoints.

Anestesiar completamente a los animales con pentobarbital 33 mg/kg. Inyección IP probada por las aperturas. Luego coloque los pollos en la mesa de operaciones.

Esterilizar la zona del abdomen y los electrodos con etanol. Luego, inserte dos electrodos de aguja de dos lados del abdomen de forma sub continua. Asegúrese de que las agujas no entren en la cavidad del abdomen levantando un poco la piel.

E inserte la aguja desde allí. Una vez insertada, empuje con cuidado la aguja hacia adelante hasta que llegue al lado de la cavidad torácica. Asegúrese de que la aguja no se adende profundamente en el cuerpo ni sobresalgan de la piel.

Luego realice las mediciones con un instrumento electrocardiográfico. También se pueden usar otros instrumentos de seminario capaces de ECG. Este es nuestro segundo método de evaluación de punto final es mapear para Motrin.

Esta es la sección transversal del corazón en el camino de HME. Este es el ventrículo correcto con el que vamos a medir. Para hacer esto, usamos dos reglas.

Regla 1 y regla 2. Ahora simplemente copiamos la regla uno a la pantalla y la redimensionamos al tamaño apropiado y luego la rotamos. Y lo movemos para que los dos extremos de la línea horizontal descansen sobre los 2 extremos de las 3 paredes del ventrículo derecho.

Y ahora tenemos siete líneas de medición que atraviesan nuestras tres paredes del ventrículo derecho. Ahora también copiamos la regla secundaria a la imagen. También lo redimensionamos un poco y lo rotamos y reemplazamos para que se coloque igual.

Esta línea horizontal va paralela a la pared exterior del ventrículo derecho. Y la perpendicular cruzaría el punto hasta donde las líneas de materia blanca de la regla se encuentran con la pared interior o el ventrículo derecho. Y luego hacemos puntos de medición para que se pueda medir más adelante con la imagen J.Repetimos este proceso 7 veces por muestra, de modo que nuestra medición representativa del ventrículo derecho.

Te mostraré un resumen de los resultados actuales. Esta es la inyección de PFOA en el huevo antes de la incubación, y se puede ver que con el aumento de los de la inyección la concentración sérica de LPF en suero aumentó de manera efectiva. Según la demostración, la efectividad, de la micro inyección.

Se puede ver que A es control, y la B, es donde se ha inyectado el antivirus expreso en gran fluorescencia q de la proteína. Se puede ver una fuerte fluorescencia. Y esta es la demostración de la efectividad de la infusión de epitelio.

Puede ver que con la infusión, se han observado cambios dramáticos de fibra óptica en el tejido del miocardio. Bien. Y también puede ver que los intervalos R-R de los pollos para incubar 0, 1 y 2 semanas. También cambió significativamente después de la infusión con escape diesel.

Indicando que tiene en cuenta esto, este método. Aquí, también puede ver que la efectividad de la infusión de epitelio en este ejemplo. puede ver que los ventrículos derechos del corazón aumentaron efectivamente después de ser infundidos en aerosol con escape Diesel.

Y también, por supuesto, aquí estamos utilizando los métodos histomorfométricos. Solo te lo mostramos. Esto es bastante efectivo. Bien.

Estos son todos los métodos que te voy a presentar. Espero que esto pueda facilitar el trabajo de otras personas con embriones de pollo como una poderosa herramienta de investigación en la Toxicología del Desarrollo. Que tengas un buen día.